硒化甘草多糖联合抗生素对奇异变形杆菌体内外抑菌效果以及抑菌机制研究

2023-07-12李效振朱晓庆谷新利张梦圆王蒙蒙杨慧莹刘雨然

饲料研究 2023年10期

王燕李效振朱晓庆* 谷新利* 张梦圆王蒙蒙杨慧莹刘雨然

（1．石河子大学动物科技学院，新疆石河子 832003；2．乌鲁木齐海关技术中心，新疆乌鲁木齐 830000）

变形杆菌属于革兰阴性菌肠杆菌科，是人畜共患菌。奇异变形杆菌（Proteus mirabilis，PM）在自然界广泛分布，可通过粪便、饮水等途径感染人或动物，引起败血症、食物中毒、腹泻、泌尿系统等疾病[1]。近年来，随着PM耐药性增加，抗生素防控效果急剧下降。因此，开发新型抗菌剂对降低细菌耐药率尤为重要。

甘草作为较为常见的中药，主要分布在我国西北部，其根部是常见用药部位。甘草提取物包括黄酮类、淀粉、氨基酸、糖类等。甘草多糖（Glycyrrhizapolysaccharide，GUP）是一种从甘草中提取出来的天然多糖，具有抗炎抑菌、抗氧化、免疫调节、抗肿瘤等功能[2]。硒作为人体必需元素，能够保障机体健康，降低癌症、甲状腺、大骨病等疾病风险；还具有抗氧化、抗癌、抗炎抑菌、提高机体免疫力等生物学功能。硒分为无机硒和有机硒。无机硒毒副作用大、生物利用率低；有机硒比无机硒毒副作用小，利用率高，能够与大分子结合，在生物活性方面产生协同作用[3]。将硒与甘草多糖结合为硒化甘草多糖（selenideGlycyrrhizapolysaccharide，SeGUP），具有抗炎抑菌、免疫调节等作用。研究表明，GUP 对大肠杆菌和肺炎克雷伯菌具有较好的抑制作用[4]；SeGUP 对大肠杆菌有抑制作用[5]；PM 对氨基糖苷类、青霉素类、喹诺酮类抗生素呈不同程度耐药[6-8]。本试验研究SeGUP、GUP 联合抗生素对PM 体内外抑菌效果及抑菌机制，比较两者抑菌性效果，旨在开发新型天然植物抑菌剂、临床抗生素使用以及PM的防治方面提供参考。

1 材料与方法

1.1 试验动物

昆明级小鼠，240只，雌、雄各半，7～9周龄，体重（20±2）g，由新疆医科大学医学实验动物中心提供，适应性饲养7 d后用于试验。

1.2 试验菌株及试验试剂

奇异变形杆菌（Proteus mirabilis，菌株编号为BNCC107943）购自BeNa Culture Collection；新疆乌拉尔甘草购自石河子市国浩中草药公司；BHI、营养肉汁琼脂购自青岛高科技工业园海博生物技术有限公司；G-100 葡聚糖购自合肥博美生物科技有限责任公司；抗生素药敏片（恩诺沙星、环丙沙星（CI）、新霉素硫酸盐、链霉素、庆大霉素、卡那霉素、阿莫西林、氨苄西林）购自杭州微生物试剂有限公司；CI、碱性磷酸酶（AKP）试剂盒、BCA 法蛋白含量测定试剂盒、β-半乳糖苷酶（β-gal）试剂盒、过氧化氢酶（CAT）试剂盒、超氧化物歧化酶（SOD）试剂盒购自上海源叶生物科技有限公司；细菌基因组DNA 提取试剂盒购自天根生化科技（北京）有限公司；亚硒酸钠购自天津福晨化学试剂厂；透析袋、琼脂粉购自北京博奥拓科技有限公司。

1.3 试验仪器

Biotek SynergeyTM2多功能酶标仪（美国伯腾仪器有限公司）；DEAE-52 层析柱、Sephadex G-100 层析柱（北京博奥拓达科技有限公司）；ZG-280中药煎药包装一体机（吉首市中诚制药机械厂）；冷冻干燥机（北京松源华兴科技发展有限公司）；高速冷冻离心机（赛默飞世尔科技（中国）有限公司）；HVA-85高压蒸汽灭菌锅（华粤行仪器有限公司）；单道排枪移液器、多道排枪移液器（德国Transferpette公司）。

1.4 试验活化菌株

在超净工作台中将密封的PM试管用磨砂石打开，将无菌液体培养基打入PM试管中，混匀；再蘸取PM菌悬液在固体培养基中划线，37 ℃恒温培养16 h；选取大小均一的单菌落，置于液体培养基中，37 ℃恒温培养18 h，用无菌蒸馏水调整菌液浓度为108CFU/mL。

1.5 测定指标及方法

1.5.1 GUP制备

根据参考文献[9]的方法，取干燥的新疆乌拉尔甘草1 000 g，工业乙醇浸泡12 h 除去脂质小分子。热水回流提取3次，加入无水乙醇使终体积分数为80%、静置8 h，去除上清液，3 000 r/min离心15 min，取浓缩液，冷冻干燥后得到新疆乌拉尔甘草粗多糖。

将粗多糖配制成10 g/L溶液，调溶液pH值为7.0，加三氯乙酸搅拌4 h，加入过氧化氢，50 ℃水浴静置3 h。将以上处理过的溶液装入透析袋，蒸馏水透析72 h，放置层析柱除杂，离心除去沉淀，冷冻干燥，即为GUP。

1.5.2 SeGUP制备

称取500 mg GUP，加入浓硝酸50 mL，搅拌30 min，加入200 mg亚硒酸钠，水浴8 h，加饱和无水碳酸钠，调pH值为6.0，3 000 r/min离心15 min，去除沉淀。将以上处理过的溶液装入透析袋，蒸馏水透析48 h，放置层析柱除杂，冷冻干燥后得即为SeGUP。

1.5.3 体外抑菌试验

1.5.3.1 药敏试验

将SeGUP、GUP 用无菌水调制成浓度分别为100、200、300、400 g/L 的溶液，再将溶液、自制药敏片进行高压灭菌。将药敏纸片均匀放置在无菌玻璃器皿上，吸取20 μL不同浓度的SeGUP、GUP放置在药敏片上，4 ℃放置4 h，在37 ℃烘箱中烘干。将PM均匀涂布在固体培养基上直至干涩难涂，使用无菌眼科镊夹将制备好的不同质量浓度SeGUP、GUP 药敏片以及各抗生素药敏片均匀放置在固体培养基上，保持间距，37 ℃恒温培养24 h，观察抑菌圈，测量抑菌圈直径，以3 次抑菌圈直径的平均值为敏感度标准。根据《中药药理学标准》，抑菌圈直径≥20 mm为极度敏感；15 mm≤抑菌圈直径＜19 mm为高度敏感；10 mm≤抑菌圈直径＜14 mm为中度敏感；抑菌圈直径＜10 mm为无抑菌活性。

1.5.3.2 最小抑菌浓度（MIC）测定

参考林震等[10]以及实验室前期方法稍做改动，使用无菌蒸馏水配制不同浓度的SeGUP、GUP、抗生素溶液，多糖溶液高压灭菌，准备3 块96 孔板，吸取100 μL 不同质量浓度的SeGUP、GUP、抗生素溶液分别加入不同板中，加入100 μL 菌悬液，SeGUP、GUP 溶液终质量浓度分别为25、50、75、100、125、150、175、200、225、250 g/L；抗生素溶液终质量浓度分别为320×10-3、160×10-3、 80×10-3、 40×10-3、 20×10-3、 10×10-3、5×10-3g/L；对照组为只含PM的菌悬液。37 ℃恒摇床振荡培养24 h，与对照组比，孔中无浑浊即为MIC。试验重复3次。

1.5.3.3 SeGUP、GUP对PM的生长曲线

参考Liu等[11]以及实验室前期方法适当修改，采用二倍稀释法，使用无菌蒸馏水分别配制2 MIC、1 MIC、0 MIC SeGUP 和GUP 溶液，高压灭菌，将PM 菌悬液放置在无菌试管中，加入等量、不同质量浓度的SeGUP、GUP溶液，SeGUP、GUP溶液终质量浓度分别为1 MIC、1/2 MIC、0 MIC。37 ℃恒温摇床振荡培养24 h，每隔2 h测定在OD600nm处的吸光度值。以时间为横坐标，OD600nm值为纵坐标，绘图。

1.5.3.4 SeGUP、GUP和抗生素组合体外协同试验

参考Li 等[12]以及实验室前期方法稍做改动，采用棋盘法测定SeGUP、GUP 联合抗生素抑菌效果，将50 μL不同浓度的SeGUP、GUP 溶液提前加入2 个不同的96 孔板中，每板中分别加入50 μL不同浓度的抗生素溶液，每孔加入100 μL的PM菌悬液，SeGUP质量浓度分别为20、25、30、35、40、45、50、55、60、65、70、75、80、85、90、95 g/L；GUP 质量浓度分别为40、45、50、55、60、65、70、75、80、85、90、95、100、105、110、115 g/L；抗生素质量浓度分别为5×10-3、10×10-3、15×10-3、 20×10-3、 25×10-3、 30×10-3、 35×10-3、40×10-3g/L。对照组为只含PM 菌悬液，37 ℃恒温培养24 h，与对照组比，孔中无浑浊为联合后抗生素的MIC。

体外协同作用（FICI）=（甲药联合时的MIC/甲药单用时的MIC）+（乙药联合时的MIC/乙药单用时的MIC） (1)

结果判定：FICI≤0.5 为协同；0.5＜FICI≤1.0 为相加；1.0＜FICI≤2.0为无关；FICI＞2.0为拮抗。

1.5.4 体内抑菌预试验

1.5.4.1 PM菌悬液制备

取大小均一的PM 菌落接种到液体培养基中，37 ℃恒温振荡培养18 h，用无菌蒸馏水调整PM 菌液浓度为1×106、5×106、1×107、5×107、1×108、5×108CFU/mL。

1.5.4.2 小鼠80%致死剂量（MLD）

将80只昆明级小鼠随机分为8组，每组10只，对照组腹腔注射生理盐水，其他6组腹腔注射不同浓度菌液，0.3 mL/只，观察7 d。使用10 只小鼠作为验证组，给予80% MLD菌液，验证此剂量小鼠死亡率，确定小鼠80%MLD，即为感染量。

1.5.4.3 抗生素最佳预防剂量

将70 只昆明级小鼠随机分为7 组：2 mg/kg 组、3 mg/kg 组、4 mg/kg 组、5 mg/kg 组、6 mg/kg 组、7 mg/kg组、对照组，每组10只。每组小鼠灌服相应剂量抗生素，对照组灌服生理盐水，0.3 mL/只，连续14 d。末次灌服完成2 h后腹腔注射80% MLD菌液，观察7 d。

1.5.5 体内抑菌试验

90只昆明级小鼠随机分为SeGUP 高、中、低（150、100、50 mg/kg）剂量组及GUP高、中、低剂量组（150、100、50 mg/kg）和对照组、模型组、抗生素组，每组10 只。模型组小鼠不处理，对照组灌服生理盐水，抗生素组灌服最佳预防浓度的抗生素溶液，其余各组灌服0.3 mL/只、不同剂量的SeGUP、GUP 溶液，连续14 d。末次灌服完成2 h后，除对照组外，其他组腹腔注射80%MLD的菌液。观察7 d。

1.5.6 抑菌机制试验

1.5.6.1 SeGUP、GUP 联合抗生素对PM AKP、β-gal、DNA、蛋白含量的影响

将相同体积药物分别加入只装有PM菌液高压灭菌的试管中，使浓度分别为MIC SeGUP、MIC GUP、MIC CI、 MIC （SeGUP+CI）、 MIC （GUP+CI）、 1/2 MIC SeGUP、1/2 MIC GUP、1/2 MIC CI、1/2 MIC（SeGUP+CI）、1/2 MIC（GUP+CI），对照组只加入同等体积的无菌蒸馏水（只含PM菌液），37 ℃恒温振荡培养12 h，4、12 h 无菌取样1 mL 于无菌EP 管中，按照AKP、β-gal、DNA、蛋白含量试剂盒使用说明书步骤测量其在OD450nm、OD260nm、OD280nm、OD562nm吸光度值，得出AKP、β-gal、DNA、蛋白含量变化。每个样品做3 个平行，取平均值。

1.5.6.2 SeGUP、GUP 联合抗生素对PM 生物膜形成的影响

参考温燕龙等[13]和Djordjevic等[14]方法稍作改进。分组同1.5.6.1，将SeGUP、GUP、抗生素溶液与PM菌液振荡混匀，吸取200 μL 的混合液到96 孔板中，37 ℃培养24 h；弃去每孔中的混合液，使用无菌PBS漂洗3次；再取200 μL 结晶紫染液加到每孔中，37 ℃染色1 h，弃去每孔中的染色液，使用无菌PBS 漂洗3 次；再吸取200 μL 的95%乙醇加入每孔中，37 ℃脱色8 h，测定在OD595nm处吸光度值。每个样品做3个平行，取平均值。

1.5.6.3 SeGUP、GUP 联合抗生素对PM CAT、SOD 活性的影响

分组以及药物处理同1.5.6.1，根据CAT、SOD 试剂盒说明书测定在OD240nm、OD450nm处吸光度值，得出CAT、SOD活性变化。每个样品做3个平行，取平均值。

1.6 数据统计与分析

采用SPSS 21.0 软件对试验数据进行单因素方差分析，Duncan's 检验法进行多重比较。结果以“平均值±标准误”表示，P＜0.01 表示差异极显著。采用Graphpad prism 7软件绘图。

2 结果与分析

2.1 体外抑菌试验结果

2.1.1 SeGUP、GUP对PM药敏的试验结果（见表1）

表1 SeGUP、GUP对PM药敏的试验结果单位：mm

由表1 可知，300 g/L SeGUP、400 g/L GUP 对PM 达到了极敏效果，同一浓度下SeGUP比GUP抑菌圈大。抗生素药敏试验中CI 的抑菌效果最佳，达到极敏。因此，选用抗生素CI进行体内外抑菌以及抑菌机制试验。

2.1.2 SeGUP、GUP、CI对PM的MIC结果（见表2）

表2 SeGUP、GUP、CI对PM的MIC结果单位：g/L

由表2 可知，SeGUP 对PM 的MIC 值为100.00 g/L，GUP 对PM的MIC值为150.00 g/L，CI对PM的MIC值为0.04 g/L。

2.1.3 GUP、SeGUP对PM生长曲线的影响（见图1、图2）

图1 GUP对PM生长曲线的影响

图2 SeGUP对PM生长曲线的影响

由图1、图2 可知，PM 在10 h 之前完成了迟缓期和对数期；在1 MIC GUP、1 MIC SeGUP 的影响下，细菌不增殖；1/2 MIC GUP、1/2 MIC SeGUP 均对细菌表现出抑制作用，PM 的迟缓期和对数期生长特征消失。1/2 MIC SeGUP 对PM 的生长抑制作用停留在0.5 之前，1/2 MIC GUP对PM的生长抑制作用停留在0.6左右。

2.1.4 SeGUP、GUP联合CI对PM的FICI结果（见表3）

表3 SeGUP、GUP联合CI对PM的FICI结果单位：g/L

由表3 可知，SeGUP、GUP 联合CI 使用后MIC 从100.00、150.00 g/L 降低至25.00、50.00 g/L，CI MIC 从0.04 g/L降低到0.01、0.005 g/L。SeGUP联合CI表现为协同作用，GUP联合CI表现为相加作用。

2.2 体内抑菌试验结果

2.2.1 人工感染小鼠80% MLD结果（见表4）

表4 人工感染小鼠80% MLD结果单位：%

攻毒4 h 后，小鼠开始精神不振，蜷缩抱团在一起，双眼紧闭；30 h 后小鼠被毛粗糙，饮水饮食减少，尾部被毛凌乱、发黄，部分出现粪便稀薄情况；40 h 后，小鼠毛发凌乱打结，不思饮食饮水，尾部血管开始发青，部分小鼠腹泻严重，小鼠开始出现死亡；3 d后小鼠继续死亡，部分小鼠尾部严重发青，不愿活动，也有部分小鼠开始恢复饮食饮水，逐渐恢复精神状态；4 d后未死亡小鼠开始恢复精神状态，开始攀爬，自由饮水饮食。

由表4可知，对照组小鼠攻毒剂量为0，死亡率也为0。验证组小鼠腹腔注射5×106CFU/mL 菌液，4 d 内小鼠死亡率仍为80%，最终确定小鼠80% MLD 为5×106CFU/mL。

2.2.2 各剂量CI对小鼠死亡率的影响（见表5）

表5 各剂量CI对小鼠死亡率的影响单位：%

由表5 可知，随着CI 剂量增加，小鼠死亡率越低，预防效果越好，最佳预防剂量为7 mg/kg。

2.2.3 SeGUP、GUP体内抑菌试验（见表6）

表6 SeGUP、GUP体内抑菌试验

由表6 可知，SeGUP 高、中、低剂量组，GUP 高、中剂量组死亡率极显著低于模型组（P＜0.01）；GUP低剂量组对小鼠死亡率无影响。同浓度下SeGUP 剂量组死亡率低于GUP剂量组。

2.3 抑菌机制结果

2.3.1 SeGUP、GUP 联合CI 对PM AKP、β-gal、DNA、蛋白质含量的影响（见表7）

表7 SeGUP、GUP联合CI对PM AKP、β-gal、DNA、蛋白质含量的影响

以12 h时MIC剂量组与对照组进行组间差异性比较；以12 h 时1/2 MIC 剂量组与对照组进行组间差异性比较。由表7可知，1/2 MIC SeGUP组、MIC SeGUP组PM培养液中AKP、β-gal、蛋白含量极显著高于对应的1/2 MIC GUP、MIC GUP 组比（P＜0.01）；1/2 MIC SeGUP 组、MIC SeGUP 组PM 培养液中AKP、β-gal、蛋白含量极显著低于对应的1/2 MIC CI 组、MIC CI 组（P＜0.01）；1/2 MIC（SeGUP+CI）组、MIC（SeGUP+CI）组PM培养液中AKP、β-gal、蛋白含量极显著高于对应的1/2 MIC（GUP+CI）、MIC （GUP+CI）组（P＜0.01）。1/2 MIC SeGUP组、MIC SeGUP组PM菌体内DNA浓度极显著低于对应的1/2 MIC GUP、MIC GUP 组（P＜0.01）；MIC CI 组PM 菌体内DNA 浓度极显著低于MIC SeGUP 组（P＜0.01）；1/2 MIC （SeGUP+CI）组、MIC （SeGUP+CI）组PM 菌体内DNA 浓度极显著低于对应的1/2 MIC（GUP+CI）组、MIC（GUP+CI）组（P＜0.01）。

2.3.2 SeGUP、GUP 联合CI 对PM 生物膜形成的影响（见图3）

图3 SeGUP、GUP联合CI对PM生物膜形成的影响

由图3 可知，与1/2 MIC GUP、MIC GUP 组比，1/2 MIC SeGUP 组、MIC SeGUP 组PM 生物膜形成极显著减少（P＜0.01）；与1/2 MIC SeGUP、MIC SeGUP 组比，1/2 MIC CI 组、MIC CI 组PM 生物膜形成极显著减少（P＜0.01）；与1/2 MIC（GUP+CI）组、MIC（GUP+CI）组比，1/2 MIC（SeGUP+CI）组、MIC（SeGUP+CI）组PM生物膜形成极显著减少（P＜0.01）。

2.3.3 SeGUP、GUP 联合CI 对PM CAT、SOD 活性的影响（见表8）

表8 SeGUP、GUP联合CI对PM CAT、SOD活性的影响

由表8 可知，1/2 MIC SeGUP 组、MIC SeGUP 组CAT、SOD 活性极显著低于对应的1/2 MIC GUP 组、MIC GUP 组（P＜0.01）；1/2 MIC CI、MIC CI 组CAT、SOD 活性极显著低于对应的1/2 MIC SeGUP 组、MIC SeGUP 组（P＜0.01）；1/2 MIC （SeGUP+CI）组、MIC（SeGUP+CI）组CAT、SOD 活性极显著低于对应的1/2 MIC（GUP+CI）、MIC（GUP+CI）组（P＜0.01）。

3 讨论

3.1 SeGUP、GUP对PM体内外抑菌效果的影响

SeGUP、GUP 对大肠杆菌肺炎克雷伯菌均具有较好体外抑菌作用，抑菌圈均为11 mm[4-5]。本试验中，SeGUP、GUP 对PM 均有较好的体外抑菌效果。随着浓度增高，抑菌圈扩大；SeGUP MIC 小于GUP MIC，且SeGUP 抑制PM 增殖效果优于GUP。茯苓多糖与恩诺沙星联合同时降低了多糖与抗生素使用量[15]。山苍子精油联合四环素和土霉素表现为协同和相加作用，有效降低抗生素使用量[12]。经过前期试验筛选出对SeGUP、GUP均极敏的CI 进行研究，发现SeGUP 联合CI 时表现为协同，GUP表现为相加，表明SeGUP能够更有效地降低CI使用量，为指导抗生素在生产实践中的使用、减缓PM抗生素耐药性以及SeGUP、GUP 在临床中的应用提供了参考。高艳等[16]在小鼠体内建立多杀性巴氏杆菌模型，使用菪可轮蒲水煎液对小鼠进行预防和治疗干预，发现菪可轮蒲水煎液预防作用能够更有效地降低小鼠死亡率。探索PM 对小鼠死亡率剂量的影响，在体内抑菌试验之前，先进行预试验能够大大提高本试验的成功率；随着SeGUP、GUP 剂量增加，有效降低了小鼠死亡率；同等剂量的SeGUP 预防效果优于GUP。结合体外抑菌试验，发现SeGUP、GUP 体内外均有抑菌效果，这为甘草以及多糖类在畜牧业生产实践中的应用提供了参考，增加了SeGUP、GUP作为抗菌剂的可行性。

3.2 SeGUP、GUP、CI 以及多糖联合CI 对PM 膜结构的影响

AKP 是存在于细胞壁与细胞膜之间的物质，当胞外AKP 活性升高，说明细胞壁受到损伤。因此，AKP 活性常用于指示细胞壁通透性。β-gal是胞内酶，可分解胞内乳糖，除细胞膜受损外，β-gal 不会从胞内泄漏到胞外，细胞质内容物外漏是细胞膜受损的典型特征[17]。菌体内DNA浓度、胞外蛋白浓度反映细菌细胞膜完整性。本试验中，SeGUP、GUP 对细菌细胞壁、细胞膜均具有破坏作用，SeGUP 对细菌的破坏能力强于GUP；当SeGUP、GUP联合CI时，加大了对细菌细胞壁、细胞膜的破坏程度，增强了抗生素的杀菌效果。槲皮素能够破坏大肠杆菌和金黄色葡萄球菌的细胞壁和细胞膜，使胞外AKP、β-gal以及可溶性蛋白显著升高；槲皮素作为饲料添加剂具有代替抗生素的潜力[18]，与本试验结果一致。生物膜可分泌胞外多糖、蛋白质、脂质等物质，组成胞外聚合物（EPS），通过EPS 包围细菌，生物膜之间相互附着，难以去除生物膜成为细菌耐药性原因之一。山苍子精油联合四环素和土霉素能够有效去除副溶血链球菌生物膜，减少了去除生物膜所需抗生素用量以及副溶血链球菌的耐药性[12]。SeGUP 联合CI比GUP联合CI更能够抑制PM生物膜形成，呈剂量依赖趋势，有效降低CI的使用量。

3.3 SeGUP、GUP、CI 以及多糖联合CI 对PM 抗氧化酶活性的影响

SOD、CAT 是细菌免受氧自由基侵害的酶；SOD 通过催化超氧阴离子发生歧化作用生成H2O2、O2，CAT 则促进H2O2分解，二者发挥协同作用可以保护细菌免受氧自由基的损害。当细菌处于不利环境时，机体受到氧自由基损害，细菌抗氧化系统被激活，通过消除活性氧以及减轻脂质过氧化损伤，维持细菌自身氧化-抗氧化系统动态平衡，达到生存目的[19-20]。抗生素导致细菌产生过量的活性氧，成为介导细菌死亡的机制之一。SeGUP、GUP、CI能够破坏PM机体氧化-抗氧化动态平衡，导致菌体处于氧化应激状态，破坏PM脂质、大分子物质、抑制PM 生长。本试验中，4 h 时，SeGUP、GUP、CI 引起PM强烈氧化应激反应，SeGUP联合CI比GUP联合CI引起PM氧化应激反应更强烈，CAT、SOD活性更高；12 h时，各剂量组有效破坏PM 抗氧化酶系统，降低SOD、CAT 活性，其中1/2 MIC （SeGUP+CI）组、 MIC（SeGUP+CI）组CAT、SOD活性最低，说明SeGUP联合CI 对PM 抗氧化酶抑制程度最强，导致活性氧的产生速度远大于分解速度，有效降低CI的使用量、达到抑菌效果。水稻提取物对铜绿假单胞菌的抑菌机理表明，水稻提取物后期可抑制CAT、SOD 活性，导致过量有毒的自由基与菌体反应，造成菌体死亡[19]，与本试验一致。Fe3+可以降低庆大霉素在大肠杆菌中的浓度，减少大肠杆菌的氧化应激[20]，与本试验结果相反。