顶空气相色谱法测定氨磷汀的残留溶剂

高睿 刘慧颖 王福鑫

【摘要】目的：建立氨磷汀中甲醇、乙醇有机残留的检测方法。方法：采用DB-1301毛细管柱（30 m×0.32 mm，0.25μm），FID检测器，进行测定。结果：甲醇和乙醇的线性范围分别为2.994～598.9μg·mL1（r=0.9997）和4.997～999.4μg·mL-1（r= 0.9998）（n= 6）；平均回收率分别为101.66%（RSD：1.65%）、104.9%（RSD%：1.38%）（n=9）；检测限（LOD）分别为：0.07486μg·mL-1，0.1249μg·mL-1。结论：采用此方法，可便捷、準确的检验氨磷汀中残留溶剂的检测。

【关键词】氨磷汀；顶空气相色谱法；残留溶剂

【DOI编码】10.3969/j.issn.1674-4977.2023.02.038

【基金项目】辽宁省自然基金资助计划（2019-MS-185）。

Determination of Residual Organic Solvents in Amifostine by Headspace GC

GAO Rui，LIU Huiying，WANG Fuxin

（Liaoning Institute for Drug Control，Shenyang 110036，China）

Abstract：Objective：To establish a headspace gas chromatography method for the determination of residual solvents in Amifostine. Methods：A headspace gas chromatography was used with a capillary column DB-1301（30 m×0.32 mm，0.25μm），and with nitrogen as the carrier and an FID as the detector.Results：The linear range for methanol，ethanol was 2.994～598.9μg·mL-1（r= 0.9991），4.997～ 999.4μg·mL-1（r=0.9997）（n=7），respectively.The average recovery was 101.66%（RSD：1.65%）、104.9%（RSD%：1.38%）（n=9），and the LOD were 0.07486μg·mL-1，0.1249μg·mL-1，respectively.Conclusion：It is a simple，accurate method，can be used for the determination of various residual solvents inAmifostine.

Key words：Amifostine；headspace gas chromatography；residual solvents

氨磷汀是中国CFDA于2001年批准的唯一泛细胞保护剂，用于减轻放化疗因细胞毒药物及辐射引起的毒副反应。目前，国内对氨磷汀质量标准要求较低，对其在生产工艺过程中产生杂质的限度控制不够严密，且没有对残留溶剂进行限度检查，导致临床用药副作用比例较大，影响其临床用药安全。结合氨磷汀的相关文献，其在制备工艺中均使用甲醇、乙醇重结晶[1-2]，故根据ICH中有机残留量检测的指导原则，采用顶空气相色谱法对氨磷汀中甲醇、乙醇的有机残留量进行控制，提高氨磷汀生产工艺的稳定性，确保临床用药安全。

1仪器与试药

岛津GC-2010Plus气相色谱仪、Satorius分析天平（0.0001 g）BSA224S-CW、7697A顶空进样器（美国安捷伦科技有限公司）。甲醇、无水乙醇（国药集团化学试剂有限公司，色谱纯）。10批测试样品（190911、190912、190913、191006、191012、 191103、191105、191201、191203、191206）。

2方法与结果

2.1色谱条件

DB-1301毛细管柱（30 m×0.32 mm，0.25μm），FID离子化检测器，检测器温度250℃，进样器温度140℃，载气为氮气，分流比10，柱流速1.5 mL·mL-1，氢气流速60 mL·mL-1，空气流速400 mL·mL-1。柱温采用程序升温：初始柱温40℃，维持8 min，以40℃·min-1的速度升温至200℃，维持5 min。顶空瓶的平衡温度80℃，平衡时间45 min。

2.2溶液的制备

2.2.1空白溶液

精密量取水2 mL，置10 mL顶空瓶中，密封。

2.2.2对照品贮备液

分别精密称取甲醇0.5 g、乙醇1.0 g，置200 mL量瓶中，用水稀释至刻度，摇匀，分别制成上述各对照品贮备液。

2.2.3对照品溶液

精取对照品贮备液各10 mL置50 mL量瓶中，用水稀释至刻度，摇匀，即得溶液a。精取1 mL溶液a，置10 mL顶空瓶，精密加入1 mL水，密封，作为对照品溶液。

2.2.4供试品溶液

精密称取氨磷汀原料药0.2 g，置于10 mL顶空瓶，精密加入2 mL水，振摇溶解，密封，作为供试品溶液。

2.3专属性与系统适用性试验

在上述色谱条件下，将对照品溶液和空白溶液分别进样。结果表明：空白溶剂（见图1）对甲醇、乙醇的检测均无干扰，方法专属性符合要求；各组分均能完全分离（见图2）。

2.4线性关系考察

取对照品贮备液精密量取适量，配制成1%、5%、25%、50%、100%、150%和200%的对照品溶液，分别精密量取1 mL，置10 mL顶空瓶中，再精密加水1 mL，密封后测定。结果表明：在浓度范围内，峰面积与浓度呈良好的线性关系。结果见表1、图3、图4。

2.5重復性试验

取“2.2.3”项下对照品溶液置顶空瓶中，进样，重复测试6次，测定峰面积，结果甲醇、乙醇响应因子的RSD%分别为3.8%，4.0%（n=6），符合2020年版《中华人民共和国药典》残留溶剂重复性要求（RSD%≤5%），见表2。

2.6准确度试验

精密称取已知残留溶剂量的氨磷汀（批号为190911）0.2 g（共9份），分别置10 mL顶空瓶中，分别加入对照品贮备液0.5 mL、1.0 mL、1.5 mL，再精密加入水1.5 mL、1.0 mL、0.5 mL，密封，振摇溶解，作为供试品溶液；检测并记录色谱图，计算回收率。甲醇、乙醇的平均回收率分别为：101.66%（RSD%= 3.5%），104.92%（RSD%=3.8%）（n=9），均在80%～120%之间（见表3、4），均符合残留溶剂准确度测定的要求。

2.7检测限和定量限的测定

取对照品溶液用稀释剂逐级稀释，置顶空瓶中进样，重复测试3次，按信噪比（S/N）10和3，测得甲醇和乙醇的检测限，见表5。

2.8样品测定

按“2.2.3”和“2.2.4”项下方法制备对照品和供试品溶液（10批次样品），分别取对照品溶液和供试品溶液置顶空瓶中进样，各平行测试2次，计算样品中的有机溶剂残留量，含量均在规定限度范围之内，见表6。

3讨论

1）氨磷汀在水易溶，故以水为溶剂，可以减少溶剂对待测有机组分的干扰。

2）根据文献报道[3-8]，氨磷汀国内氨磷汀的质量标准要求较低，对其生产工艺过程中产生的杂质的限度控制不够严密，且没有对残留溶剂进行限度检查，而导致临床用药副作用比例较大，影响其临床用药安全。结合氨磷汀的相关文献，其在制备工艺中均使用甲醇、乙醇重结晶。经试验确定：采用顶空气相色谱法，用中等极性的（6%氰丙基-苯基）-甲基聚硅氧烷色谱柱（DB-1301），起始温度为40℃时，甲醇、乙醇能够有效分离。因为甲醇和乙醇极性相近，且在色谱系统中响应值较大，为了更好地分离效果，分流比设定为10，两者分离度能满足ICH和《中华人民共和国药典》中的规定。试验证明，此条件下，分离效果较好，灵敏度高，重现性好。

4结语

本文建立了氨磷汀原料药中有机溶剂残留的检测方法，甲醇和乙醇分离效果好，重复性和准确度良好。采用此方法可以控制氨磷汀制备工艺的稳定性，保障人体用药安全。

【参考文献】

[1]宋晓飞.氨磷汀制备新工艺及质量控制的研究[D].大连：大连理工大学，2014.

[2]夏家栋，张彦博.氨磷汀合成方法研究进展[J].河南科技，

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[3]胡美晨，黄金文，黄磊磊，等.顶空气相色谱法同时测定新药CBT108中12种残留溶剂[J].分析化学，2018，46（5）：710-715.

[4]黄灵勇，王爱明，尹路遥，等.毛细管气相色谱法测定替格瑞洛中溶剂残留量[J].沈阳药科大学学报，2018，35（2）：125-130.

[5]李超，张勉，梁静，等.顶空气相色谱法测定盐酸帕洛诺司琼中的11种残留溶剂[J].华西药学杂志，2019，34（2）：169-172.

[6]黄莹，饶春意.顶空气相色谱内标法测定乳酸钠溶液中残留溶剂[J].今日药学，2010，20（9）：32-33.

[7]张清国，周芳，郭树兴，等.头孢泊肟酯中有机溶剂残留的测定方法[J].药物研究，2017，14（22）：37-41.

[8]姜彩端.气相色谱法测定氨磷汀原料药中N，N-二甲基甲酰胺残留量[J].科技创新与应用，2014（5）：41.

【作者简介】

高睿，男，1983年出生，主管药师，研究方向为化学药品、原辅料的质量标准研究及标准起草。

（编辑：侯睿琪）