CD16a mRNA在结直肠癌组织中的表达意义

李 贞 李 岩 周玙娇

结直肠癌发病较高,由于早期表现较为隐匿,易被患者忽视,即使部分患者因早期症状进行检查,也易与其他胃肠道疾病混淆,导致无法及时治疗,影响预后。临床应寻找能够诊断患者疾病的相关标志物,以尽早明确诊断,及时治疗,从而改善结直肠癌患者预后[1]。随着对结直肠癌研究的深入,临床发现结直肠癌的发生发展均与机体的免疫状态关系密切[2]。正常状态下,人体免疫系统处于稳定状态,能够及时辨认恶性转变的细胞,并将其杀伤,防止疾病发生,若人体免疫系统障碍或局部免疫效应细胞功能缺失,将对免疫效应细胞的作用产生影响,无法发挥自身作用,导致肿瘤形成[3]。CD16a是一种跨膜蛋白,主要在免疫效应细胞表面表达,对抗体依赖性细胞介导的细胞毒有介导作用,当其水平出现异常表达时,提示机体可能发生肿瘤[4]。分析CD16a的mRNA表达情况对判断患者病情或许有较高的应用价值。鉴于此,本研究进一步探讨CD16a mRNA在结直肠癌组织中的表达意义。现总结如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料

选择2020年1月至2021年8月我院收治的结直肠癌患者86例,其中男性47例,女性39例;年龄34～83岁,平均年龄(62.75±5.16)岁;体重40～84 kg,平均体重(69.34±4.76)kg;发病位置:45例直肠,41例结肠;病理分型:38例乳头状腺癌,4例印戎细胞癌,26例黏液腺癌,18例管状腺癌;TNM分期:11例Ⅰ期,25例Ⅱ期,33例Ⅲ期,Ⅳ期17例。医学伦理委员会已批准本研究。纳入标准:①所有入选者均符合《中国结直肠癌诊疗规范(2017年版)》[5]诊断标准,并经病理检查确诊;②无恶性肿瘤放化疗、生物治疗史;③患者不存在精神疾病或意识不清,对各项检查均能较好配合;④知情同意书由患者及其家属自愿签署。排除标准:①复发性或多源性结直肠癌;②伴有其他恶性肿瘤疾病;③患者存在认知功能障碍,或无法进行正常交流;④存有重要脏器功能不全。

1.2 方法

所有入选者均采集病灶组织以及周围正常肠壁组织作为标本,进行CD16a mRNA检测,检测方法为Real-time PCR技术,上游引物:5'-TCCAAA AGCCACACTCAAAGAC-3',下游引物5'-CTGAAGACACATTTTTACTCCCAAAC-3',将74 bp设计成CD16a引物扩增产物长度。内参基因为GAPDH,以138 bp作为引物扩增产物长度,上游引物:5'-CAGGAGGCATTGCTGATGAT-3',下游引物:5'-GAAGGCTGGGGCTCATTT-3'。自上海生工生物技术有限公司购入上述产品。RNA使用TransZol Up RNA试剂盒提取,操作步骤需严格按照产品说明书进行,随后进行电泳鉴定,检测RNA浓度,逆转录合成cDNA,提取2 μg总RNA进行RT-PCR反应,反应体系见产品说明书,反应条件:①94 ℃ 30 s,②94 ℃ 5 s,60 ℃ 30 s,连续进行45个循环重复操作,之后进行溶解分析,并计算其△Ct值,重复检测3次,以均值作为最后结果。

1.3 观察指标

比较结直肠癌患者病灶组织与病灶旁正常组织中CD16a mRNA含量;分析癌组织中CD16a mRNA表达与病理特征的相关性,病理特征包括性别(男、女)、年龄(≥60岁、<60岁)、发病位置(直肠、结肠)、病理分型(乳头状腺癌、印戎细胞癌、黏液腺癌、管状腺癌)、病理分期(Ⅰ期、Ⅱ期、Ⅲ期、Ⅳ期)、淋巴结转移(N0、N1、N2)等。

1.4 统计学分析

2 结果

2.1 结直肠癌患者不同组织中CD16a mRNA含量表达情况

病灶旁正常肠壁组织中CD16a mRNA含量的△Ct值为(6.28±0.65),病灶组织中CD16a mRNA含量的△Ct值为(5.51±0.46)。不同组织中CD16a mRNA含量表达相比,差异有统计学意义(t=8.967,P=0.000)。

2.2 癌组织中CD16a mRNA表达与病理特征的相关性

不同性别、年龄、发病位置、病理分型、病理分期、淋巴结转移的结直肠癌患者癌组织中CD16a mRNA表达相比,差异无统计学意义(P>0.05)。见表1。

表1 癌组织中CD16a mRNA表达与病理特征的相关性

3 讨论

结直肠癌在临床发病率较高,发病机制较为复杂,至今尚未完全明确,与饮食习惯、生活作息等多方因素有关,对患者健康及生命安全造成较大威胁。结直肠癌早期无明显症状,随着病情进展可引起血便、排便习惯改变、肠道疼痛等临床表现,当患者出现典型症状后往往已发展至中晚期,预后较差。近些年随着医学技术不断发展,临床治疗结直肠癌方法越来越多,尤其是放化疗方案层出不穷,一定程度上提高治疗效果,但结直肠癌患者5年生存率仍较低[6]。目前临床治疗结直肠癌仍以手术效果最佳,最大范围切除病灶,可防止术后复发,从而延长患者生存时间。但临床实践发现,手术治疗具有一定的时间窗,而早期结直肠癌由于缺乏明显表现,检出率较低,漏诊误诊情况频发,常导致手术治疗不及时,不利于病情的控制及预后[7]。

目前临床研究结直肠癌的重难点仍为早期诊断,若能寻找灵敏度、特异度高的相关指标,对提高结直肠癌早期检出率、改善患者预后有重要意义[8]。一般情况下人体免疫功能较为稳定,可维持较为理想的免疫状态,不会出现过弱或过强的反应而引发疾病[9]。机体免疫若处于平衡状态,对于发生恶变的细胞免疫系统可准确识别并将其杀伤,阻止恶性疾病发生,一旦抗原加工缺失、抗原脱落、抗原调变,或者效应细胞表面受体不表达、缺乏抗原递呈细胞、效应细胞表面受体表达缺失等情况,均会导致恶变细胞无法得到效应细胞结合,导致细胞出现恶性病变[10]。临床认为机体免疫不仅参与恶性肿瘤形成,在肿瘤进展与转移中也有所参与,分析恶性肿瘤与机体免疫功能关系有重要意义[11]。

CD16a主要表达于NK细胞、巨噬细胞、单核细胞表面,是免疫效应细胞表面的重要结合位点,属于一种激活型受体,在细胞免疫上可发挥积极作用。临床研究认为,CD16a高表达的免疫细胞联合单克隆抗体比普通免疫细胞联合单克隆抗体,大大增强ADCC作用和肿瘤杀伤能力[12]。单克隆抗体可增加对CD16a的亲和力,从而增加免疫细胞产生IFN-γ的能力,故当组织中CD16a含量降低时,提示机体细胞免疫功能减弱,易导致疾病发生。mRNA是RNA分子的统称,主要作用为将遗传信息从DNA传递至核糖体上,随后生成基因所编码的蛋白。将基因通过RNA聚合酶转录成mRNA前体,之后再次进行加工可成为成熟的RNA,经翻译后最后成为蛋白质[13]。本次研究利用PCR技术检测结直肠癌患者组织中CD16a mRNA表达情况,结果显示,病灶旁正常肠壁组织中CD16a mRNA含量的△Ct值为(6.28±0.65),高于病灶组织的(5.51±0.46);不同性别、年龄、发病位置、病理分期、病理分期、淋巴结转移的结直肠癌患者癌组织中CD16a mRNA表达未见明显差异。表明结直肠癌患者组织中CD16a mRNA表达明显低于病灶旁正常肠壁组织,在疾病早期诊断中有一定的应用价值,但CD16a mRNA水平与病理特征无明显相关性,无法判断患者疾病进展情况。王磊等[14]研究显示,癌组织与正常肠壁组织中CD16a mRNA表达存在较大差异,癌旁正常肠壁组表达更高,但CD16a mRNA水平并不会随着病理特征改变而出现显著变化,提示正常组织与癌组织中CD16a mRNA水平存在明显差异,但CD16a mRNA水平不受疾病临床特征影响,无法反映患者病情进展。究其原因为CD16a mRNA是ADCC重要的介导物质,当局部组织中其含量减少时,可导致抗体介导的细胞免疫功能下降,促使杀伤肿瘤细胞或恶性病变细胞的能力降低,使得局部组织中恶病变细胞大量增殖,导致恶性肿瘤形成[15]。由于CD16a mRNA为单一分子细胞,在鉴别结直肠癌组织与正常肠壁组织中具有较高的灵敏度,但并不会随着病情进展而变化,故在不同病理特征结直肠癌患者组织中表达未见明显差异。

综上所述,正常组织与癌组织中CD16a mRNA表达存在明显差异,在疾病早期诊断中有一定的应用价值,但CD16a mRNA水平与病理特征无明显相关性,无法判断患者疾病进展情况。