CK、MUC5ac、Ki67表达与胃癌癌前病变的关系及对胃癌早期诊断的价值*

徐星榕,白菊萍,边 芸,权小玲,姚家喜

1.张掖市第二人民医院病理科,甘肃张掖 734000;2.河西学院附属张掖人民医院病理科,甘肃张掖 734000;3.河西学院附属张掖人民医院泌尿外科,甘肃张掖 734000

胃癌是消化内科中较为多见的癌症,好发于中老年人群[1]。早期胃癌并无明显症状,部分患者可表现为胃部疼痛、黑便和体重减轻等症状[2]。目前胃癌的发病机制并不明确,可能与遗传、饮食、感染等有关。胃黏膜萎缩和肠化生是一种病理表现,均属于癌前状态,已有研究证实其是引起胃癌的危险因素[3]。细胞角蛋白(CK)主要分布于上皮细胞,是一种复杂的中间丝[4]。CK7和CK20均可体现细胞的分化阶段,在胃癌的发病及分化中起到关键的作用。黏蛋白(MUC)5ac是一种分泌型糖蛋白,可对胃黏膜起到保护的效果,在细胞生长、信号传导和黏附中发挥作用[5]。核抗原Ki67是细胞增殖核抗原的一种,可反映出肿瘤细胞的增殖活性[6]。上述几种指标在胃癌的检测中均有一定意义,但目前与癌前病变的关系仍有待考究。因此本研究选取张掖市第二人民医院收治的胃部不适患者的临床资料进行分析,以研究CK、MUC5ac、Ki67表达与胃癌癌前病变的关系及对胃癌早期诊断的价值。

1 资料与方法

1.1一般资料 选取2019年10月至2021年10月于张掖市第二人民医院就诊的102例胃部不适患者为研究对象,其中男57例,女45例;年龄39～78岁,平均(57.63±5.65)岁,由张掖市第二人民医院2名经验丰富的胃镜医师和病理医师联合诊断确诊为胃部良性病变患者47例(良性病变组),胃癌癌前病变患者32例(胃癌癌前病变组),早期胃癌患者23例(早期胃癌组)。纳入标准:(1)患者均符合《中国慢性胃炎共识意见(2017年,上海)》[7]中相关诊断标准;(2)患者入院前未接受药物治疗;(3)患者于张掖市第二人民医院接受胃镜和病理检查;(4)患者对本研究知情且签署同意书。排除标准:(1)患者既往合并肠结核、胃食管反流或肠道肿瘤等消化道恶性病变;(2)患者合并严重肝、肾功能障碍;(4)患者既往接受胃肠道手术;(5)患者存在神经认知功能障碍,无法配合研究。

1.2方法 收集患者的病灶组织进行检查,采用10%甲醛溶液进行固定,并以梯度浓度乙醇进行脱水处理;采用BIOBASE全自动包埋机(济南程腾生物技术有限公司)将组织包埋成块,再以配套组织切片机连续切片;随后以二甲苯、枸橼酸钠缓冲液和过氧化氢溶液进行脱蜡、抗原修复和过氧化氢酶阻断,采用磷酸盐缓冲液反复漂洗3次;随后加入山羊血清封闭,加入稀释后的鼠抗人CK20单克隆抗体(上海亿欣生物科技有限公司)、鼠抗人CK7单克隆抗体(上海亿欣生物科技有限公司)、鼠抗人MUC5ac单克隆抗体(艾美捷科技有限公司)和鼠抗人Ki67单克隆抗体(北京普利莱基因技术有限公司);在4 ℃下孵育过夜,随后以磷酸盐缓冲液反复漂洗3次后滴加羊抗鼠IgG(北京索莱宝科技有限公司);采用辣根过氧化物酶显色试剂盒(北京索莱宝科技有限公司)进行显色处理,以苏木精(成都普菲德对照品科技有限公司)进行复染,梯度乙醇脱水,中性树脂完成封片;在显微镜下对CK20、CK7、MUC5ac、Ki67表达进行观察。结果判定:由两名经验丰富的医师对结果进行判定。CK20、CK7阳性染色均为淡黄色、棕黄色或者棕褐色,定位在细胞膜;MUC5ac阳性染色为棕黄色,定位在细胞质;Ki67阳性染色为棕黄色,定位在细胞核。阳性细胞计数:阳性细胞在视野内占比<5%为0分,占比在5%～<25%为1分,占比在25%～<50%为2分,占比在50%～<75%为3分,占比≥75%为4分;染色强度:淡黄色为1分;棕黄色为2分;棕褐色为3分;阳性细胞计数分数与染色强度分数相乘为最终得分,0分为阴性,>0分为阳性。联合诊断标准:只要其中任意一项为阳性即可判断为阳性。

1.3观察指标 比较3组患者CK20、CK7、MUC5ac、Ki67的表达情况,并分析CK20、CK7、MUC5ac、Ki67表达对于早期胃癌的诊断价值。

2 结 果

2.13组患者CK20、CK7、MUC5ac、Ki67表达情况比较 良性病变组、胃癌癌前病变组和早期胃癌组CK20、CK7、MUC5ac、Ki67阳性表达率比较,差异均有统计学意义(P<0.05);胃癌癌前病变组和早期胃癌组CK20、CK7、Ki67阳性表达率均高于良性病变组,MUC5ac阳性表达率低于良性病变组;早期胃癌组CK20、CK7、Ki67阳性表达率均高于胃癌癌前病变组,MUC5ac阳性表达率低于胃癌癌前病变组,差异均有统计学意义(P<0.05)。见表1。

表1 3组患者CK20、CK7、MUC5ac、Ki67表达情况比较[n(%)]

2.2胃癌癌前病变患者CK20、CK7、MUC5ac、Ki67蛋白表达与临床病理特征的关系 胃癌癌前病变组不同性别、年龄、发病部位和病理类型患者CK20、CK7、MUC5ac、Ki67阳性表达率比较,差异均无统计学意义(P>0.05)。见表2。

表2 胃癌癌前病变患者CK20、CK7、MUC5ac、Ki67蛋白表达与临床病理特征的关系[n(%)]

2.3CK20、CK7、MUC5ac、Ki67阳性表达诊断早期胃癌的价值分析 通过绘制ROC曲线分析发现,CK20诊断早期胃癌的曲线下面积(AUC)为0.849,灵敏度为82.6%,特异度为87.2%;CK7诊断早期胃癌的AUC为0.860,灵敏度为87.0%,特异度为85.1%;MUC5ac诊断早期胃癌的AUC为0.827,灵敏度为73.9%,特异度为91.5%;Ki67诊断早期胃癌的AUC为0.838,灵敏度为78.3%,特异度为89.5%;4项指标联合检测诊断早期胃癌的AUC、灵敏度和特异度分别为0.892、89.0%和92.5%,均高于各项指标单独检测,差异均有统计学意义(P<0.05)。见表3。

表3 CK20、CK7、MUC5ac、Ki67阳性表达诊断早期胃癌的价值分析

3 讨 论

早期胃癌并无明显症状,大部分患者出现症状时已经发展至终末期,导致预后效果较差。胃癌是一个持续性病理性改变,可经历正常胃黏膜、浅表性胃炎、萎缩性胃炎、肠上皮化生和异型增生等过程,最终进展为胃癌[8]。因此对胃癌癌前病变和早期胃癌的诊断极为重要。本研究为此展开讨论,为临床上胃癌癌前病变和早期胃癌的诊断提供基础。

CK是细胞骨架成分的一种,能够发挥稳定细胞形态、运动和调节细胞分化的能力[9]。CK20是CK的一种,具有较高的上皮特异性,在非上皮细胞或者组织中均无表达。通常情况下,CK20主要分布在细胞核和细胞器周围。当癌变细胞恶性增生时,CK需要适应恶性细胞引起的细胞形态和功能的改变,进而出现一系列的状态重建[10]。CK7最初是在人体卵巢细胞株中被提取,在乳腺、肺、上皮组织和子宫内膜中均呈阳性表达[11]。本研究结果显示,胃癌癌前病变组和早期胃癌组CK20和CK7阳性表达率均高于良性病变组。可见CK20和CK7均在胃癌的发生、发展中发挥着重要的作用。同时进行诊断价值分析发现,两种蛋白对于早期胃癌的诊断价值均较高。MUC5ac是胃型分泌型黏蛋白的一种,由胃肠道和呼吸道等上皮细胞生成,可发挥保护黏膜上皮和润滑的效果[12]。MUC5ac是人体黏膜黏液的重要组成部分,与上皮细胞更新、分化、完整性保持及抵御肿瘤侵袭存在一定的相关性。张月凡等[13]研究发现,MUC5ac在胃癌组织中呈低表达,与患者分化程度和预后存在相关性。这与本研究结果,胃癌癌前病变组和早期胃癌组MUC5ac阳性表达率低于良性病变组一致。本研究结果还显示,MUC5ac对于早期胃癌的诊断价值较高。这是因为,胃部出现病理性改变时,MUC5ac也出现变化,蛋白质结构异常,硫基化、糖基化受到抑制,这均会影响MUC5ac对于胃腺的保护,进而导致胃癌癌前病变及胃癌[14]。Ki67是大分子蛋白的一种,在细胞周期G1后期逐渐开始表达,在S期及G2期表达逐步升高,直到M期表达达到最高值。Ki67具有DNA结合特性,是有丝分裂DNA结构的重要维持蛋白,在肿瘤细胞增殖期表达明显升高[15]。本研究结果显示,胃癌癌前病变组和早期胃癌组Ki67阳性表达率均高于良性病变组。这与张兴旺等[16]研究结果一致,提示Ki67在胃癌患者病情进展中具有重要的检测价值。本研究进一步行诊断价值分析,结果显示,Ki67对于早期胃癌的诊断价值较高,这也进一步证实Ki67在早期胃癌的检测中具有重要意义。另外,本研究对4项指标进行联合检测发现,其对于早期胃癌的诊断价值均高于各项指标单独检测。可见,4项指标联合检测能够弥补各项指标检测的不足之处。

综上所述,CK20、CK7、MUC5ac、Ki67能够有效反映胃癌癌前病变和早期胃癌情况,4项指标联合检测对于胃癌癌前病变和早期胃癌的诊断价值较高,能够有效弥补单项指标检测的不足。