血清VAP-1、VCAM-1在甲状腺癌患者中的变化及意义

张燕妮,胡玉海

湖北省武汉市汉口医院检验科,湖北武汉 430013

甲状腺癌是临床上最常见的恶性内分泌系统肿瘤,流行病学显示,近年来甲状腺癌在全球范围内的发病率均呈明显上升趋势。尽管有75%～85%的甲状腺癌患者为甲状腺乳头状癌,预后较好[1]。然而由于肿瘤侵袭性较强,长期随访显示超过25%的甲状腺乳头状癌患者经过常规治疗后仍会出现复发和转移,其中大部分需经二次手术并辅以放射治疗和靶向药物治疗;另一部分仍无法根治,最终死亡[2]。甲状腺髓样癌和甲状腺未分化癌因为侵袭性较强,进展迅速,预后较差[3]。因此,深入研究甲状腺癌进展标志物,对早期诊断和疾病病情监测,以及改善患者预后具有十分重要的作用。

血管黏附蛋白-1(VAP-1)为内皮细胞黏附分子,主要参与白细胞滚动黏附和向炎症部位转移,其水平高低与胃癌、肝癌等疾病的复发和预后差密切相关[4-5]。血管细胞黏附分子-1(VCAM-1)是一类通过介导白细胞黏附等导致血管内皮细胞功能受损的黏附分子,与多种肿瘤的预后也密切相关[6]。研究表明VAP-1和VCAM-1的水平与甲状腺癌细胞侵袭、黏附和远处转移密切相关[7-8]。因此本研究拟通过比较血清VAP-1和VCAM-1在甲状腺癌患者、甲状腺腺瘤患者和健康者间的变化,进而评估这2项指标联合检测对甲状腺癌的诊断价值,为临床诊断提供参考。

1 资料与方法

1.1一般资料 选择2020年7月至2022年5月在本院行甲状腺全切术并经病理检查确诊的甲状腺癌患者57例作为甲状腺癌组,另选取同期确诊的甲状腺腺瘤患者47例作为甲状腺腺瘤组,同期体检健康者30例作为健康对照组。甲状腺癌组:男13例,女44例;年龄19～69岁,平均(43.77±11.85)岁;甲状腺乳头状癌32例,甲状腺滤泡状癌14例,甲状腺髓样癌10例,甲状腺未分化癌1例;TNM分期,Ⅰ～Ⅱ期39例,Ⅲ～Ⅳ期18例;有淋巴结转移36例。甲状腺腺瘤组:男16例,女31例;年龄20～52岁,平均(38.60±8.16)岁。健康对照组:男8例,女22例;年龄21～53岁,平均(37.57±8.62)岁。3组研究对象性别、年龄比较,差异无统计学意义(P>0.05),具有可比性。甲状腺癌组纳入标准:(1)为首次确诊甲状腺癌,术前未接受其他相关治疗;(2)未合并高血压、心脏病等心脑血管疾病;(3)临床资料完整。排除标准:(1)合并其他系统相关疾病;(2)患有传染性疾病;(3)合并其他甲状腺相关疾病;(4)近期服用可能影响本研究结果的药物。本研究符合相关医学伦理学要求并获得本院医学伦理委员会批准。

1.2仪器与试剂 PW350全自动洗板机(深圳市汇松科技发展有限公司),RT-6100全自动酶标仪(深圳雷杜生命科学股份有限公司),BY-300C低速台式高速离心机(北京白洋医用离心机有限责任公司),DW-86L338J医用超低温保存冰箱(青岛海尔生物医疗股份有限公司),人VAP-1 酶联免疫吸附试验(ELISA)检测试剂盒(EK1646,武汉博士德生物工程有限公司),人VCAM-1 ELISA检测试剂盒(EK0537,武汉博士德生物工程有限公司)。

1.3方法 甲状腺癌患者分别于术前和术后第3天晨起空腹采集外周静脉血3 mL,甲状腺腺瘤组和健康对照组均晨起空腹采集外周静脉血3 mL,3 000 r/min离心15 min,取血清于-80 ℃冰箱冻存备用。采用ELISA检测血清VAP-1和VCAM-1水平。ELISA严格按照产品说明书进行操作。具体如下:每孔加入250 μL稀释血清 (即25 μL血清加入225 μL标本稀释液),封板后37 ℃孵育90 min,吸弃酶标板内液体,每孔加入100 μL生物素标记抗人抗体,37 ℃孵育60 min,1×洗涤缓冲液洗板3次,每孔加入100 μL ABC工作液,37 ℃孵育30 min,1×洗涤缓冲液洗板5次,最后每孔加入90 μL TMB显色液,37 ℃避光25 min,每孔加入100 μL终止液,使用酶标仪在450 nm检测吸光度(A)。

2 结 果

2.1各组血清VAP-1和VCAM-1水平比较 甲状腺癌组术前血清中VAP-1水平显著低于甲状腺腺瘤组和健康对照组(P<0.05),而血清VCAM-1水平显著高于甲状腺腺瘤组和健康对照组(P<0.05)。血清VAP-1和VCAM-1水平在甲状腺腺瘤组和健康对照组间差异无统计学意义(P>0.05)。见表1。

表1 各组血清中VAP-1和VCAM-1水平检测比较

2.2甲状腺癌组手术前后血清VAP-1和VCAM-1水平比较 和术前相比,甲状腺癌组术后血清VAP-1水平显著升高(P<0.05),而血清VCAM-1水平显著降低(P<0.05)。见表2。

表2 甲状腺癌组手术前后血清中VAP-1和VCAM-1水平比较

2.3不同临床病理参数的甲状腺癌患者术前血清VAP-1和VCAM-1水平比较 术前血清VAP-1、VCAM-1水平在不同肿瘤最大径、肿瘤病理类型、TNM分期、肿瘤分化程度和有无淋巴结转移的甲状腺癌患者中差异有统计学意义(P<0.05),而不同年龄、性别的甲状腺癌患者中术前血清VAP-1、VCAM-1水平差异无统计学意义(P>0.05)。见表3。

表3 不同临床病理参数的甲状腺癌患者术前血清VAP-1和VCAM-1水平比较

2.4血清VAP-1和VCAM-1诊断甲状腺癌的ROC曲线分析 ROC曲线分析结果显示,血清VAP-1、VCAM-1单项检测诊断甲状腺癌的曲线下面积(AUC)分别为0.883(95%CI:0.828～0.939)、0.698(95%CI:0.604～0.793),2项联合检测诊断甲状腺癌患者的AUC为0.904(95%CI:0.854～0.954)。见表4和图1。

图1 血清VAP-1和VCAM-1检测诊断甲状腺癌的ROC曲线

表4 血清VAP-1和VCAM-1单项及联合检测诊断甲状腺癌的效能

3 讨 论

据国家癌症中心最新统计数据显示,我国甲状腺癌不仅发病率和病死率呈现持续上升趋势,而且5年生存率与发达国家相比仍有14%左右的差距。因此加大高危人群的早期筛查和诊治势在必行。目前超声检查由于其具有无创、易操作、快速等诸多优势,成为临床上对甲状腺癌筛查的首选方法。但是众多研究表明,单纯依靠超声方法对甲状腺癌诊断的灵敏度、特异度和准确度均不足80%[9-10]。这与超声检查主要依据病变形态、大小、病灶钙化、病灶血流状况等指标进行诊断密切相关。而细针穿刺活检技术,由于其可以在超声引导下准确判断组织病变状况,故具有较好的临床诊断特异度,但是由于其具有有创性,且研究显示部分经该技术穿刺的患者会增加淋巴结转移、骨转移和肺转移等情况的发生,增加致死率[10]。因此寻找血液标志物有其重要的临床意义。

近年来有关甲状腺癌患者血清标志物、患者清除甲状腺癌术后的残余甲状腺组织(简称为清甲)效果、清甲治疗后对患者预后的影响等研究已取得了较大进步,如促甲状腺激素(TSH)、甲状腺球蛋白(Tg)和甲状腺球蛋白抗体(TgAb)等已在临床广泛应用,其中Tg被美国甲状腺协会(ATA)等推荐为临床上行甲状腺癌全切术后复发及转移的重要监测指标[11]。但由于Tg水平受到TSH调控,同时易受患者生理状态、血液中其他免疫因子的影响,故在2015版ATA指南[12]及我国关于甲状腺癌的指南[13]中已明确术前血清Tg水平增高不能作为诊断甲状腺癌的依据。但鉴于术后Tg水平升高可能提示甲状腺癌术后体内残留甲状腺组织或癌组织,且Tg的最佳区分水平仍未明确,故术后Tg水平仍不足以用于监测甲状腺癌的预后,需辅以影像学证据[14-15]。因此,有必要筛选更为敏感的血清生物学标志物来辅助诊断和监测甲状腺癌。

VAP-1是一种内皮黏附分子,可促进淋巴细胞黏附于血管内皮,还可以通过调节转录因子、趋化因子和其他黏附分子来调节炎症微环境[16]。在结直肠癌患者中,癌组织的VAP-1 无论是在mRNA水平还是蛋白水平均显著降低,血清VAP-1水平也显著低于健康对照者[17]。因此本研究分析了甲状腺癌患者血清VAP-1的水平,结果显示甲状腺癌患者血清VAP-1水平也显著降低,术后VAP-1水平明显增高,术前血清VAP-1水平在不同肿瘤最大径、肿瘤病理类型、TNM分期、肿瘤分化程度和有无淋巴结转移的甲状腺癌患者中差异有统计学意义(P<0.05),而不同年龄、性别的甲状腺癌患者术前血清VAP-1水平差异无统计学意义(P>0.05)。采用ROC曲线分析甲状腺癌患者血清VAP-1水平对甲状腺癌的诊断价值,结果显示血清VAP-1单项检测诊断甲状腺癌的AUC分别为0.883(95%CI:0.828～0.939)。这说明甲状腺癌患者血清VAP-1水平可以很好地用于诊断甲状腺癌,同时也是甲状腺癌患者疾病进展的一个重要标志物。

VCAM-1可通过介导细胞间及细胞与间质之间的黏附从而参与细胞分化、炎症、对移植组织的反应和肿瘤扩散等多种生物学过程[18]。前期研究表明在甲状腺乳突状癌中VCAM-1水平升高,其水平增加可能与组织分化、T细胞活化和肿瘤细胞的传播密切相关,但确切作用仍不清楚[19]。在本研究中发现甲状腺癌患者VCAM-1水平显著高于甲状腺腺瘤患者和健康对照者。与术前相比,术后甲状腺癌患者VCAM-1水平显著降低。通过对不同病理类型的甲状腺癌进行研究,发现不同甲状腺癌类型的患者血清VCAM-1水平差异较大,未分化型甲状腺癌患者血清VCAM-1水平显著高于分化型甲状腺癌。此外甲状腺癌患者术前血清中VCAM-1水平在不同肿瘤最大径、肿瘤病理类型、TNM分期、肿瘤分化程度和有无淋巴结转移的甲状腺癌患者中差异有统计学意义(P<0.05),而不同年龄、性别的甲状腺癌患者术前血清VCAM-1水平差异无统计学意义(P>0.05)。采用ROC曲线分析血清VCAM-1对甲状腺癌的诊断价值,结果显示VCAM-1单项检测诊断甲状腺癌患者的AUC为0.698(95%CI:0.604～0.793)。

ROC曲线分析显示血清VAP-1和VCAM-1联合检测诊断甲状腺癌的AUC为0.904(95%CI:0.854～0.954),大于2项指标单项检测,因此血清VAP-1和VCAM-1联合检测可用于辅助临床对甲状腺癌的早期诊断和疾病进展的判断,这样有助于临床对不良预后甲状腺癌患者早期采取必要手段进行干预治疗,进而提升患者生存率。

综上所述,本研究发现甲状腺癌患者血清VAP-1水平明显降低, VCAM-1水平明显升高,这2项指标的水平在不同肿瘤最大径、肿瘤病理类型、TNM分期、淋巴结转移和肿瘤分化程度的甲状腺癌患者中有差异。VAP-1和VCAM-1联合检测可以提高对甲状腺癌早期诊断的效能,有助于临床早期诊断和监测疾病进展。