系统性红斑狼疮患者血清骨硬化蛋白及Dickkopf-1水平与病情严重程度的关系

唐玉洁, 唐 勇, 胡 庆

(四川省遂宁市中心医院 肾内科, 四川 遂宁, 629000)

系统性红斑狼疮(SLE)是慢性系统性自身免疫疾病,女性较为常见[1]。SLE病情程度具有异质性,轻者可仅有蝶形红斑、全身关节疼痛,重者可累及全身多系统脏器,导致肾衰竭、狼疮性脑病等并发症,最终导致死亡[2]。血清骨硬化蛋白(Sclerostin)由SOST基因编码,位于人类17号染色体,其能够通过抑制Wnt/β-连环蛋白通路,参与遗传代谢性骨病、血管钙化等疾病的病理过程[3]。研究[4]发现, SLE患者中血清Sclerostin表达升高能够增加罹患血管硬化及心血管疾病的风险,是潜在的SLE预后相关血清标志物。Dickkopf-1(DKK-1)是一种分泌型糖蛋白,位于人10号染色体,功能与Sclerostin类似,也是Wnt信号通路的外源性抑制蛋白,参与炎症反应调节、动脉粥样硬化等病理生理过程[5]。研究[6]发现,狼疮性肾炎患者血清DKK-1表达升高,是新的狼疮性肾炎的早期血清标志物。本研究分析SLE患者血清Sclerostin和DKK-1的水平,分析两者与SLE病情严重程度的关系,现报告如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料

选取本院2020年1月—2022年1月收治的126例SLE患者为SLE组。依据SLE疾病活动度评分(SLEDAI)[7], 将SLE组患者又分为轻度活动组(SLEDAI评分0～9分)46例、中度活动组(SLEDAI评分10～14分)42例和高度活动组(SLEDAI评分≥15分)38例。纳入标准: ① SLE的诊断符合2019年美国风湿病学院制定的系统性红斑狼疮诊治标准者[8]; ② 患者及家属对本研究知情同意,并签署知情同意书; ③ 临床资料完整,患者及家属能够配合本研究。排除标准: ① 合并其他恶性肿瘤者; ② 合并类风湿性关节炎等自身免疫性疾病者; ③ 合并人类免疫缺陷病毒(HIV)、乙型肝炎病毒(HBV)或严重感染性疾病者; ④ 妊娠期或哺乳期女性患者。SLE组男12例,女114例; 年龄为23～78 岁,平均(42.65±4.68)岁; 病程为1～7年,平均(2.37±1.18)年; 体质量指数为21.7～25.9 kg/m2, 平均(23.28±0.81) kg/m2。另选取同期健康志愿者70例作为对照组,其中男7例,女63例; 年龄为22～79岁,平均(41.13±5.03)岁; 体质量指数为21.3～26.0 kg/m2, 平均(23.21+0.84) kg/m2。SLE组与对照组的性别、年龄和体质量指数比较,差异无统计学意义(P>0.05)。本研究已通过本院医学伦理委员会批准(批件号: 2019-035)。

1.2 检测方法

采用酶联免疫吸附实验(ELISA)检测血清Sclerostin、DKK-1水平。取SLE组及对照组清晨空腹静脉血约4 mL, 3 500 转/min离心10 min, 离心半径10 cm, 分离上层血清。血清Sclerostin ELISA试剂盒购自上海赛培森生物公司,型号SPS-11252。血清Sclerostin ELISA试剂盒购自上海沪震生物公司,型号HZ-0113。实验步骤严格按照试剂盒说明书进行。

1.3 观察指标

收集所有患者的性别、年龄、体质量指数及病程等一般资料。采用德国贝克曼DxH900全自动五分类血液分析仪检测白细胞计数、淋巴细胞计数、血红蛋白、血小板及红细胞沉降率。采用ELL-DYN 3700全自动生化分析仪检测血清补体C3、C4以及血尿素氮、血肌酐、24 h尿蛋白,采用间接免疫荧光法检测抗双链DNA抗体(抗dsDNA抗体)。

1.4 统计学分析

2 结 果

2.1 对照组和SLE组血清Sclerostin、DKK-1水平及临床指标比较

SLE组血清Sclerostin、DKK-1、红细胞沉降率、抗dsDNA抗体高于对照组,白细胞计数、血红蛋白、淋巴细胞计数、血小板、补体C3及C4水平低于对照组,差异有统计学意义(P<0.01)。见表1。

表1 对照组和SLE组血清Sclerostin、DKK-1水平及临床指标比较

2.2 SLE组患者血清Sclerostin、DKK-1水平与临床指标的相关性

Pearson相关性分析结果显示, SLE组患者血清Sclerostin、DKK-1水平与白细胞计数、血红蛋白、淋巴细胞计数、血小板、补体C3及C4呈负相关(P<0.01), 与红细胞沉降率、抗dsDNA抗体呈正相关(P<0.01)。见表2。

表2 SLE组血清Sclerostin、DKK-1水平与临床指标的相关性

2.3 不同疾病严重程度SLE患者血清 Sclerostin、DKK-1水平比较

高度活动组患者血清Sclerostin、DKK-1水平高于中度活动组和轻度活动组,中度活动组患者血清Sclerostin、DKK-1水平高于轻度活动组,差异均有统计学意义(P<0.05)。见表3。

表3 不同疾病严重程度SLE患者血清Sclerostin、DKK-1水平的比较

2.4 影响SLE疾病严重程度的因素

以SLE患者疾病严重程度为因变量(1=高度活动, 0=轻中度活动),以血清Sclerostin、DKK-1为自变量,进行多因素Logistic回归分析,结果显示血清Sclerostin、DKK-1是影响SLE疾病严重程度的因素(模型1)。以白细胞计数、血红蛋白、红细胞沉降率、淋巴细胞计数、血小板、补体C3、补体C4、抗dsDNA抗体同时校正(模型2),结果显示血清Sclerostin、DKK-1升高是影响SLE疾病严重程度的独立危险因素。见表4。

表4 多因素Logistic回归分析影响SLE疾病严重程度的因素

2.5 血清Sclerostin、DKK-1以及二者联合对SLE疾病高度活动的评估价值

血清Sclerostin联合DKK-1对SLE疾病高度活动预测的曲线下面积(AUC)为0.919 (95%CI: 0.862～0.956), 高于血清Sclerostin、DKK-1单一指标的0.833(Z=4.978, 95%CI: 0.809～0.851,P<0.001)、0.841(Z=4.213, 95%CI: 0.810～0.867,P<0.001)。见表5、图1。

图1 血清Sclerostin、DKK-1及二者联合预测SLE疾病高度活动的ROC曲线

表5 血清Sclerostin、DKK-1及二者联合对SLE疾病高度活动的预测价值

3 讨 论

SLE是自身免疫介导的弥漫性结缔组织病。SLE疾病活动度的评估对于指导临床治疗、监测病情及改善预后至关重要。目前对于SLE疾病活动度的评估主要采用SLEDAI评分、英岛狼疮评定组指数等[9], 但上述评估SLE疾病活动度的评分方法费用较高,重复进行病情活动度监测可能会对患者造成较大的经济负担和精神压力。

Wnt通路是参与细胞内信号传导和转录调控的重要信号通路。研究[10]发现, SLE患者外周血CD4+T淋巴细胞中存在Wnt通路的基因异常表达的现象,导致T细胞增殖和分化异常,参与促进SLE自身免疫的发生。Sclerostin是一种Wnt/β-连环蛋白途径的抑制因子,主要由骨细胞、血管内皮细胞等分泌产生,能够抑制成骨细胞分化及骨质钙化过程[11]。近年来研究[4, 12]发现,在类风湿关节炎、SLE等自身免疫性疾病中存在Sclerostin表达升高的现象,其能够通过促进血管钙化来增加患者心血管疾病风险,是新的血清标志物。本研究中, SLE患者血清Sclerostin水平升高,并与SLE疾病严重程度有关,提示Sclerostin参与SLE疾病的发生发展过程。分析其机制为: SLE患者机体炎症因子水平升高刺激骨细胞分泌Sclerostin增多,导致血清Sclerostin水平升高[13]。骨髓中的B细胞发育受间充质干细胞和成骨细胞产生的Sclerostin的调节,血清Sclerostin水平升高能够影响骨髓中支持造血干细胞和B细胞的发育及分化过程,导致自身免疫疾病的发生。有学者[14]在全身性敲除Sost-/-基因(Sclerostin的编码基因)的小鼠中观察到脾脏髓外造血,并且骨髓中白细胞介素-1β及白细胞介素-6等促炎细胞因子水平增加,促进自身免疫性疾病的发生发展。抗dsDNA抗体滴度增高及补体C3、C4降低是SLE活动的重要标志之一,有助于评估SLE病情活动度。本研究证实血清Sclerostin与抗dsDNA抗体呈正相关,与补体C3、C4呈负相关,表明血清Sclerostin可能是潜在的评估SLE疾病严重程度的标志物。本研究中,血清Sclerostin升高是影响SLE疾病严重程度的独立危险因素,提示检测Sclerostin有助于评估SLE疾病严重程度。血清Sclerostin升高诱导B淋巴细胞的异常活化,导致大量自身抗体产生,同时促进SLE患者冠状动脉等血管钙化,增加心血管疾病发生的风险[12, 15]。

DKK家族包括DKK 1～4这4个蛋白成员,作为前体蛋白能够被蛋白水解酶裂解激活。DKK-1是该家族中研究最多的成员,其可以与LRP-5/6结合,抑制Wnt信号传导,是Wnt信号过度激活疾病的潜在治疗靶点[16-17]。研究[6, 18]发现,在类风湿性关节炎、SLE等自身免疫性疾病中,血清DKK-1表达升高,特别是在疾病活动期表达升高更为显著。本研究中, SLE患者血清DKK-1水平升高,并与SLE疾病严重程度有关,表明DKK-1促进SLE疾病的发生发展。SLE中患者血清DKK-1表达升高的机制可能与DKK-1基因多态性有关。研究[18]发现,DKK-1基因rs1896368位点突变导致DKK-1转录表达增加,患者血清DKK-1水平显著升高,加重自身免疫炎症反应程度。此外, SLE患者血清及肾组织中DKK-1水平升高导致外周血CD4+T细胞β-连环蛋白转录活性降低,促进肾小管上皮细胞和肾间质细胞的凋亡,促进狼疮性肾炎的发生[19]。本研究证实,SLE患者血清DKK-1水平与抗dsDNA抗体及补体C3、C4水平有关,提示血清DKK-1是潜在的评估SLE疾病严重程度的指标。血清DKK-1能够通过促进Th1细胞和Th17细胞分泌细胞因子,促进机体的免疫反应及自身抗体的产生,参与SLE的发生发展[20]。本研究中,血清Sclerostin联合DKK-1对SLE疾病严重程度预测的AUC为0.919, 敏感度和特异度分别为0.902、0.781, 表明血清Sclerostin联合DKK-1对评估SLE疾病严重程度具有较高的临床应用价值。

综上所述,SLE患者血清Sclerostin、DKK-1表达升高,二者与SLE疾病严重程度有关,是影响SLE疾病严重程度的独立危险因素。血清Sclerostin联合DKK-1对SLE疾病严重程度具有较高的预测价值。