粤北地区新生儿耳聋基因突变分析

马占忠，黄文波，徐静，邱建武，刘玉兰，叶美娴，范舒舒

·论著·

粤北地区新生儿耳聋基因突变分析

马占忠，黄文波，徐静，邱建武，刘玉兰，叶美娴，范舒舒

512026 广东，汕头大学医学院附属粤北人民医院产前诊断中心（马占忠、徐静、刘玉兰、范舒舒），生殖医学中心（黄文波），新生儿科（邱建武），生物样本库（叶美娴）

探讨粤北地区新生儿耳聋基因突变情况，为开展遗传咨询和出生缺陷防控提供科学依据。采用 PCR 和杂交技术检测 2018 年 1 月– 2021 年 12 月在粤北人民医院出生的 7696 例新生儿的 4 个耳聋基因：GJB2、SLC26A4、mtDNA 和 GJB3。在 7696 例新生儿中共检出 319 例耳聋基因携带者，阳性率为 4.15%。其中 GJB2 基因突变检出 166 例（2.16%），SLC26A4 基因突变检出 105 例（1.36%）；mtDNA 基因突变检出 33 例（0.43%）；GJB3 基因突变检出 15 例（0.19%）。最常见的耳聋基因是 GJB2，235delC 为其热点突变；其次是 SLC26A4 基因，IVS7-2A > G 为其热点突变。粤北地区新生儿耳聋基因携带率较高。开展新生儿耳聋基因筛查，对临床遗传咨询和出生缺陷防控有积极意义。

耳聋基因； 新生儿； 基因突变； 个体化； 遗传咨询

据 WHO 统计，全球约有 5 亿人患有致残性听力损伤。听力损失是致残的第四大主要因素，占所有致残原因的 5.8%[1]。约 70% 的非综合征型耳聋（non-syndromic hearing loss，NSHL）是遗传性耳聋[2-3]。我国人群携带的耳聋基因主要有 GJB2、SLC26A4、线粒体 DNA（mtDNA）和 GJB3 基因[4]。本研究采用 PCR 和杂交技术对 7696 例新生儿进行耳聋易感基因检测，探讨粤北地区新生儿耳聋基因突变情况，为耳聋的精准防治提供科学依据。

1 对象与方法

1.1 研究对象

回顾性分析 2018 年 1 月– 2021 年 12 月在粤北人民医院出生的 7696 例新生儿的耳聋基因检测结果，本研究通过粤北人民医院伦理委员会批准（KY-2021-219），征得新生儿监护人同意并签署知情同意书。

1.2 方法

按照采血规范采集3 滴新生儿足跟血于血斑卡上，待自然晾干后装入无菌密封袋中，送至分子遗传实验室立即检测或 2 ～ 8 ℃保存备用。

采用广州凯普医药科技有限公司生产的耳聋易感基因检测试剂盒（国械注准 20153401698），检测 4 个耳聋基因的 13 个突变位点。其中 GJB2 基因包括 35del G、155delTCTG、176del16、235delC 和 299del AT；SLC26A4 基因包括 1229C > T、2168A > G 和 IVS7-2A > G；mtDNA 基因包括 1555A > G、1494C > T、7445A > G 和 12201T > C；GJB3 基因包括 538C > T。实验操作和阳性判断标准参照试剂盒说明书和标准操作规程。

PCR 反应体系：基因组 DNA 2 μl，PCR 反应液 27.5 μl，DNA 聚合酶 0.5 μl。PCR 反应条件：95 ℃预变性 9 min；95 ℃变性 30 s，55 ℃退火 30 s，72 ℃延伸 1 min，40 个循环；72 ℃延伸5 min，4 ℃保存。

对于耳聋基因筛查阳性的新生儿，结合听力筛查结果进行遗传咨询指导，并对其父母进行家系验证。

1.3 统计学处理

采用 SPSS22.0 软件进行统计学分析，计数资料用例（n）或百分率（%）表示。

2 结果

7696 例新生儿中共检测出耳聋基因突变者 319 例，阳性率为 4.15%。其中 GJB2 基因突变检出 166例（2.16%，166/7696），SLC26A4 基因突变检出 105 例（1.36%，105/7696）；mtDNA 基因突变检出 33 例（0.43%，33/7696）；GJB3 基因突变检出 15 例（0.19%，15/7696）。详见表 1 和图 1。

表1 粤北地区 7696 例新生儿耳聋基因突变分析

Table 1 Analysis of deafness gene mutations in 7696 neonates in northern Guangdong

基因 Gene突变类型 Mutants例数（n） Cases (n)阳性率（%） Positive rate (%) GJB2 1662.16 35delG 杂合突变 00.00 155delTCTG 杂合突变 00.00 176del16 杂合突变 80.10 235delC 杂合突变1331.73 299del AT 杂合突变 250.32 SLC26A4 1051.36 IVS7-2A > G 杂合突变 801.04 1229C > T 杂合突变 160.21 2168A > G 杂合突变 90.12 mtDNA 330.43 1494C > T 均质突变 40.05 1555A > G 均质突变 150.19 1555A > G 异质突变 80.10 7445A > G 均质突变 60.08 GJB3538C > T 杂合突变 150.19 合计 Total 3194.15

图1 耳聋基因膜条杂交图（A：野生型；B：GJB2 基因 235delC 杂合突变；C：SLC26A4 基因 IVS7-2A > G 杂合突变；D：mtDNA 1555A > G 均质突变；E：GJB3 基因 538C > T 杂合突变）

Figure 1 Membrane hybridization map of deafness gene (A: Wild-type; B: GJB2 gene 235delC heterozygous mutation;C: SLC26A4 gene IVS7-2A > G heterozygous mutation; D: mtDNA 1555A > G homogenous mutation; E: GJB3 gene 538C > T heterozygous mutation)

3 讨论

在粤北地区的 7696 例新生儿中共检出 319 例耳聋基因突变携带者，阳性率 4.15%，低于全国28 个省区的平均水平 5.68%[5]；高于广东省惠州市 3.63%[6]，广州市 3.68%[7]，江门市 3.72%[8]和粤东地区 3.85%[9]；与珠海市报道的 4.2% 基本一致[10]。粤北地区新生儿最常见的耳聋基因是 GJB2 基因，235delC 为其热点突变。其次是 SLC26A4 基因，IVS7-2A > G 为其热点突变，与国内文献报道基本一致[11-12]。与我们之前报道的韶关地区 1242 例新生儿中最常见的耳聋基因是 SLC26A4 不同[13]，本研究样本量更大，更具有代表性。

GJB2 基因是遗传性耳聋最常见的突变基因，以 235delC 为主。GJB2 基因位于 13 号染色体，编码缝隙连接蛋白 26（Cx26），突变会导致 Cx26 蛋白缺乏引起先天性感音神经性耳聋[14]。SLC26A4 基因是遗传性耳聋的第二大突变基因，其中 IVS7-2A > G 突变最常见。SLC26A4 基因位于7 号染色体，编码 pendrin 蛋白，突变会导致前庭导水管扩张的非综合征型耳聋。mtDNA 突变会导致耳蜗和前庭细胞的功能障碍，引起耳聋，是药物性致聋的病因之一。患者使用氨基糖苷类药物会导致耳聋的发生，表现为迟发性听力下降，此类患者及其母系成员应当终身禁用氨基糖苷类药物[15]。在使用氨基糖苷类药物前进行耳聋基因突变筛查，可以有效预防一针致聋的悲剧发生。GJB3 基因位于 1 号染色体，编码缝隙连接蛋白 31，突变会引起后天迟发型感音神经性耳聋，在我国 GJB3 基因突变的携带率较低[16]，本研究中 GJB3 基因突变率也较低，仅有 0.19%。

我国的新生儿常规听力筛查存在漏诊的可能性，有必要将耳聋基因也纳入新生儿听力筛查，及时发现高风险人群，进行干预或诊疗指导，对耳聋的个体化精准防治具有重要意义。

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Analysis of deafness gene mutations of neonates in northern Guangdong

MA Zhan-zhong, HUANG Wen-bo, Xu Jing, Qiu Jian-wu, Liu Yu-lan, YE Mei-xian, Fan Shu-shu

Author Affiliation:Prenatal Diagnosis Center (MA Zhan-zhong, XU Jing, LIU Yu-lan, Fan Shu-shu), Reproductive Medicine Center (HUANG Wen-bo), Neonatology (QIU Jian-wu), Biobank (YE Mei-xian), Yuebei People's Hospital, Medical College of Shantou University, Guangdong 512026, China

To explore the deafness gene mutations of neonates in northern Guangdong and to provide scientific basis for genetic counseling and prevention and control of birth defect.PCR and hybridization technique were used to detect four deafness genes, namely GJB2, SLC26A4, mtDNA and GJB3, in 7696 neonates in Yuebei People's Hospital from January 2018 to December 2021.A total of 319 deafness gene carriers were detected among 7696 neonates and the positive rate was 4.15%. Among them, 166 cases (2.16%) were found to have GJB2 gene mutation, 105 cases (1.36%) were found to have SLC26A4 gene mutation, 33 cases (0.43%) were found to have mtDNA gene mutation, and 15 cases (0.19%) were found to have GJB3 gene mutation. The most common deafness gene was GJB2 with 235delC as its hotspot mutation, and then followed by SLC26A4 carrying IVS7-2A > G as its hotspot mutation.There exists a high prevalence of deafness gene mutations among neonates in the northern Guangdong. It is of great significance for clinical genetic counseling and birth defect prevention and control to carry out genetic screening for deafness in neonates.

deafness gene; neonates; gene mutation; individuation; genetic counseling

FAN Shu-shu, Email: shaoguanfss@aliyun.com

10.3969/j.issn.1673-713X.2023.03.006

韶关市科技计划项目（210926144531422）；韶关市卫生健康科研项目（Y22091）；粤北人民医院临床科研培育项目（RS-04）

范舒舒，Email：shaoguanfss@aliyun.com

2023-01-06