miR-574-5p和miR-144-5p在腹主动脉瘤患者外周血中的表达及其与腔内血栓厚度的关系

徐 鹏 单金涛 孙利坤

腹主动脉瘤(AAA)属于动脉扩张性疾病,主要是由动脉壁退行性病变而引起,外伤、感染、动脉炎症亦参与AAA的发生与发展[1-2]。大部分AAA患者早期无明显症状,随着病情进展,肿瘤生长,动脉瘤一旦发生破裂,将引起患者剧烈腹痛、大出血等情况,病情极其凶险,严重者甚至在短时间内休克、死亡[3-4]。临床相关研究认为,AAA的形成、生长与破裂与腔内血栓(ILT)的厚度存在紧密联系[5]。微小RNA(miR)是由18～22个核苷酸组合而成的非编码小RNA,稳定存在于血清中,并且不受环境温度的影响,与机体的生理、病理过程存在密切联系。同时,miR调控人类1/3以上的基因,超过一半的miR基因处于肿瘤有关的染色体或其脆性位点上,与肿瘤的发生发展有关,发挥着癌基因或抑癌基因的作用。微小RNA-574-5p(miR-574-5p)、微小RNA-144-5p(miR-144-5p)属于其中一种,前者在肿瘤细胞内呈高表达,而后者在肿瘤细胞内呈低表达。但临床关于miR-574-5p、miR-144-5p在AAA患者外周血内的表达及其与ILT厚度联系之间的研究报道较为缺乏。基于此,本研究以2020年4月至2022年4月本院收治的84例AAA患者为研究对象,分析miR-574-5p、miR-144-5p在此类患者血清中的表达及与ILT厚度的关系。

1 材料与方法

1.1 一般资料

选取2020年4月至2022年4月本院收治的84例AAA患者纳入观察组,另选取同期于本院行体检的75例健康人群纳入对照组,研究经医院医学伦理委员会批准。纳入标准:观察组经CT检查示肾下腹主动脉≥3 cm;对照组均身体健康,无重大疾病;所有研究对象具有较高的依从性;所有研究对象对本试验知悉,且自愿签署知情同意书。排除标准:存在精神疾病者;合并免疫系统、凝血功能异常者;意识障碍,难以进行正常交流者;存在传染性疾病者;合并全身性感染者;存有严重的脑器质性疾病者;合并严重的脏器损伤者。对照组男性40例,女性35例;年龄39～76岁,平均年龄(58.94±3.21)岁;体重指数(BMI)18.4～27.3 kg/m2,平均BMI(25.39±0.48)kg/m2。观察组男性46例,女性38例;年龄41～78岁,平均年龄(59.03±3.30)岁;BMI 18.5～27.1 kg/m2,平均BMI(25.30±0.41)kg/m2。比较两组一般资料,差异无统计学意义(P>0.05)。

1.2 方法

标本采集:采集两组5 ml静脉血置于抗凝管内,以3000 r/min的速率进行10 min的离心处理,取得上层血清后,于-80 ℃环境下留存待检,采集标本时需严格注意无菌操作。检测方法:首先以TRIzol法提取所有组织内的总RNA,按检测试剂盒操作步骤获取cDNA,并以逆转录试剂盒进行逆转录反应;之后对miR-574-5p、miR-144-5p予以扩增,反应体系共10 μl,反应条件为:95 ℃ 15 min,94 ℃ 15 s,55 ℃ 30 s,70 ℃ 30 s,共40个循环;以U6为内参,采取2-ΔΔCt法计算miR-574-5p、miR-144-5p相对表达量。同时,对观察组患者施以彩色多普勒超声检测,连续检测3次,取其平均值,依据其ILT厚度的不同将所有患者分为薄ILT组(n=48,ILT厚度≤平均值)与厚ILT组(n=36,ILT厚度>平均值)两个亚组,统计对比两个亚组的miR-574-5p、miR-144-5p相对表达量。

1.3 观察指标

(1)观察组与对照组miR-574-5p、miR-144-5p对比。(2)厚ILT组与薄ILT组miR-574-5p、miR-144-5p对比。(3)miR-574-5p、miR-144-5p预测ILT厚度的效能:绘制受试者工作曲线(ROC),分析miR-574-5p、miR-144-5p两者单独或联合预测AAA患者ILT厚度的效能。

1.4 统计学分析

2 结果

2.1 观察组与对照组miR-574-5p、miR-144-5p对比

观察组的miR-574-5p高于对照组,miR-144-5p低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05),见表1。

表1 观察组与对照组miR-574-5p、miR-144-5p对比

2.2 厚ILT组与薄ILT组miR-574-5p、miR-144-5p对比

厚ILT组的miR-574-5p高于薄ILT组,miR-144-5p低于薄ILT组,差异有统计学意义(P<0.05),见表2。

表2 厚ILT组与薄ILT组miR-574-5p、miR-144-5p对比

2.3 miR-574-5p、miR-144-5p预测ILT厚度的效能

ROC结果显示:miR-574-5p、miR-144-5p两者联合预测AAA患者ILT厚度的AUC高于两者单独预测,见表3、图1～3。

图1 miR-574-5p预测ILT厚度的ROC图

图2 miR-144-5p预测ILT厚度的ROC图

图3 miR-574-5p、miR-144-5p联合预测ILT厚度的ROC图

表3 miR-574-5p、miR-144-5p预测ILT厚度的效能

3 讨论

AAA指腹主动脉局限性扩张,直径>3 cm,或较邻近腹主动脉直径扩张1.5倍以上,大多数AAA破裂前无任何症状,但在破裂后患者总病死率超过80%[6-7]。AAA与血小板活化和凝血功能紊乱密切相关,故AAA患者普遍存在一定程度的ILT形成[8-9]。ILT会降低血管壁承受的机械应力,还会导致黏蛋白降解、胶原合成与含量增加以及炎性细胞的过度浸润[10]。血栓形成与炎性细胞浸润会破坏血管壁结构的完整性与稳定性,大大增加AAA破裂风险,故ILT在AAA生长与破裂中发挥着重要作用。临床有研究认为,ILT厚度与动脉瘤直径、血管平滑肌细胞凋亡等有着显著联系,而miRNA与ILT厚度密切相关[11]。因此,及时明晰miRNA与AAA患者ILT厚度之间的关系,指导临床施以科学针对性的治疗措施,对于改善患者预后至关重要。

miR是一种广泛存在的调控基因的小分子RNA,在细胞的生长、发育与代谢中扮演着重要角色,可通过不同的miR完全或者不完全与靶基因互补结合,促使靶基因降解或者抑制翻译,参与机体的病理生理过程[12]。miR-574-5p是miR-574的亚型之一,属于miR家族的重要成员,在多种生物学功能中扮演着重要角色。miR-574-5p表达与神经发育和形成有关,其可促进神经的形成与癌细胞的增殖,而且其表达水平与肺癌和肠癌的抗药性以及预后密切相关[13]。同时,miR-574-5p可作为人肺成纤维细胞生长因子1的RNA诱导因子诱导肺部肿瘤的发生。 miR-144-5p为前体miR-144的另一个成熟链,在多种疾病中表达异常,可通过调控靶基因的表达参与疾病的进程,包括AAA、心房颤动、慢性硬膜下血肿等[14-15]。本研究结果显示,观察组的miR-574-5p高于对照组,miR-144-5p低于对照组,提示在AAA患者机体内,miR-574-5p呈高表达,miR-144-5p呈低表达,二者可能参与疾病的发生与发展。本研究结果还显示,厚ILT组的miR-574-5p高于薄ILT组,miR-144-5p低于薄ILT组,提示ILT越厚,miR-574-5p越高,miR-144-5p越低;且 ROC结果显示:miR-574-5p、miR-144-5p两者联合预测AAA患者ILT厚度的AUC高于两者单独预测,由此可见,miR-574-5p、miR-144-5p联合可有效预测AAA患者的ILT厚度,从而为临床的早期治疗提供可靠参考依据,进而施行规范且个体化的治疗,最终保障患者的身心安全,改善其预后。

综上所述,miR-574-5p、miR-144-5p在AAA患者机体内呈异常表达,且ILT厚度越厚,miR-574-5p越高,miR-144-5p越低,两者联合可有效预测AAA患者的ILT厚度,具有较高的临床应用价值,可进行大力的推行。