肺结核快速检测技术在肺结核早期诊断中的作用分析

常斐，张建英

菏泽市传染病医院检验科，山东菏泽 274000

结核病（tuberculosis, TB）是临床中一种常见的疾病，主要由结核分枝杆菌（mycobacterium tuberculosis, MTB）感染所致，而WHO 有关报道中指出每年新发TB 高达800 万左右，其中死于肺结核（pulmonary tuberculosis, PTB）者高达300 万左右，属于严重危害人类健康的公共卫生问题[1]。PTB也是传染性疾病，近年来本病在全球范围内发病率均有升高，也是传染病中最主要的一种致死因素，同时在我国本病发生率在局部地区有明显升高趋势[2]，需引起重视。对于PTB 而言，若能尽早及时、准确诊断及治疗，可控制传染源，避免PTB流行[3]。结核痰涂片法在结核病诊断中应用广泛，主要是取患者痰液实施抗酸杆菌染色涂片镜检，不过从既往报道可以看出，此法检出阳性率不高，而且即便是阴性也无法排除肺结核，须持续检查≥3 次才能提高其诊断准确率[4]。Xpert MTB∕RIF法则是相对新颖的快速检测技术，集样品制备与扩增及检测于一体，可自动化完成核酸扩增检测，提高检测灵敏度，减少非特异性扩增，从而提高特异度[5]。为了进一步探讨PTB 快速检测技术用于PTB 早期诊断中的作用，本次选择2021年1 月—2022年12 月菏泽市传染病医院收治的疑似PTB 患者140 例进行研究，现报道如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料

选择本院收治的疑似PTB 患者140 例为研究对象，男76 例，女64 例；年龄20～70 岁，平均（45.62±10.71）岁。本研究经本院医学伦理委员会批准。

1.2 纳入与排除标准

纳入标准：①入组对象有疑似PTB 症状与体征，如乏力、午后低热、咯血等；②自愿配合本研究；③接受PTB 快速检测技术进行早期诊断。

排除标准：①无典型影像学特征者；②已确诊有肺结核感染者；③有严重心肝肾病变或恶性肿瘤者；④临床资料不完整者；⑤精神疾病或配合度较差者。

1.3 方法

1.3.1 结核痰涂片法 采集检查对象痰标本1 mL，置入尖底离心管（有盖，50 mL），加少量生理盐水与痰液标本混合，然后倒入干净塑料管中，采取高压灭菌，离心处理，时间15 min，速度3 000 r∕min，将上清液弃去，以接种环挑取沉淀物涂抹在载玻片上，制作成厚薄相当的涂片。涂片制作好后，采取改良-尼氏法抗酸染色与脱色及复染等处理，最后采用显微镜完成检查，对100 视野进行观察，若检出3～9 条则判断为阳性。

1.3.2 Xpert MTB∕RIF 法 采集检查对象痰标本1 mL，置入尖底离心管（有盖，50 mL），采集标本后将SR痰标本处理液2 mL 加入管内，旋紧前处理管，放于振荡器内进行20～30 s 震荡，震荡结束，取下静置15 min，保障痰标本能完全液化。处理后的痰标本取2 mL，经加样孔将其加入Gene Xpert 反应盒，而反应盒则放于Gene Xpert 检测模块，实施自动检测，经检测系统窗口下对检测结果直接观察。结核痰涂片法检出阳性痰标本，经上述方法测定MTB 对利福平的药敏情况。

1.3.3 临床最终诊断 用改良罗氏固体培养法严格根据标准化程序操作执行。

1.4 观察指标

①将最终诊断结果作为金标准，分析结核痰涂片法的诊断结果。

②将最终诊断结果作为金标准，分析Xpert MTB∕RIF 法的诊断结果。

③比较两种方法诊断效能，准确度=（真阳例数+真阴例数）∕总例数×100%，敏感度=真阳例数∕（真阳例数+假阴例数）×100%，特异度=真阴例数∕（真阴例数+假阳例数）×100%。

1.5 统计方法

采用SPSS 20.0 统计学软件处理数据，计数资料以例数或(%)表示，进行χ2检验，P＜0.05 为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 结核痰涂片法诊断结果

140 例疑似PTB 患者金标准证实PTB 有125 例、非PTB 有15 例，结核痰涂片法诊断PTB 有93 例、非PTB 有47 例，见表1。

表1 结核痰涂片法诊断结果

2.2 Xpert MTB/RIF 法诊断结果

Xpert MTB∕RIF 法诊断PTB 有110 例、非PTB 有30 例，见表2。

表2 Xpert MTB/RIF 法诊断结果

2.3 两种检测方法的诊断效能比较

Xpert MTB∕RIF 法诊断的灵敏度、准确度均高于结核痰涂片法，差异有统计学意义（P＜0.05）。见表3。

表3 两种检测方法的诊断效能比较（%）

3 讨论

MTB 是TB 的主要病原菌，也是人体重要的胞内病原微生物，感染机体后可侵犯全身器官，以肺部最为多见，即PTB[6]。我国是PTB 高发国，且耐药现象普遍，导致这种情况的原因较多，比如缺乏高灵敏度的诊断技术，延误诊治[7]；金标准方法培养时间较长，比临床诊治需求滞后，从而造成耐药TB 传播风险增加[8]。基于此，如何快速完成检测，为早期诊断提供依据，成为PTB 防治重点。传统诊断技术中痰涂片法十分常用，可从形态学检测病原菌，同时荧光定量聚合酶链反应技术（fluorescence quantitative polymerase chain reaction, FQ-PCR）在临床中也被广泛应用。这类方式诊断PTB 有着较高的特异度，但其敏感度不强，而影响特异性的主要是非结核分枝杆菌。FQ-PCR 在临床应用中会受到样本干扰物质的影响，在不同的检验样本中敏感度不一，导致其临床检验结果可能偶尔出现假阳性，同时与传统痰涂片比较，价格也更昂贵，无法完全替代痰涂片法用于PTB 快速检测中。此外，这两种方法均有特异度高但敏感度低的特点，容易误诊或漏诊，加上肺结核病确诊依旧以培养法为主，但其耗时较长，为此为了确保快速获取检测结果，临床上依旧以X 线片、结核痰涂片、荧光定量PCR 等技术进行诊断，避免早期延误治疗。近几年，随着临床技术发展，Xpert MTB∕RIF 法作为WHO 新推荐的PTB 诊断快速检测技术，可同时检测MTB 及其利福平耐药情况，成为研究热点。

本研究结果显示：140 例疑似PTB 患者经金标准证实：PTB 有125 例、非PTB 有15 例；结核痰涂片法诊断PTB 有93 例、非PTB 有47 例；Xpert MTB∕RIF 法诊断PTB 有110 例、非PTB 有30 例。Xpert MTB∕RIF 法诊断灵敏度、准确度均高于结核痰涂片法（85.60% vs 65.60%、85.00% vs 61.43%）（P＜0.05）。本研究结果与同类报道类似，曾松芳等[9]学者针对疑似PTB 患者200 例进行研究，收集痰标本，完成比例法药敏试验、改良罗氏固体培养、痰涂片抗酸染色镜检及Xpert MTB∕RIF 检测，将改良罗氏固体培养结果作为金标准，Xpert MTB∕RIF 检测法检测MTB 敏感度为88.18%，而特异度为87.74%；以痰涂片抗酸染色法为金标准，Xpert MTB∕RIF 检测法检测MTB 敏感度为88.18%，特异度为100.00%；以比例法药敏试验为金标准，Xpert MTB∕RIF 检测法测定利福平耐药性敏感度为83.33%，特异度为100.00%。说明Xpert MTB∕RIF检测法与其余3 种方法之间有良好的一致性，其诊断效能较高。Xpert MTB∕RIF 检测法即结核分枝杆菌∕利福平耐药实时荧光定量核酸扩增检测法，这种检测方法以全自动半巢式实时PCR 作为基础，靶基因是rpoB 基因，2 h 内就可检测MTB 及其利福平耐药情况[10]。Xpert MTB∕RIF 法作为PTB 快速检测技术，在临床早期诊断PTB 中逐渐发展，这种检测方法有全封闭的检测系统，相关操作能自动化完成，而且污染小、人为干扰因素少，在既往临床研究中也看出其诊断准确度高，检测周期较短，利于早期快速诊断[11-12]。不过，Xpert MTB∕RIF法在国内起步较晚，其早期诊断是否明显优于其他快速检测技术有必要进一步探讨。通过本次研究看出，相比传统结核痰涂片而言，Xpert MTB∕RIF法有更高的阳性检出率，同时诊断效能也更高[13-14]。结核痰涂片操作复杂，耗时较长，不利于早期诊断[15]。而Xpert MTB∕RIF 法是一种综合检测分析系统，包括样本准确与定量PCR 扩增及荧光检测法，其操作简单方便，无需培训，只需标本试剂盒加待检样本，系统可自动化完成相关操作，24 h 内便可获取结果。同时，此法检测期间有良好密闭性，无交叉感染风险[16]。

综上所述，PTB 早期诊断中采取PTB 快速检测技术可取得不错的效果，但比较而言，Xpert MTB∕RIF 法比结核痰涂片可更好地检出PTB 患者，而且其诊断灵敏度、准确度更高，值得于PTB 早期诊断中应用。