不同试验条件对巴马拟缨鱼性激素水平的影响

古昌辉，许明珠，程光平，，程蔓，韦云勇，麻艳群*

（1.广西大学动物科学技术学院/广西高校水生生物健康养殖与营养调控重点实验室，广西 南宁 530004；2.广西海洋研究所有限责任公司，广西 北海 536000）

巴马拟缨鱼（Pseudocrossocheilus bamaensis），属鲤形目（Cyprinformes），鲤科（Cyp-rinidae），野鲮亚科（Labeoninae），拟缨鱼属（Pseudocrossocheilus）[1]，因富含脂肪，又称巴马油鱼。主要分布于广西境内巴马县的盘阳河和红水河的都安江段，喜穴居，一般晨昏活动，冬季进洞穴越冬，于春末夏初洪水期繁殖，在自然水域多以固着藻类为食[2]，体型小而肥，是广西土著小型经济特色鱼类[3]。研究表明[4]，巴马拟缨鱼肌肉中蛋白含量高，肉质细嫩，营养丰富，脂肪含量适中，富含各类氨基酸及不饱和脂肪酸，具有较高的营养价值。

鱼类的生长与繁殖，需要消耗大量的营养物质。研究表明[5]，高蛋白含量的日粮，有利于异育银鲫雌鱼卵细胞的发育。脂肪含量为14%的配合饲料，可以促进海湾扇贝（Argopecten irradians）的性腺发育[6]。在自然界中，河水的流速能够刺激鱼类产卵行为[7-8]。在人工养殖条件下，流水刺激，会加强四大家鱼亲鱼的性细胞质量[9-10]。此外，光照、产卵场所基质、盐度等外源因子，均会对性腺的发育造成不同的影响。现探讨不同试验条件对巴马拟缨鱼血液性激素水平的影响，以期为巴马拟缨鱼生理生态学、规模化人工繁殖研究，提供科学依据。

1 材料与方法

1.1 时间与地点

2020 年6 月，试验周期365 d。试验地位于广西大学水产养殖基地。

1.2 试验材料

选择4 口圆形水泥池（直径3.0 m，池高1.4 m，水深0.8 m），面积均为7.1 m2，进、排水及供气（气控）设施完善，养殖用水均为经曝气的自来水。试验鱼采自红水河广西都安河段的野生巴马拟缨鱼，于6 月2 日运回广西大学水产养殖基地，经消毒处理、暂养和驯食配合饲料后，随机分入试验池养殖，各池放养量均为150 尾。雄鱼初始平均体质量（88.20±4.03）g，初始平均体长（26.35±2.10）cm；雌鱼初始平均体质量（112.40±8.05）g，初始平均体长（29.83±2.28）cm。饲料为海大容川牌对虾2 号沉性饲料（粗蛋白质≥47.0%、粗灰分≤18.0%、0.8≤钙≤4.0%、水分≤10.0%、粗纤维≤3.5%、总磷≥1.2%、粗脂肪≥5.0%、赖氨酸≥2.8%）。

1.3 试验设计

设A、B、C 和D 4 个试验组（未设平行组）和E对照组。各组试验条件：A 组投喂“红虫+对虾2 号料”（9∶1）；B 组采用“混合水流”（涌流+旋流），用充（氧）气管从池底堆积的卵石堆底端自下向上充气，产生涌流，用小型水泵（85 W）于池内抽水并沿圆形池壁切线方向“推水”产生旋流，流速0.15 m/s，投喂对虾2 号料；C 组采用“红光”光照，用600 nm LED灯作光源，光色为红光，光照强度2 000 lx，光∶暗=12L∶12D（12L 为07：00—19：00，12D 为19：00 至次日07：00），投喂对虾2 号料；D 组采用“粗沙+卵石底质”（底质厚10 cm，粗沙面积∶卵石面积=50%∶50%），投喂对虾2 号料；E 组为试催产当天，从红水河广西都安河段采获并运回试验基地野生巴马拟缨鱼。

各组均为自然水温（16~30 ℃）。A 组（红虫+对虾二号料）日投饲率为4%，B、C、D 组对虾2 号料日投饲率1.3%~1.5%，每日投饲1 次（20：00 前后）。每周换水1 次，每次换水量约为原池水量的1/3。养殖全程开启增氧机持续充气增氧，保持池水ρ（溶解氧）>5 mg/L。

2021 年6 月18 日（推测的繁殖季节），从A、B、C、D 各组随机抽取6 尾（3 雌和3 雄）共24 尾；从E组随机抽取3 雌和3 雄共6 尾，采血测定性激素含量。从各试验组随机抽取3 雌和3 雄亲鱼共24 尾，用相同的催产剂[1 kg 雌鱼催产剂型及剂量：促黄体素释放激素（LHRH-A3）10 μg+注射用多情素绒促性素（I）（HCG）2 500 IU+多潘立酮注射液（DOM）15 mg]，雄鱼催产剂量为雌鱼的1/2。注射激素72 h后，分别采集各组催产亲鱼血样，先用含间氨基苯甲酸乙酯甲磺酸盐（MS-222），将待采血亲鱼麻醉8～10 min，然后采用尾椎取血法采血，室温放置1 h，于3 500 r/min 离心10 min，结束后吸取上清液保存。采用双抗体夹心法测定样本鱼血清性激素水平。具体操作方法参照南京建成试剂盒说明书。

1.4 检测指标

雌二醇（E2）雌三醇（E3）孕酮（P）雌酮（E1）睾酮（T）。

1.5 数据分析

采用Microsoft Excel 2016 处理试验数据后，于SPSS25.0 软件进行单因素方差分析（One-way ANOVA）和多重比较（LSD 法），并判断在0.05 水平上差异的显著性，P>0.05 为差异不显著，P<0.05 为差异显著。试验结果用“平均数±标准差”表示。

2 结果与分析

2.1 各组巴马拟缨鱼性激素水平

2.1.1 雌鱼性激素

各组巴马拟缨鱼雌鱼（催产前）性激素水平见表1。

表1 各组雌鱼催产前性激素水平①

E2：相较于E 组，C 组的E2含量提高了0.5%，A组最低，下降了51.7%。C 组E2含量最高，比A、B、D组分别提高51.9%、6.0%和5.2%。分析表明，C 组最利于雌鱼E2的合成，A 组可能会抑制E2的合成，其抑制机理还有待研究。

E3：与E 组比较，E3含量除D 组略为上升外，其余各组均显示降低，其中B 组最低，下降了35.7%；D 组E3比A 组、B 组和C 组 分 别提高35.7%、64.2%、和10.2%，表明D 组有利于雌鱼E3的合成。比较各组间的E3含量，D 组最高，B 组最低，但差异不显著（P>0.05）。

P：A 组P 最大，C 组最小，与E 组比较，A、B、C和D 组的P 含量分别提高了13.5%、13.1%、7.5%和11.5%；各组间P 含量比较，A 组最高，比B 组、C 组和D 组分别提高0.5%、5.6%和1.9%，组间差异不显著。表明A 组较利于雌鱼P 的合成。

E1：与E 组比较，B 组E1提高33.7%，其余组均呈降低趋势，其中A 组、C 组和D 组分别降低34.8%、7.0%和32.2%；各组间比较，在B 组E1最高，比A 组提高56.8%，差异显著（P＜0.05），比C组、D 组和分别提高38.3%、55.0%，但差异不显著（P＞0.05）。从E1含量的绝对值看，B 组较有利于雌鱼E1合成。

2.1.2 雄鱼性激素

各组巴马拟缨鱼雄鱼T 变化见表2。由表2 可见，各试验组T 含量较E 组均呈下降趋势，差异显著（P＜0.05）。其中B 组最低，降幅达56.0%，D 组相对下降幅度较小，为45.4%。各组间，D 组T 含量最高，比A、B 和C 组分别提高21.3%、24.0%和5.4%。各试验组雄鱼T 含量远未达到E 组水平。总体上，D组较有利于促进T 的合成。

表2 各组雄鱼睾酮含量①

2.2 各组巴马拟缨鱼催产前后性激素变化

2.2.1 雌鱼催产前后性激素变化

各组巴马拟缨鱼雌鱼催产前后性激素变化见图1（a）（b）（c）（d），图中柱上无字母表示催产前后组间差异不显著（P＞0.05），字母不同表示催产前后组间差异显著（P＜0.05）。由图1 可见，催产后，A 组E2升高36.64%，催产前后差异显著（P＜0.05），B、C、D 组分别下降3.3%、43.18%和12.08%，催产前后差异不显著（P＞0.05）；E3含量在A、B 组分别提高17.60%、44.48%，其中B 组催产前后差异显著（P＜0.05），在C、D 组分别降低37.75%、8.38%，催产前后差异不显著（P＞0.05）；P 含量在A、B 组分别降低1.90%、6.80%，在C、D 组上升，分别上升6.25%、0.87%，催产前后差异不显著（P＞0.05）；E1含量在A、B 分别下降了12.88%、54.62%，中B 组催产前后差异显著（P＜0.05），在C、D 组分别上升了48.62%、50.65%，催产前后差异显著（P＜0.05）。分析表明，注射催产剂有助于提高B 组E3以及C、D 组E1含量。

图1 各组巴马拟缨鱼雌鱼催产前后性激素含量变化

2.2.2 雄鱼催产前后T 含量变化

各组巴马拟缨鱼雄鱼催产前后T 含量变化见图2，图中柱上无字母表示催产前后组间差异不显著（P＞0.05），字母不同表示催产前后组间差异显著（P＜0.05）。由图2 可见，催产后，T 含量在A、B、C、D 分别下降了17.15%，17.39%，19.69%和35.73%，其中D 组催产前后差异显著（P＜0.05）。分析表明，各组注射激素，均会抑制巴马拟缨鱼雄鱼T 的合成，D 组抑制作用更明显。

图2 各组巴马拟缨鱼雄鱼催产前后T 含量变化

2.3 人工催产对各组巴马拟缨鱼性激素水平的影响

2.3.1 雌鱼

各组巴马拟缨鱼雌鱼催产后激素变化见表3。由表3 可见，鱼催产后B 组E2含量最高，C 组最低，组间差异不显著（P＞0.05）；P 含量亦为C 组最高，B组最低，组间差异均不显著（P＞0.05）；E3含量在B 组最高，C 组最低，B 组和C 组间差异显著（P＜0.05），其余组间差异不显著（P＞0.05）；E1含量在C 组最高，A 组最低，C、D 组与A、B 组差异显著（P＜0.05）。分析表明，注射催产剂，有助于促进B 组培育条件下的E3以及C 组和D 组培育条件下E1的合成。

表3 各组雌鱼催产后性激素水平①

2.3.2 雄鱼

各组巴马拟缨鱼雄鱼注射催产剂后T 含量变化见表4。

表4 各组催产后雄鱼性激素水平

由表4 可见，催产后，A 组T 最高，D 组最低，但各组间无显著差异（P＞0.05）。表明注射激素，在促进或抑制巴马拟缨鱼雄鱼T 合成方面，与各组的试验条件关系不大。

3 讨论

3.1 各组巴马拟缨鱼性激素水平

激素是由机体内分泌腺或内分泌细胞直接分泌到血液和淋巴中，对一定器官或组织产生兴奋或抑制作用，协调机体内部生理机能的特殊化学物质[11]。鱼类性类固醇激素（T、17β-E2等）是体内胆固醇的衍生物，对鱼体性腺发育、卵黄形成和卵细胞成熟具有重要的调控作用，因此性激素水平的改变，最终会影响到鱼类的繁殖功能[12]。颉志刚等[13]研究表明，摄食含有芳香化酶抑制剂来曲唑（letrozole, LZ）的试验饲料10 d 后，雌性光唇鱼的血浆E2水平显著下降，而雄性光唇鱼的血浆T 水平则无显著变化。本试验A 组雌鱼血清E2含量较E 组下降最多，表明红虫饲料当中可能含有某种物质抑制雌鱼的E2水平。

流水可以刺激鱼类侧线器官，通过中枢神经，诱使下丘脑合成和释放促性腺激素释放激素，进而引发脑垂体分泌促性腺激素，诱导亲鱼发情产卵[14]。宋波澜[15]研究表明，随着水流速的增加，红鳍银鲫的肌肉中的血红蛋白含量会显著提高。在本试验中，B 组雌鱼E1性激素水平较高，表明在混合水流刺激下，促进了巴马油鱼性激素的合成，对P和E1的促进效果较好。这可能是巴马拟缨鱼喜欢生活在水流湍急的水域，且对涌流敏感，B 组鱼在旋流和涌流混合水流作用下育，性激素水平提高。

仇登高[16]研究发现，不同的光照条件可以延缓或者加快大西洋鲑性腺的发育。狄正凯等[17]研究发现，延长光照周期，可以增加鱼类的摄食时间，提高摄食率，进而促进鱼类生长，但过长的光照时间，往往会导致鱼类的生长速度下降。本试验中，C 组P 含量在试验组中最低，E2含量最高，表明光照可能会刺激培育对象E2的合成，但同一光照周期又会抑制P 的合成。可能的原因为巴马拟缨鱼是洞穴习性生活的鱼类，对特定光照的敏感度较高。本试验设定的光照强度和周期变化，刺激了雌鱼，导致雌鱼特定性激素水平升高。底质类型对巴马拟缨鱼自然繁殖的成败尤为重要。张平梅等[18]研究表明，复杂的底质更有利于鲟的产卵行为。在本试验中，D 组的E3含量为试验组中最高，E2和P 水平也较高，可能是野生巴马拟缨鱼来自红水河流域，原生境中的底质复杂多变，而D 组底质环境比较接近野生环境，加上充足的饵料和安静的环境，有利于促进雌鱼性激素水平的提高。

3.2 各组巴马拟缨鱼催产前后性激素水平

利用外源激素处理，是促进养殖鱼类性腺成熟及产卵繁殖的重要方法。最常用的是利用促性腺激素释放激素的类似物（GnRHa），刺激脑垂体释放促性腺激素（GtH），诱导精巢性类固醇激素的生成和精子的排放[19-20]。鱼类卵巢发育受多种因素（温度[21]、人工配合饲料[22]、外源激素[23]等）的影响。相关研究表明[24]，不同的外源激素，对卵巢作用不同，人工注射催产激素，能够促进半滑舌鳎卵巢更快地发育到下一个时期；但类雄激素可以抑制麦穗鱼卵巢发育，抑制程度随着浓度的变大而增加[25]；绒毛膜促性腺激素（HCG）和鲤垂体（PT），对鳗鲡卵巢催熟效果较好，促黄体素释放激素（LHRH-A2）和丙酸睾丸素（TOP），则无明显效果[23]；GnRH-a 可用于诱导大菱鲆多次产卵[26]；多巴胺（DA）通过抑制促性腺激素（GtH）的分泌，从而阻断促性腺激素释放激素（GnRH）的作用[27]。

宋燕等[28]研究表明，在鱼类不同的生长时期，催产剂对于鱼体的性激素影响不同。邹忠义等[29]在对大鲵尿液性激素水平季节变化及其与繁殖的关系中发现，大鲵的E2含量需要达到一定的阈值后进行催产试验，才能刺激其产卵。本实验也是通过注射催产剂来研究性激素水平的变化，从而进一步研究人工养殖环境下，巴马拟缨鱼性腺的发育情况。蔡智鸣等[30]研究表明，鱼类的卵巢在Ⅳ期初时人工催产无效，只有发育到Ⅳ期中期，最好是Ⅳ期期末，催产才能成功。本试验在巴马拟缨鱼性腺尚未完全成熟的情况下进行试催产，以探索特定时期的巴马拟缨鱼性激素的变化。