腹泻型肠易激综合征患者的血清IL-10、CCL16水平及其临床意义

陈 成 陈树松

肠易激综合征（IBS）是一种常见的功能性肠病，以腹痛或腹部不适伴排便次数和粪便性状改变为特征，无器质性病变，其发病率较高，以中青年居多，且多见于女性，其中以腹泻型IBS（IBS-D）较为常见[1]。IBS 症状的反复发作，目前其发病机制尚未明确，近年来研究发现肠道微生态失衡和肠黏膜免疫激活是IBS（尤其是IBS-D）发病的重要因素[2-3]。探究免疫调节相关因子与患者的IBS-D症状及肠道菌群的关系，对于IBS-D 发病机制的研究和临床用药指导具有重要意义。血清学标志物检测具有取样便捷、操作简单、无创性、价格低廉等优势。既往研究发现，免疫调节相关因子IL-10、CC 趋化因子配体16（CCL16）在IBS 患者中表达异常，但两者的的表达变化尚存在争议[4-7]。本研究检测了IBS-D 患者的血清IL-10、CCL16 水平，并分析了其与IBS-D 症状严重程度及粪便菌群的相关性，以期为临床诊治IBS-D 提供参考。

1 研究对象与方法

1.1 研究对象

选择2019 年1 月至2022 年12 月在来安家宁医院就诊的65 例IBS-D 患者设为IBS-D 组，另选择67 名同期健康体检者设为对照组。IBS-D 组患者的纳入标准：（1）符合IBS-D 罗马Ⅳ诊断标准[8]，即松散（糊状）粪便或水样粪便≥25%，硬质粪便或干球状粪便＜25%；（2）年龄20～59 岁；（3）近2 个月内未服用抗生素、益生菌等；（4）腹部超声、结肠镜等检查无异常，排除器质性疾病；（5）临床资料完整。对照组的纳入标准为年龄20～59 岁，无肠道疾病，无自身免疫病，无感染病史，近2 个月内未使用抗生素、益生菌等药物。排除标准：（1）合并其他系统严重疾病，恶性肿瘤者；（2）有乙醇、药物滥用史者；（3）智力精神障碍，不能配合研究者；（4）处于妊娠期、哺乳期或月经期的女性；（5）有腹部手术史者。本研究经医院医学伦理委员会批准，患者均签署知情同意书。

1.2 血清IL-10、CCL16 水平检测

所有受试者均于清晨抽取空腹静脉血6 mL，离心分离血清，应用ELISA 法检测血清IL-10、CCL16 水平，检测步骤参照IL-10 ELISA 试剂盒（购自南京森贝伽生物科技有限公司）、CCL16 ELISA试剂盒（购自上海西格生物科技有限公司）说明书进行，用Infinite F50 酶标仪（购自瑞士Tecan 公司）测定吸光度（OD）值，通过制作标准曲线计算血清IL-10、CCL16 水平。所有操作均由同一位检验科医生完成。

1.3 粪便菌群检测

采集所有受试者的新鲜粪便，采用细菌三级鉴定法对粪便菌群（双歧杆菌、乳杆菌、拟杆菌和肠杆菌）进行鉴别，并计算每克粪便中的菌群数量。

1.4 IBS-D 症状严重程度评估

采用Francis 等[9]的IBS 严重程度评分量表评估患者的IBS-D 症状严重程度，该量表从腹痛发作次数、腹痛不适程度、当天腹胀不适程度、肠道症状对生活的干扰程度、对排便情况的满意度共5 个方面对IBS-D 症状进行量化评价，每个方面均有5 个选项，程度从轻到重依次递进20 分，满分为100 分。计算IBS 症状严重程度总评分（5 项评分之和），根据总评分将IBS-D 患者分为轻中度组和重度组（75～175 分为轻度；176～300 分为中度；＞300 分为重度）。

1.5 统计学分析

采用SPSS 25 软件对数据进行统计学分析。计量资料经K-S检验均符合正态分布，以均数±标准差（±s）表示，组间比较采用独立样本t检验；计数资料以例（%）表示，组间比较采用χ2检验。采用Pearson 或Spearman 相关性分析探究IBS-D 患者的血清IL-10、CCL16 水平与肠道菌群、IBS-D症状严重程度评分的相关性。P＜0.05 为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 2 组的一般资料比较

2 组的性别、年龄、BMI 相比较，差异均无统计学意义（P＞0.05）。见表1。

表1 2 组的一般资料比较

2.2 2 组的血清IL-10、CCL16 水平比较

如表2 所示，IBS-D 组的血清IL-10、CCL16 水平均显著高于对照组（P均＜0.05）。

表2 2 组的血清IL-10、CCL16 表达水平比较/pg·mL-1

2.3 2 组的粪便菌群数量比较

如表3 所示，与对照组相比，IBS-D 组的粪便中双歧杆菌、乳杆菌数量均显著减少（P均＜0.05），肠杆菌数量显著增多（P＜0.05）。2 组的粪便中拟杆菌数量差异无统计学意义（P＞0.05）。

表3 2 组的粪便菌群数量比较/log CFU·g-1

2.4 IBS-D 症状严重程度评分

IBS-D 症状严重程度评分中，腹痛发作次数评分最高[（70.00±9.56）分]，其余依次为肠道症状对生活的干扰程度评分[（56.00±13.27）分]、对排便情况的满意度评分[（52.00±12.31）分]、腹痛不适程度评分[（48.00±12.31）分]，当天腹胀不适程度评分最低[（36.00±9.12）分]。IBS-D 症状严重程度总评分为（262.00±41.25）分。

2.5 不同IBS-D 症状严重程度患者的血清IL-10、CCL16 水平及粪便菌群数量比较

根据IBS 症状严重程度总评分将65 例IBS-D患者分为轻中度组（51 例，其中轻度5 例，中度46例）和重度组（14 例）。如表4 所示，与中轻度组相比，重度组的血清IL-10、CCL16 水平均升高（P均＜0.05），粪便中肠杆菌数量显著增多（P＜0.05），双歧杆菌、乳杆菌数量均显著减少（P均＜0.05）。重度组与轻中度组的粪便中拟杆菌数量差异无统 计学意义（P＞0.05）。

表4 不同IBS-D 症状严重程度患者的血清IL-10、CCL16 水平及粪便菌群数量比较

2.6 IBS-D 患者的血清IL-10、CCL16 水平与粪便菌群、IBS-D 症状严重程度评分的相关性

Pearson 相关性分析结果显示，IBS-D 患者的血清IL-10 水平与血清CCL16 水平呈正相关（r＝0.390，P＝0.001），见图1。Pearson 相关性分析结果显示，血清IL-10、CCL16 水平与双歧杆菌、乳杆菌数量均呈负相关（P均＜0.05），与肠杆菌数量呈正相关（P＜0.05），与拟杆菌数量不相关（P＞0.05）；Spearman 相关性分析结果显示，血清IL-10、CCL16 水平与IBS-D 症状严重程度各项评分及总评分均呈正相关（P均＜0.05）；见表5。

图1 IBS-D 患者的血清IL-10 水平与血清CCL16 水平的相关性分析散点图

表5 IBS-D 患者的血清IL-10、CCL16 水平与粪便菌群、IBS-D 症状严重程度评分的相关性

3 讨论

IBS 是一组根据症状进行分类的临床症候群，发病机制尚不清楚，目前研究认为其由炎性反应、免疫、肠道菌群失调及脑-肠轴异常等多种机制共同作用导致，具有反复发作，迁延难愈的特点[10-11]。根据患者粪便的性状，IBS 可分为便秘型IBS（IBS-C）、IBS-D、混合型IBS（IBS-M）和不确定型IBS（IBS-U）[12]，其中IBS-D 为较常见类型，严重影响着患者的生活质量，其诊断和治疗面临诸多挑战[13]。因此，积极寻找与IBS-D 发生、发展相关的生物标志物对于IBS-D 的临床诊治有重要的意义。

IL-10 是一种主要由Th2 细胞、B 细胞及单核巨噬细胞等免疫细胞分泌的抑炎细胞因子，具有抑制抗体产生和促炎细胞因子释放及活化等作用，研究表明其在胃肠道疾病的发生、发展中起着调节作用[14]。本研究发现，IBS-D 患者的血清IL-10水平显著高于健康者，表明IL-10 在IBS-D 的发生中可能发挥了重要的调控作用，该结果与曾明曦等[4]的研究结果一致。然而，雍海江等[5]的研究结果显示 IBS 组患者IL-10 水平明显低于对照组，Abbas 等[6]的研究结果显示IBS 组患者与对照组的血清IL-10 水平差异无统计学意义，上述研究结果均与本研究结果不符。造成研究结果差异的原因可能是当IBS-D 患者处于炎性反应活动期时，免疫系统被激活，TNF-α、IL-18 等促炎因子大量分泌，使得抑炎细胞因子IL-10 水平代偿性升高；而当IBS-D 患者处于炎性反应缓解期时，促炎因子分泌减少，故IL-10 水平降低[15]。

本研究中，进一步分析发现，重度IBS-D 患者的血清IL-10 水平显著高于轻中度IBS-D 患者，且IBS-D 患者的血清IL-10 水平与IBS-D 症状严重程度各项评分及总评分均呈正相关，表明血清IL-10水平与IBS-D 症状严重程度密切相关。分析其原因可能是，重度IBS-D 患者体内的炎性反应及免疫应答均较轻中度IBS-D 患者更强，活化的Th2 细胞、B 细胞等免疫细胞分泌更多的抑炎因子，但总体上重度IBS-D 患者体内促炎因子占优势，故即使其血清IL-10 水平升高也不能有效缓解IBS-D 症状。

趋化因子CCL16 由肝脏、胸腺和脾脏的实质细胞产生，存在于人体血液中，其对单核细胞和淋巴细胞有趋化特性，参与肺炎等炎性疾病的发生、发展，是一种促炎趋化因子[16-17]。Del Valle-Pinero等[18]的研究发现，IBS 患者的CCL16 基因表达显著升高。但Hayatbakhsh 等[7]的研究发现IBS 患者的血清CCL16 水平显著降低，且IBS-D 患者的血清CCL16 水平显著高于IBS-M 患者，血清CCL16可作为区分这2 种亚型的标志物。本研究结果显示，IBS-D 患者的血清CCL16 水平较健康者升高，且其与血清IL-10 水平及IBS-D 症状严重程度评分均呈正相关，表明CCL16 可能与IL-10 共同参与了IBS-D 的发生、发展，两者有潜力作为诊断IBS-D及评估IBS 症状严重程度的血清学标志物。多项研究结果显示，CCL16 作为促炎因子在炎性疾病中呈高表达[7,18]，该结果与本研究结果一致，推测IBS-D 发生、发展过程中机体免疫应答被激活，IL-10 等抑炎因子水平升高的同时伴随着CCL16 等促炎因子水平升高，两者共同调控疾病的进展。本研究结果与Hayatbakhsh 等[7]的研究结果存在差异的原因可能是研究对象的种族、地域及疾病阶段存在差异。

研究表明IBS 患者体内肠道菌群失调，IBS 的发生可能是由于肠道菌群失衡使肠道功能发生紊乱导致，且不同分型的IBS 患者的肠道菌群变化可能存在差异[2,19]。本研究中，IBS-D 组的粪便中双歧杆菌、乳杆菌数量均显著少于对照组，肠杆菌数量显著多于对照组，但2 组的拟杆菌数量差异无统计学意义，表明IBS-D 患者存在肠道菌群失衡。进一步分析发现，双歧杆菌、乳杆菌和肠杆菌数量在重度IBS-D 患者中的变化更为显著，并且均与IBS-D 患者的血清IL-10、CCL16 水平显著相关，提示双歧杆菌、乳杆菌、肠杆菌可能与IL-10、CCL16 共同参与了IBS-D 的发生、发展。既往研究认为，肠道菌群不仅可通过自身的特殊结构、代谢产物及脑-肠轴调节引发相关的肠道症状，而且可通过激活肠道免疫系统导致IBS 发生和发展[20-21]。

综上所述，血清IL-10、CCL16 在IBS-D 患者中均呈高表达，两者呈正相关，并且均与粪便菌群（双歧杆菌、乳杆菌和肠杆菌）、IBS-D 症状严重程度显著相关，检测血清IL-10、CCL16 水平可能有助于诊断IBS-D 及评估病情严重程度，进而指导临床治疗。本研究样本量较小且为单中心研究，未动态监测血清IL-10、CCL16 水平，这些可能使研究结果发生偏倚。IBS-D 的病因较多，发病机制较复杂，可能还存在其他影响血清IL-10、CCL16水平的因素，有待进一步探究。仅研究粪便菌群可能无法全面反映肠道微生态的变化[22]，今后将进一步探究血清IL-10、CCL16 水平与肠黏膜菌群的相关性，为其作为IBS-D 诊断的标志物提供充分的证据。