扶正生血胶囊含量测定及稳定性研究

张 明 赵贤媚 易 荣 赵冰晶 张育勤 吴雪钗 刘林森 于波涛

中国人民解放军西部战区总医院药剂科，四川成都 610083

扶正生血胶囊为中国人民解放军西部战区总医院的临床经验方，具有滋阴培阳、益肾健脾、扶正固本、补血益气的功效。主要用于肿瘤放化疗后的支持治疗、白细胞减少、血小板减少、再生障碍性贫血、失血性贫血及其他不明原因引起的全血细胞减少症，疗效确切[1]。虎杖苷、白藜芦醇为本方的重要组分，在处方中发挥重要的药理特性。本研究以虎杖苷、白藜芦醇为制剂定量指标，并对其性状、含量、水分等稳定性因素进行探讨，确保制剂工艺可靠、质量稳定、质量检测方法简便可重复。

1 仪器与试药

1.1 实验仪器

安捷伦高效液相仪（1200 series，安捷伦科技中国有限公司）；METTLER 十万分之一电子分析天平（AB135-S，METTLER TOLEDO）；智能双功效超声波提取器（广东固特超声股份有限公司，功率210 W，频率60 KHz）；恒温水浴锅（HH-824S 型，上海君竺仪器制造公司）；热风干燥箱（201-2A 型，上海实验仪器厂）；紫外分析仪（ZF-20D 型，上海翼辉科学分析仪器有限公司）；崩解时限检查仪（ZB-1D 型，天津天光光学仪器厂）。

1.2 药物及试剂

扶正生血胶囊由中国人民解放军西部战区总医院药剂科制剂中心提供（批号：190729、190730、190731）；虎杖苷对照品（批号：111575-201603，20 mg/支，含量以87.3%计）、白藜芦醇对照品（批号：111535-201703，20 mg/支，含量以99.4%计）购于中国食品药品检定研究院；乙腈为色谱纯，其余试剂为分析纯。

2 虎杖苷及白藜芦醇含量测定

2.1 标准品溶液的制备

分别精密称定虎杖苷4.22 mg、白藜芦醇1.13 mg，加50%稀乙醇超声定容于25 ml 棕色容量瓶中，得浓度为168.81 μg/ml 虎杖苷、45.23 μg/ml 白藜芦醇的标准品溶液。

2.2 供试样品溶液的制备

取扶正生血胶囊内容物约1.0 g，精密称取，加50%稀乙醇25 ml 于具塞瓶中，精密称重，于超声仪超声33 min，至冷却称量，加50%稀乙醇添补失重，摇晃均匀，用注射器吸取适量上清液，微孔滤膜滤后取滤液作供试样品溶液。

2.3 阴性样品溶液的制备

按该处方称取除虎杖外的剩余药材，经水煮、浓缩、混合、烘干、整粒等标准工艺制备并用“2.2”项下方法制作不含虎杖的阴性样品溶液。

2.4 高效液相色谱条件

色谱柱：Agilent YMC-Triart C18（250 mm×4.6 mm，5 μm）；乙腈∶水（25∶75）等度洗脱，洗脱时间为15 min；波长为312 nm，流速为1.1 ml/min，柱温为27℃，进样量为10 μl。理论塔板≥3 500，分离度≥2.0。高效液相色谱图见图1。

图1 高效液相色谱图

2.5 标准曲线的制备

精密移取168.81、45.23 μg/ml 的虎杖苷、白藜芦醇混合对照品溶液1、2、3、4、5、10 ml 于10 ml 容量瓶中，加入流动相定容，进注高效液相仪分析，峰面积为Y 轴，进样量为X 轴，进行回归分析。回归方程为虎杖苷：Y=115.20X+101.91（r=0.999 9）；白藜芦醇：Y=2.75X+28.59（r=0.999 9）。提示虎杖苷、白藜芦醇分别在16.81～168.81 μg/ml、4.52～45.23 μg/ml 浓度范围内线性关系良好。

2.6 精密度实验

取已知浓度虎杖苷、白藜芦醇对照品溶液10 μl，重复进注6 次，测得峰面积[2]，峰面积的RSD 值分别为0.37%、0.41%。

2.7 重复性实验

按照“2.2”项下样品溶液方法，平行制备6 份样品（批号：190731）溶液，按“2.4”项下条件检测峰面积并计算虎杖苷与白藜芦醇的含量[3]。虎杖苷、白藜芦醇的RSD值分别为1.73%、2.16%。

2.8 稳定性实验

取“2.2”项下同一批次样品（批号：190731）溶液8 ml，依次于0、2、4、8、12、24 h 取样进注色谱仪，记录峰面积[4]，虎杖苷、白藜芦醇的峰面积RSD 值分别为0.69%、1.24%。

2.9 加样回收率

取已知含量样品（含虎杖苷、白藜芦醇分别为0.556、0.136 mg/ml，批号：190729）适量，各9 份，每份约1.0 g，分别加入一定量虎杖苷、白藜芦醇对照品溶液，按“2.2”项下方法制备供试品溶液，按“2.4”项下条件检测峰面积并计算虎杖苷与白藜芦醇的含量，通过测得量与已知样品含量、加入量进行数据分析，计算回收率[5]，具体数据见表1。

表1 加样回收率实验结果

2.10 样品含量测定

取3 批次供试品，按照“2.2”项下方法制备，按“2.4”项下色谱条件测定，结果见表2。

表2 扶正生血胶囊中虎杖苷与白藜芦醇的含量（n=3）

3 初步稳定性考察

3.1 样品的测试条件及封装

取样品（批号：190729）以上市标准铝箔膜封装，室温保存并连续测试，测试时间24 个月。

3.2 方法

参照《中华人民共和国药典》2020 版[6]胶囊剂稳定性重点项目，重点考察其性状、虎杖苷与白藜芦醇含量、水分、崩解时限、装量。

3.3 高温、高湿、强光、加速、长期试验

3.3.1 高温稳定性实验 称取样品（批号：190729）约1.25 g，去包装，放置容器中，温度60℃，放置10 d，每间隔5 d，分取少许检测，按“3.2”项下重点项目考察。结果见表3。

表3 高温、高湿、光照稳定性实验结果

3.3.2 高湿稳定性实验 称取样品（批号：190729）约1.25 g，置恒湿容器中，温度25℃，相对湿度（90±5）%，存放10 d，每间隔5 d，分取少许检测，按“3.2”项下重点项目考察。结果见表3。

3.3.3 强光照稳定性实验 称取样品（批号：190729）约1.25 g，开口曝光，设置光照度为（4500±500）lX，存放10 d，在第0、5、10 天时分别取少量检测，按“3.2”项下重点项目检测。结果见表3。

3.4 加速稳定性实验

称取样品（批号：190729）约1.25 g，按成品封装，温度（40±2）℃、相对湿度（75±5）%，保存6 个月，第0、1、2、3、6 个月末取少许样品测量，按“3.2”项下重点项目考察。结果见表4。

表4 扶正生血胶囊加速稳定性实验结果

3.5 长期稳定性实验

称取样品（批号：190729）约1.25 g，按成品包装，温度（25±2）℃、相对湿度（60±5）%，保存24 个月，第0、3、6、9、12、18、24 个月末取少许样品测量，按“3.2”项下重点项目考察。结果见表5。

表5 扶正生血胶囊长期稳定性实验结果

3.6 结果

扶正生血胶囊24 个月考察结果表明，该品种在2 年内考察指标稳定，故其有效期暂定为2 年。

4 讨论

扶正生血胶囊由补骨脂、陈皮、虎杖、甘草等中药制成，在临床应用多年，疗效确切，该制剂中虎杖苷具有止咳、平喘、抗休克及抑制血小板聚集等作用[7-18]。白藜芦醇具有抗氧化、抗自由基及抗癌等作用[19-25]。本研究以虎杖苷、白藜芦醇为定量考察指标，并对药品进行为期2 年的稳定性考察。结果表示，方法精密度、重复性、稳定性、回收率均符合要求，可用于扶正生血胶囊的质量控制。同一产区虎杖受气候、土壤等外界环境因素的影响较小，而在不同地区因水土、温度、湿度等环境因素差异，虎杖中各有效成分含量占比有较大不同，笔者单位位于西南地区，参照张明等[26]考察西南5 个产区虎杖中虎杖苷和白藜芦醇含量，选用四川乐山产虎杖作为原料药，以乙腈∶水（25∶75）洗脱分析该制剂，结果表明该洗脱剂简单、稳定、可重复。

扶正生血胶囊含有多种药材，在样品定量提取中，分别考虑了微波提取法、加热回流提取法及超声提取法等，各方法实验结果表明，超声提取法简单、有效、提取效率高，故本制剂含量测定采用超声提取法。对等分别考察后，根据测定成分的峰面积确定了提取溶剂的种类、用量和提取时间最优提取条件，即用50%乙醇25 ml，超声提取33 min。含量测定考察过程中发现，高效液相色谱图中基线不平，怀疑色谱柱柱温在30℃时有漂移不稳定现象，逐步将柱温降至27℃，基本消除基线漂移不稳定等情况，故将柱温设定为27℃。稳定性考察过程中，由于考察项目多，用时长，故本研究从3 个批次中选择了1 个批次进行研究，但本研究存在项目不全，未全批次检查的情况，后续研究中能够更加全面、深入、细致地研究该胶囊稳定性。