浅析公共环境领域微生物检测方法及应用

赵莹 陈文

【摘要】公共场所中致病微生物可通过空气流通和公共用品进行传播，对人体产生危害，为加强公共场所卫生消毒意识，保证公共用品安全，本文就公共环境领域空气及公共用品的微生物检测方法及应用做出综述。

【关键词】公共环境；微生物采样；微生物检测

【DOI编码】10.3969/j.issn.1674-4977.2023.01.027

Analysis on Microbial Detection Methods and Application in Public Environmental Field

ZHAO Ying，CHEN Wen

（Liaoning Institute of Product Quality Supervision and Inspection，Shenyang 110000，China）

Abstract：Pathogenic microorganisms in public places can be spread through air circulation and public goods，which may cause harm to human body. In order to strengthen the awareness of sanitation and disinfection in public places and ensure the safety of public goods，this paper reviews the microbial detection methods and applications of air and public goods in the public environment field.

Key words：public environment；microbial sampling；microbiological detection

细菌、真菌、病毒等微生物附着在空气气溶胶表面便形成生物气溶胶[1]。公共场所内空气通过集中空调循环，可将致病微生物从一个房间扩散至其他房间，从而導致人体发生过敏反应和其他疾病的传播。同样地，公共场所内的公共物品也具有传播致病微生物的风险。如果公共物品使用后未消毒或消毒不彻底，则会导致致病微生物存活，甚至生长繁殖，造成疾病传播。因此应对公共场所定期进行微生物检测，以减少致病微生物传播风险，预防传染病扩散。本文就公共场所的空气及公共用品的微生物检测方法及应用进行综述，为完善公共卫生安全提供参考。

1公共环境内微生物采样方法

1.1空气

根据标准GB/T 18204.3—2013《公共场所卫生检验方法第3部分：空气微生物》规定，细菌总数、真菌总数采用撞击法和自然沉降法采样，β-溶血性链球菌使用撞击法采样，嗜肺军团菌采用液体冲击法采样[2]。

1）撞击法需避开通风口和通风管道等地，在距地面1.2～ 1.5 m、离墙壁1 m以上的位置，门窗关闭15～30 min后进行采样。50 m2以下的场所在中央设置一个采样点，50～200 m2设置2个对称点，200 m2以上的以对角线四等分点或梅花布点设置3～5个采样点。无菌操作使用撞击式微生物采样器按照说明书以28.3 L/min的流量采集5～15 min。

2）自然沉降法与撞击法的不同之处在于在50 m2以下的场所中以对角线四等分点设置3个采样点，在50 m2以上的场所中以梅花布点设置5个采样点。将含有培养基的平板放置于采样点后打开皿盖，暴露5 min采样。

3）液体冲击法采样点同上，使用倒入20 mL的GVPC液体培养基和1～2滴矿物油的微生物气溶胶采样器与微生物气溶胶浓缩器连接，按照仪器的说明书操作，采集1～2 m3空气量的气溶胶样品。再将倒入20 mL的酵母提取液和1～2滴矿物油的微生物气溶胶采样器与微生物气溶胶浓缩器连接，在同一采样点上按照仪器的说明书操作，采集1～2 m3空气量的气溶胶样品。采集后的样品需要在4 h内送检。

1.2公共用品

根据标准GB/T 18204.4—2013《公共场所卫生检验方法第4部分：公共用具微生物》规定，采样部位以检测对象分类，主要分为杯具、棉织品、洁具、鞋类、购物车（筐）、美容美发美甲和其他物品[3]。采样时使用灭菌后的干燥棉拭子在10 mL无菌生理盐水中浸湿反复均匀涂抹公共用品。将棉签手拿部分剪掉后放入生理盐水内，在采样后4 h内送检。

2公共环境内微生物检测方法

2.1细菌总数

2.1.1空气

1）采样后将营养琼脂平板放置于35～37℃培养箱培养48 h后菌落计数。2）结果报告。撞击法需按稀释比和采气体积将菌落计数单位换算成CFU/m3，以全部采样点中测定最大值作为测定结果。自然沉降法需要计数每一块平板上的菌落数并计算全部采样点的平均菌落数，单位为CFU/皿。

2.1.2公共用品

1）将含有采样后棉拭子的生理盐水充分摇匀作为1∶10的样品稀释液，再吸取1 mL的1∶10样品稀释液缓慢注入9 mL无菌生理盐水内反复吹吸作为1∶100的样品稀释液，以此方法进行10倍递增稀释。估计样品受污染的情况，选择1～2个合适稀释度的1 mL样品稀释液分别吸取到2个无菌平皿里。分别吸取1 mL生理盐水到2个无菌平皿里作为空白对照。待融化的计数琼脂培养基冷却到45～50℃时，向每个平皿中倒入15～20 mL培养基并混合均匀。琼脂凝固后在（36±1）℃培养箱中倒置培养（48±2）h。2）菌落计数。选择菌落数在30～300 CFU之间且无蔓延菌落生长的平板计数。3）结果报告。菌落计数后按结果公式进行计算得出结果报告。

2.2真菌总数

2.2.1空气

1）采样后将沙氏琼脂平板放置于28℃培养箱培养，每日观察并于第5天计数。若真菌数量过多可在第3天计数。

2）结果报告。同2.1.1中2）。

2.2.2公共用品

1）将含有采样后棉拭子的生理盐水充分震荡使孢子散开作为1∶10的样品稀释液。分别取1 mL的1∶10样品稀释液加入2个无菌平皿中。再取1 mL的1∶10样品稀释液加入9 mL无菌生理盐水内反复吹吸作为1∶100的样品稀释液。以此方法进行10倍递增稀释。估计样品受污染的情况，选择3个合适稀释度。待融化的沙氏琼脂培养基冷却至45℃时倒入灭菌平皿中。琼脂凝固后将平板倒置于25～28℃培养箱中培养3天后开始观察，共培养观察1周。2）菌落计数。选择菌落数在5～50 CFU之间的平板计数。3）结果报告。菌落计数后按结果公式进行计算得出结果报告。

2.3β-溶血性链球菌

空气微生物中β-溶血性链球菌使用血琼脂培养基培养计数的方法检测。将采样后的血琼脂平板在35～37℃培养箱培养24～48 h后观察菌落形态，根据菌落特征判断是否有β-溶血性链球菌生长及计数。按稀释比和采气体积将菌落计数单位换算成CFU/m3，以全部采样点中测定最大值作为测定结果。

2.4溶血性链球菌

公共用品的溶血性链球菌检测是取1 mL样品放入9 mL葡萄糖肉浸液肉汤中或直接在血平板上划线培养，若样品污染严重，则取1 mL样品放入9 mL在匹克氏肉汤中（36±1）℃培养24 h后接种于血平板上（36±1）℃培养24 h。挑起有溶血圆形的细小菌落在新的血平板上分离纯化处理，观察其溶血情况及菌落特征，并进行革兰氏染色。根据菌落特征及染色结果判断是否有溶血性链球菌生长。

2.5嗜肺军团菌

空气微生物检测此项。各取1 mL采样后的GVPC液体培养基和酵母提取液，分别加入盐酸氯化钾溶液，调节pH至2.2，静置15 min后分别加入1 mol/L氢氧化钾溶液中和pH至6.9。各取悬液0.2～0.3 mL分别接种于GVPC平板上。将平板置于35～37°C，5%浓度的CO2培养箱中培养10 d。从第3天开始观察菌落生长状态。挑选2个符合嗜肺军团菌菌落特征的可疑菌落，接种于BCYE琼脂平板和L-半光氨酸缺失的BCYE琼脂平板上35～37°C培养2 d确定阳性菌落。通过生化培养与血清学实验确定嗜肺军团菌菌型。2种采样液中有1种检出即为阳性，任一采样点检出阳性即判定阳性。

2.6大肠菌群

公共用品的大肠菌群检测采用乳糖胆盐发酵试验。将采集的样品倒入双料乳糖胆盐发酵培养液中放置于（36±1）℃培养（24±2）h。若不产酸产气即可报告大肠菌群阴性。若产酸产气则进一步进行分离培养和证实实验。分离培养是取一环产酸产气的培养液接种于伊红美蓝琼脂平板上（36±1）℃培养18～24 h，观察菌落形态并进行革兰氏染色。证实实验是在平板上挑取1～2个可疑菌落接种到乳糖发酵管中（36±1）℃培养（24±2）h，观察是否产酸产气。若有产酸产气现象产生，即为阳性；反之则为阴性。

2.7金黄色葡萄球菌

公共用品中的金黄色葡萄球菌检测是取1 mL样品放到9 mL氯化钠肉汤或胰酪胨大豆肉汤内（36±1）℃培养24 h。取1～2环接种液划线接种于Baird-Parker平板或血平板上（36±1）℃培养24 h，观察菌落形态。挑取符合菌落特征的可疑菌落进行革兰氏染色镜检。并通过血浆凝固酶试验判断是否有金黄色葡萄球菌生长。凡在平板上典型菌落生长，革兰氏染色及血浆凝固酶阳性现象，即为检出。

3公共环境内微生物检测应用情况

公共环境的微生物合格率可以反映该场所消毒效果。微生物指标越高则含有的致病微生物的可能性越高[4]。在公共环境空气微生物检测方面，罗定市林燕明等人于2019至2020年监测了128间公共场所空调房的空气微生物污染状况，结果发现真菌的合格率为92.97%、细菌合格率为96.09%，总体空气质量较为理想[5]。但与欧木生报道的罗定市157家公共场所在2017至2019年的室内空气真菌总数合格率93.3%及细菌总数合格率96.2%相比，略有下降[6]。陕西省贾茹等人于2018和2019年监测陕西省宾馆酒店共128家室内空气微生物污染情况，细菌总数合格率分别为97.48%和94.64%[7]。刘静媛等人报道了辽阳市2016至2019年52家5类重点公共场所的室内空气细菌总数合格率为100%，其中宾馆内空气真菌合格率逐年为60%、65%、65%和80%，呈上升趋势[8]。由以上结果可以看出，公共场所空气微生物检测趋向检测细菌总数，真菌总数测定合格率相对略低，应引起重视。

在公共用品微生物检测方面，六安市翟和亮等人在2018至2019的2年内共检测公共用品4109份，涉及公共场所135家，调查结果显示总样品合格率为96.11%，其中2018年合格率95.32%，2019年合格率为96.91%；2年内总样品合格率最低的为茶具类94.55%；金黄色葡萄球菌合格率为100%。朱昱等人报道了2018至2019合肥市部分公共用品微生物检测结果，涉及公共场所共104家，样品微生物合格率93.7%，其中合格率最低的样品是浴衣79.1%，大肠菌群和金黄色葡萄球菌2年平均合格率均为100%。陈建琳和刘明辉调查淮安市淮安区2015至2017年584家公共场所的微生物总合格率78.5%，其中合格率最高的是娱乐场所的茶具为89.4%，最低的是沐浴场所的拖鞋为57.8%；就检测项目而言，金黄色葡萄球菌合格率高达100%，霉菌的合格率最低仅为57.8%。以上监测数据表明公共用具中金黄色葡萄球菌检出率低，但金黄色葡萄球菌作为最常见的致病菌之一，仍要严加防范，不能掉以轻心。

4结语

近年我国各地公共场所的卫生状况逐年提高，但公共用品的微生物污染情况仍存在一定问题，要引起当地管理部门的重视。通过定期监测公共场所的微生物污染程度，可以加强卫生部门对当地公共场所卫生情况的了解，及时发现问题并提出整改，督促场所负责人加强消杀工作频率，提高公共场所的空气及公共用品卫生状况，保障公众的生命健康安全。

【参考文献】

[1]潘少兵，祝唐刘，潘雨琦，等.某高校公共场所空气微生物污染状况调查[J].安庆师范大学学报（自然科学版），2021，27（2）：88-90.

[2]公共场所卫生检验方法第3部分：空氣微生物：GB/T 18204.3—2013[S].

[3]公共场所卫生检验方法第4部分：公共用品用具微生物：GB/T 18204.4—2013[S].

[4]黄意府，麻晓莉.公共场所集中空调通风系统卫生状况及清洗消毒效果的综述[J].洁净与空调技术，2021（1）：8-11.

[5]林燕明，欧木生，梁美钿，等.罗定市公共场所空调房空气微生物污染状况监测分析[J].中国卫生工程学，2021，20（1）：40-41+44.

[6]欧木生.公共场所空气微生物监测结果分析[J].基层医学论坛，2020，24（11）：1587-1588.

[7]贾茹，郑晶利，丁勇，等.2018—2019年陕西省公共场所微生物污染状况[J].卫生研究，2021，50（2）：323-326.

[8]刘婧媛，翟景先，李有.辽阳市2016—2019年公共场所健康危害因素微生物检测结果分析[J].中国公共卫生，2020，36（4）：632-635.

【作者简介】

赵莹，女，1996年出生，助理工程师，研究方向为微生物检测。通讯作者：陈文，男，1989年出生，工程师，研究方向为室内环境检测。联系方式：13238881189。

（编辑：李加鹏）