川木瓜水提液降低小鼠酒精性脂肪肝作用的实验研究

覃洪含 陈琳 黎为能

【摘 要】

目的：观察川木瓜水提液降低小鼠酒精性脂肪肝的作用。方法：将50只小鼠随机分为空白组、模型组、川木瓜水提液低剂量组（2 g/kg）、川木瓜水提液中剂量组（4 g/kg）和川木瓜水提液高剂量组（8 g/kg）。用川木瓜水提液和56%红星二锅头连续小鼠灌胃30 d（先灌胃川木瓜水提液，半小时后灌胃56%红星二锅头）制造小鼠酒精性脂肪肝模型，测定小鼠血清谷丙转氨酶（ALT）和谷草转氨酶（AST）的活性、甘油三酯（TG）和總胆固醇（TC）的含量以及肝匀浆中丙二醛（MDA）、超氧化物歧化酶（SOD）的含量。结果：酒精模型组小鼠的TC、TG、ALT、AST和MDA均高于空白对照组，SOD的活力低于空白对照组，差异有统计学意义（P＜0.01）。与模型组比较，川木瓜水提液中剂量组和川木瓜水提液高剂量组均能显著降低小鼠血清ALT、AST、TG、TC含量，显著提高SOD的活力，差异均有统计学意义（P＜0.01）。结论：川木瓜水提液具有一定地降低小鼠酒精性脂肪肝的作用。

【关键词】 川木瓜水提液；酒精性脂肪肝；小鼠

【中图分类号】R285.6   【文献标志码】 A    【文章编号】1007-8517（2023）06-0023-04

Experimental Study on the Effect of Water Extract of  Chaenomeles Speciosa on Reducing Alcoholic Fatty Liver in Mice

QIN Honghan CHEN Lin LI Weineng*

Youjiang Medical University for Nationalities，School of Pharmacy，Baise 533000，China

Abstract：

Objective To observe the effect of water extract of Chaenomeles speciosa  on reducing alcoholic fatty liver in mice. Methods 50 mice were randomly divided into blank group， model group， low dose group （2 g/kg）， medium dose group （4 g/kg） and high dose group （8 g/kg） of water extract of Chaenomeles speciosa. Alcoholic fatty liver model of mice was made by intragastric administration of water extract of Chaenomeles speciosa and 56% Red star Erguotou for 30 consecutive days （first by intragastric administration of water extract of Sichuan papaya and 56% red star Erguotou half an hour later）. The activities of alanine aminotransferase （ALT） and aspartate aminotransferase （AST）， the contents of triglyceride （TG） and total cholesterol （TC） in serum， and the contents of malondialdehyde （MDA） and superoxide dismutase （SOD） in liver homogenate were determined. Results TC， TG， ALT， AST and MDA in alcohol model group were higher than those in blank group， and SOD activity was lower than that in blank control group， the difference was statistically significant （P<0.01）. Compared with model group， medium dose group and high dose group of water extract of Chaenomeles speciosa significantly reduced the contents of ALT， AST， TG and TC in serum of mice， and significantly increased the activity of SOD， with statistical significance （P<0.01）. Conclusion Water extract of Chaenomeles speciosa can reduce alcoholic fatty liver in mice.

Keywords：

Water Extract of Chaenomeles Speciosa; Alcoholic Fatty Liver; Mice

肝损伤类型主要有酒精性、化学性、药物性和免疫性损伤，临床表现主要有肝损伤坏死、变性、肝纤维化、肝组织硬化、肝脏癌症等［1］。酒精性脂肪肝的形成则是由于酒精中的乙醇，它能使肝细胞发生变性和坏死，对肝脏的代谢功能等产生很大的危害，从而导致肝脏脂肪沉积。酒精性脂肪肝是由于长期饮酒导致的疾病，发病率高，多发于青壮年男性，患病时间长，随着病情加重可能有肝硬化的风险。

川木瓜，学名Chaenomeles speciosa（Sweet） Nakai，又被称为皱皮木瓜、铁脚梨、贴梗海棠和宣木瓜等，是一种落叶灌木，属于蔷薇科植物。全果均可入药，具有平肝舒经、和胃化湿之效，而临床上可用于顽固性风湿病、腰膝酸痛等的治疗［2-3］。其化学成分比较复杂，含多糖、黄酮、有机酸、氨基酸等多种活性成分，有相关研究［4-6］报道表明天然的多糖成分具有抗氧化、抗肿瘤的作用。也有研究［7-8］报道川木瓜具有保护CCl4急性肝损伤的作用，但是尚未发现川木瓜对酒精性脂肪肝作用的报道，为此本研究对川木瓜水提液降低小鼠酒精性脂肪肝的作用进行了实验研究。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 试剂 谷丙转氨酶（ALT/GPT）测试盒、谷草转氨酶（AST/GOT）测试盒、甘油三酯（TG）测试盒、总胆固醇（T-CHO）、蛋白定量测试盒、丙二醛（MDA）测试盒、超氧化物歧化酶（SOD）测试盒（均购自南京建成生物工程研究所，批号分别为：20180407、20180409、20180409、20180409、20180615、20180409、20180409）；红星牌56度二锅头（北京酿酒厂）；其他试剂均为国产分析纯。

1.1.2 川木瓜 当年6月份采摘于广西壮族自治区凌云县泗城镇陇浩村种植的新鲜果为样品，经课题组老师集体讨论确定为川木瓜，阴凉环境下晒干备用。

1.1.3 动物  昆明种健康小鼠50只，体质量（18±2）g，由右江民族医学院动物实验中心提供（生产许可证：SCXK桂2017-0003；使用许可证：SCXK桂2017-0004）。

1.1.4 仪器 便携式电子天平（型号：SE602F）、安亭TGL-16G高速离心机、DY89-11电动匀浆机、THZ-C台式空气恒温振荡器、VORTEX-5漩涡振荡器、T6新世纪紫外分光光度计、HH-4数显恒温水浴锅（常州金坛区环宇科学仪器厂）、粉碎机。

1.2 方法

1.2.1 制备川木瓜水提液 取已经阴干并经过粗粉碎的川木瓜果实100 g，置于恒温水浴锅中用适量自来水没过药材浸泡20 min后，加水10倍（1000 mL），用大火煮开后改小火煮40 min，用纱布过滤，滤渣继续加入1000 mL水，同上述方法操作，合并两次滤液浓缩至125 mL。浓缩液则为高剂量（0.8 g/mL），浓缩液10 mL加入纯化水20 mL则为中剂量（0.4 g/mL），浓缩液10 mL加入纯化水40 mL则为低剂量（0.2 g/mL）。

1.2.2 动物分组、造模及给药 将50只小鼠按照随机的原则分为空白对照组、酒精模型组、川木瓜水提液高剂量组、川木瓜水提液中剂量组和川木瓜水提液低剂量组，共5组。按小鼠体重（0.1 mL/10 g）进行灌胃，空白对照组每天给予生理盐水；酒精模型组每天给予生理盐水和56%红星二锅头，按照先灌生理盐水，半小时后再灌酒精的方法，连续灌胃30 d，可造小鼠酒精性脂肪肝模型；按高剂量（8 g/kg）、中剂量（4 g/kg）、低剂量剂量（2 g/kg）组每天先灌小鼠水提液，半小时后，再灌酒精的方法，连续灌胃30 d，饲养期间不限制小鼠饮水及进食。

1.2.3 生化指标测定 连续30 d灌胃给药，最后一次灌胃后，禁食不禁水12 h，眼球静脉取血，全血离心（4000 r/min），抽取血清，检测血清中ALT、AST、TG、TC水平；将小鼠解剖取出肝脏称总重并在肝脏同一部位取约0.5 g肝组织做匀浆（冰浴条件下与0.9%生理盐水按照1∶9的比例稀释，在玻璃匀浆管中匀浆），匀浆液在低温离心机下离心（4000 r/min），测出匀浆上清液的SOD、MDA的吸光度。

1.2.4 统计学分析 采用SPSS 20.0 软件进行统计分析，计数资料数据以（x-±s）表示，多组间比较采用单因素方差分析，两两比较采用q检验（Newman-Keuls法），以P<0.05为差异具有统计学意义。

2 结果

2.1 川木瓜水提液对小鼠血清TG、TC水平的影响 与空白对照组比较，模型组小鼠血清TG、TC明显增加，两组比较差异有统计学意义（P＜0.05）。与模型组比较，川木瓜水提液高剂量组、川木瓜水提液中剂量组和川木瓜水提液低剂量组小鼠血清TG、TC明显降低，差异均有统计学意义（P＜0.05）。见表1。

2.2 川木瓜水取液对各组小鼠血清ALT、AST含量的影响 与空白对照组比较，模型组血清ALT、AST含量明显增加，两组比较差异有统计学意义（P＜0.05）。与模型组比较，川木瓜水提液高剂量组和川木瓜水提液中剂量组小鼠血清ALT含量明显降低，差异均有统计学意义（P＜0.05）；川木瓜水提液高剂量组、川木瓜水提液中剂量组和川木瓜水提液低剂量组小鼠血清AST含量明显降低，差异均有统计学意义（P＜0.05）。见表2。

2.3 川木瓜水提液对小鼠肝脏组织SOD、MDA水平的影响  与空白对照组比较，模型组血清SOD活力、MDA含量明显降低，两组比较差异有统计学意义（P＜0.05）。与模型组比较，川木瓜水提液高剂量组、川木瓜水提液中剂量组和川木瓜水提液低剂量组小鼠血清SOD活力明显增加，差异均有统计学意义（P＜0.05）；川木瓜水提液中剂量组和川木瓜水提液低剂量组小鼠血清MDA含量明显降低，差异均有统计学意义（P＜0.05）。见表3。

3 讨论

酒精性脂肪肝的形成主要是由于长期不节制的饮酒所导致的肝脏疾病，其发病机制有诸多因素，其一，是与机体内酒精代谢的酶相关［9］，因为酒精会在机体的代谢过程中产生许多自由基和活性氧，致氧化应激［10］、脂质过氧化［11］、蛋白质氧化、DNA损伤和化合物的生成［12-13］及线粒体的代谢功能紊乱［14］;其二，也与氧化应激的信号传导等相关，才致使酒精性肝损害［15］。酒精能够激活氧气产生自由基，损伤肝细胞。酒精引起的肝脂肪变性最初表现为肝脏中的脂滴积聚，脂质堆积使得血液中TG、TC浓度升高，但随着肝脏组织因脂质过载而受损，循环和驻留的免疫细胞（包括枯否细胞和浸润的巨噬细胞和中性粒细胞）通过产生炎性细胞因子对肝损伤作出反应，如 TNF-α 和 IL-1β。慢性饮酒和酗酒等饮酒模式会导致反复的肝损伤、炎症和氧化应激［16］。而SOD具有抗氧化的作用，能够清除体内代谢所产生的大量自由基，从而达到保护肝脏的作用，被视为生命科技中最具神奇魔力的酶，是人类体内的垃圾清道夫，对机体的氧化與抗氧化平衡起着很重要的作用。MDA是脂质过氧化反应中最重要的产物之一，它的产生加剧了膜的损伤，因此它的含量高低可以反应肝脏所受损的情况及抗逆性。正常血清中的AST含量低，而当相应的细胞受损伤时，细胞膜通透性增加，胞浆中的AST入血，故其血清中的AST活力升高。ALT正常情况下活力较低，而当细胞受损，只要少量释放入血中，血清中其酶的活性即会显著升高，因此ALT是诊断病毒性肝炎、酒精肝的一个重要指标。饮酒会促使脂肪在肝脏的积累，含量过高则会对肝脏造成伤害，所以常被用于血脂分析。

本次研究川木瓜药材来源于广西凌云县，川木爪是凌云县的特产，种植量面积广，药用研究意义大。其化学成分［17］包括黄酮类、皂苷类、三贴类、多糖类、有机酸类等等，国家药典［18］规定川木瓜定量成分为齐墩果酸、熊果酸，其药理作用有保肝、降血糖、降血压、软化血管、提高免疫力。本次实验中，酒精模型组小鼠的TC、TG、ALT、AST和MDA均高于空白对照组，SOD的活力低于空白对照组，表明小鼠酒精性脂肪肝模型造模成功。川木瓜中、高剂量组在一定程度上能够提高SOD的活力，抑制MDA降低其含量，这表明川木瓜提取液能够减少酒精对肝脏的过氧化损伤，抑制炎症因子的释放并且还能增强机体的抗氧化能力，对酒精性脂肪肝具有一定的保护作用。

本研究尚存在不足之处：只做了小鼠血清学的检测，没有做病理观察，也没有对基因表达情况进行检测，所以对川木瓜的保肝作用机制尚未明确。下一步工作将会对川木瓜保肝作用的活性成分及作用机制研究，从肝细胞损伤、脂质代谢的调控机制、信号转导通路等进行作用机制研究。

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（收稿日期：2022-07-21 编辑：陶希睿）