HPLC法测定安痛定注射液3种组分的含量

丁阳 冯超林 陈向丹 董书香 王峻

摘要 本文建立了安痛定注射液中巴比妥、安替比林、氨基比林含量的HPLC测定方法：采用Agilent Eclipse Plus C18色谱柱（4.6 mm×250 mm，5 μm），流动相为乙腈-磷酸盐缓冲液（pH 7.8～8.0）（20∶80）（用磷酸调节pH至8.0），检测波长240 nm，流速1.0 mL/ min。结果表明，巴比妥在4.5～67.5 μg/mL的浓度范围内呈线性关系，r=0.999 7，平均回收率96.2%；安替比林在10～150 μg/mL的浓度范围内呈线性关系，r=0.999 9，平均回收率100.1%；氨基比林在25～375 μg/mL的浓度范围内呈线性关系，r=0.999 9，平均回收率97.1%；该方法简便、准确、快速、重现性好，可用于该制剂的含量测定。

关键词 安痛定注射液；含量测定；HPLC

中图分类号 O657.72 文献标识码  A

文章编号 1007-7731（2023）03-0092-03

Determination of Three Components in Antondine Injection by HPLC Method

DING Yang   FENG Chaolin   CHEN Xiangdan   DONG Shuxiang   WANG Jun*

（Hubei Provincial Institute of Veterinary Drug Supervision， Wuhan Hubei 430070）

Abstract A method for the determination of Barbital， Phenazone and Aminophenazone in Antondine Injection by HPLC was established. The experiment used Agilent Eclipse Plus C18 column （4.6 mm×250 mm， 5 μm）， acetonitrile-phosphate buffer （pH7.8-8.0）（20∶80）（the pH value was adjusted to 8.0 with phosphoric acid）as the mobile phase， the detection wavelength was 240 nm with the flow rate of 1.0 mL/min. Results showed that linear range of Barbital was 4.5-67.5 μg/mL with r of 0.999 7， average recovery was 96.2%. Linear range of Phenazone was10-150 μg/mL with r of 0.999 9， average recovery was 100.1%. Linear range of Aminophenazone was 25-375 μg/mL with r of 0.999 9， average recovery was 97.1%. The method is simple， accurate， rapid and reproducible， and can be used for the content determination of the preparation.

Keywords antondineinjection; content determination; HPLC

安痛定注射液是广泛应用的解热镇痛药，含巴比妥、安替比林和氨基比林3种成分。《中国兽药典》2015年版一部均采用高效液相色谱法及容量分析进行含量测定[1]，此方法操作烦琐费时，误差较大。笔者参考相关文献[2-4]，采用高效液相色谱法同时测定巴比妥、安替比林和氨基比林的含量，该方法具有简易、快速、高效、重复性好等特点。

1 材料与方法

1.1 仪器

岛津20AD高效液相色谱仪；Agilent Eclipse Plus C18色谱柱，4.6 mm×250 mm（i.d.），粒径5 μm；Mettler AE240电子天平；MILIPORE超纯水处理器等。

1.2 试剂与材料

氨基比林对照品由中国食品药品检定研究院提供，安替比林对照品由中国兽医药品监察所提供，巴比妥暂时为工作用对照品。甲醇、乙腈、磷酸盐均为色谱纯，水为超纯水，其他试剂为分析纯；原料、辅料，安痛定注射液样品（批号为20171101、20171102、20171201）均由成都某兽药公司提供。

1.3 试验方法

1.3.1 溶液的配制。精密称取巴比妥对照品11.25 mg，安替比林对照品25 mg、氨基比林对照品62.5 mg置于25 mL量瓶中，加流动相10 mL，超声使其溶解，放至室温，加流动相稀释至刻度，摇匀，精密量取上述对照液2 mL置于50 mL量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇匀，滤过，作为对照品溶液。精密量取安痛定注射液供试品5 mL置于100 mL量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇匀，精密量取上述供试品溶液2 mL置50 mL量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇匀，滤过，作为供试品溶液。

1.3.2 色谱条件。色谱柱：用十八烷基硅烷鍵合硅胶为填充剂；流动相：乙腈︰磷酸盐缓冲液（pH 7.8～8.0）（20∶80）用磷酸调节pH至8.0，流速1.0 mL/min；检测波长240 nm；进样量20 μL。

1.3.3 线性试验。精密称取巴比妥对照品45 mg，安替比林对照品100 mg，氨基比林对照品250 mg置于100 mL量瓶中，加流动相40 mL，超声使其溶解，加流动相稀释至刻度，摇匀，取上述稀释液1.00、2.00、4.00、5.00、10.00、15.00 mL置于100 mL量瓶中，加流动相稀释成巴比妥浓度为4.5、9.0、18.0、22.5、45.0、67.5 μg/mL的标准工作液，安替比林浓度为10、20、40、50、100、150 μg/mL的标准工作液，氨基比林浓度为25、50、100、125、250、375 μg/mL的标准工作液，各取20 μL进样，记录色谱图，以浓度为横坐標，以峰面积为纵坐标，绘制标准曲线方程。

1.3.4 专属性试验。在1.3.2色谱条件下，分别取供试品辅料空白溶液、对照品溶液以及供试品溶液注入液相色谱仪，考察其专属性。

1.3.5 回收率试验。精密量取已知含量的安痛定注射液（批号20171101）5 mL 9份，按照各主成分80%、100%、120% 3个水平进行添加，分别按1.3.1项下制备方法进行处理，按1.3.2色谱条件进行测定，按外标法计算巴比妥、安替比林、氨基比林的含量，计算回收率。

1.3.6 精密度试验。取1.3.1项下制备的对照品溶液，按1.3.2色谱条件测定峰面积，连续进样6次，计算相对标准偏差RSD，考察精密度。

1.3.7 稳定性试验。取1.3.1项下制备的对照品溶液，按1.3.2色谱条件测定峰面积，在不同时间0、2、4、6、8、10、12、24 h分别进行测定，计算相对标准偏差RSD，考察对照品稳定性。

2 结果与分析

2.1 线性试验

以浓度为横坐标，峰面积积分值（Y）为纵坐标进行线性回归（结果见图1），得巴比妥回归方程Y=25 261 x-10 613（r=0.999 7）；安替比林回归方程Y=116 289 x-42 515（r=0.999 9）；氨基比林回归方程Y=23 212 x-15 750（r=0.999 9）。可见在此色谱条件下巴比妥在4.5～67.5范围内线性良好，安替比林在10～150 μg/mL范围内线性良好，氨基比林在25～375 μg/mL范围内线性良好，结果见图1～3。

2.2 专属性试验

在1.3.2色谱条件下，色谱图中巴比妥、安替比林与氨基比林峰分离效果好，含量测定不受其他杂质峰的干扰，图谱见图4～6。

2.3 回收率试验

加样回收率考察结果见表1～3。巴比妥平均回收率为100.5%，RSD为0.9%；安替比林平均回收率为100.5%，RSD为0.9%；氨基比林平均回收率为100.5%，RSD为0.9%，表明该法符合试验分析要求，准确度高。

2.4 精密度试验

连续进样6次，测得巴比妥峰面积平均值为562 696，RSD为0.2%，安替比林峰面积平均值为2 896 340，RSD为0.1%，氨基比林峰面积平均值为5 800 114，RSD为0.1%，结果表明仪器精密度良好。

2.5 稳定性试验

在不同时间0、2、4、6、8、10、12、24 h分别进行测定，测得巴比妥峰面积平均值为563 370，RSD为0.2%；安替比林峰面积平均值为2 896 755，RSD为0.1%；氨基比林峰面积平均值为5 801 764，RSD为0.2%，表明对照品溶液在室温下24 h内性质稳定。

2.6 样品的测定

分别取同一厂家不同批号的样品，采用1.3.2色谱条件进行测定，试验结果见表4。样品测定结果中可以看出本法与《中国兽药典》2015年版一部测定的结果基本一致。

3 讨论与结论

巴比妥在200～254 nm范围内有吸收，安替比林在240、254 nm处有较强吸收；氨基比林在240、273 nm有较强吸收。注射液中巴比妥含量较低，为了避免低波长误差，故选择干扰较小的波长240 nm。因为氨基比林和安替比林结构相似，而巴比妥受酸碱影响较大，在一般的液相色谱条件下，难以分离。试验多种流动相，结果表明流动相为乙腈-磷酸盐缓冲液（pH 7.8～8.0）（20∶80）用10%磷酸调节pH至8.0，可使3组分达到最佳分离效果，峰形好，分离度较高，重现性好，因此采用以上色谱条件测定安痛定注射液的含量。

本法测定安痛定注射液中巴比妥、安替比林、氨基比林3种组分的含量时，操作简单、快速，结果准确可靠，可作为该制剂的含量测定提供参考，特别是在兽药企业的内部质量控制方面有一定的指导作用。

4 参考文献

[1] 中国兽药典委员会. 中华人民共和国兽药典2015年版一部[S].

[2] 赵素珍. 高效液相色谱法同时测定复方氨林巴比妥注射液中氨基比林和安替比林的含量[J]. 中国医药导报. 2007（21）：128-129.

[3] 孙东凯，刘广川，王丽琴. HPLC法测定复方氨林巴比妥注射液中氨基比林和安替比林的含量[J]. 天津药学，2007（6）：19-20.

[4] 陈秀琳，蔡加琴，黄丽萍. HPLC法测定复方氨林巴比妥注射液三组分的含量[J]. 海峡药学，2008（6）：53-55.

（责编：王慧晴）

作者简介 丁阳（1992—），男，河南信阳人，从事兽药检验检测工作。

王峻*通信作者

收稿日期 2022-04-02