Th17/Treg比值、LECT2、CXCL10与自身免疫性肝炎患者肝功能和治疗后应答的关系研究*

延欢欢,申文文

1.陕西省铜川市人民医院检验科,陕西铜川 727000;2.铜川矿务局中心医院检验科,陕西铜川 727000

自身免疫性肝炎(AIH)主要是指由于自身免疫功能异常导致的慢性肝病,该病多见于女性人群,且在一定程度上受遗传、环境等因素的影响[1-2]。随着近年来相关研究的日益深入,有研究发现免疫调节紊乱可能通过调控自身反应性淋巴细胞,进而产生自身抗体和多种细胞因子,导致肝脏出现损伤,最终引发一系列临床症状,辅助性T细胞17(Th17)和调节性T细胞(Treg)的动态平衡在维持机体免疫环境稳定中起着关键性作用,参与了多种肝脏疾病及自身免疫性疾病的发生、发展[3]。目前,普遍认为白细胞衍生趋化因子2(LECT2)属于肝脏因子之一,可通过调控细胞生长、分化,继而发挥免疫调控作用,从而介导了AIH的发病过程[4]。另有研究表明,趋化因子配体10(CXCL10)在多种自身免疫性疾病的发生、发展过程中起着关键性促炎作用[5]。鉴于此,本文通过研究Th17/Treg比值、血清LECT2、CXCL10与AIH患者肝功能和治疗后应答的关系,以期为AIH的诊治提供新的靶点与方向,现报道如下。

1 资料与方法

1.1一般资料 选取铜川市人民医院2019年1月至2022年1月收治的102例AIH患者为病例组,其中男30例,女72例;年龄22～58岁,平均(38.43±5.06)岁。纳入标准：(1)符合《自身免疫性肝炎诊断和治疗共识(2015)》[6]中所制订的AIH诊断标准;(2)年龄>18岁;(3)入组前并未接受相关治疗;(4)病历资料完整。排除标准：(1)合并其他类型肝病或(和)其他自身免疫性疾病;(2)伴有心脑血管并发症;(3)依从性较差;(4)神志异常。另选取同期健康体检人员100例为对照组,其中男31例,女69例;年龄21～58岁,平均(38.57±5.12)岁。两组性别、年龄等一般资料比较,差异均无统计学意义(P>0.05),具有可比性。所有研究对象均已签署知情同意书,本研究经医院伦理评审委员会批准。

1.2方法 (1)标本采集：分别采集所有受试者入院后空腹静脉血10 mL,平均分为2份,一份保存后作为外周血Th17及Treg检测使用,另一份离心处理后获取血清保存至-80 ℃低温冰箱中备用,离心半径8 cm、速度3 500 r/min、时长10 min。(2)外周血Th17及Treg检测：采用Ficoll分离液完成外周血单个核细胞的分离、获取,并调整细胞数以2×106个/mL为宜。随后滴加100 ng/mL佛波酯及1 μg/mL离子霉素充分混匀,放置于二氧化碳培养箱中培养60 min。继续滴加1 μL/mL莫能霉素培养5 h。将细胞等分成2份,分别滴加有关单抗,采用流式细胞仪完成Th17及Treg的检测,并计算二者比值。(3)血清LECT2与CXCL10检测：采用酶联免疫吸附试验检测血清LECT2与CXCL10水平,操作均遵循试剂盒说明书完成,相关试剂盒均购自上海江莱生物科技有限公司。(4)肝功能检测：采用AU5800全自动生化分析仪(购自美国贝克曼库尔特公司)检测天门冬氨酸氨基转移酶(AST)及丙氨酸氨基转移酶(ALT)水平。(5)血清免疫球蛋白(Ig)检测：采用酶联免疫吸附试验检测血清IgG水平,试剂盒购自武汉赛培生物科技有限公司。病例组上述指标分别于治疗前1 d及治疗4周后各检测1次。

1.3治疗后应答评估 AIH患者均给予泼尼松龙和硫唑嘌呤联合治疗方法,治疗4周后进行应答评估,应答判定标准参照《自身免疫性肝炎诊断和治疗共识(2015年)》[6]中制订的相关标准进行。将所有患者按照治疗后应答情况分为应答不佳组25例及应答良好组77例。

2 结 果

2.1病例组、对照组Th17/Treg比值、血清LECT2与CXCL10及肝功能指标水平比较 病例组Th17/Treg比值、LECT2、CXCL10、AST及ALT水平均高于对照组(P<0.05),见表1。

表1 病例组、对照组Th17/Treg比值、血清LECT2、CXCL10及肝功能指标水平比较

2.2病例组治疗前后Th17/Treg比值、血清LECT2与CXCL10及肝功能指标水平比较 治疗4周后病例组患者Th17/Treg比值、LECT2、CXCL10、AST及ALT水平均低于治疗前1 d(P<0.05),见表2。

表2 病例组治疗前后Th17/Treg比值、血清LECT2、CXCL10及肝功能指标水平比较

2.3Th17/Treg比值、血清LECT2、CXCL10水平与肝功能指标的相关性分析 Pearson相关性分析发现,AST、ALT水平与Th17/Treg比值、LECT2、CXCL10水平均呈正相关(P<0.05),见表3。

表3 Th17/Treg比值、血清LECT2、CXCL10水平与肝功能指标的相关性分析

2.4AIH患者治疗应答影响因素的单因素分析 经单因素分析发现,Th17/Treg比值、LECT2、CXCL10、AST、ALT、IgG均与AIH患者治疗应答有关(P<0.05),而与性别无关(P>0.05),见表4。

表4 AIH患者治疗应答影响因素的单因素分析[n(%)或

2.5AIH患者治疗应答不佳影响因素的多因素Logistic回归分析 以AIH患者治疗应答情况为因变量,赋值如下：应答不佳=1,应答良好=0。以单因素分析中差异有统计学意义的指标为自变量,赋值如下：Th17/Treg比值升高=1,否=0;LECT2升高=1,否=0;CXCL10升高=1,否=0;AST升高=1,否=0;ALT升高=1,否=0;IgG升高=1,否=0。经多因素Logistic回归分析发现,AIH患者治疗应答不佳的危险因素有Th17/Treg比值升高、LECT2升高、CXCL10升高、AST升高、ALT升高、IgG升高(P<0.05),见表5。

表5 AIH患者治疗应答不佳影响因素的多因素Logistic回归分析

3 讨 论

现阶段关于AIH的具体发病机制尚未明确,目前普遍认为与自身抗原、遗传及免疫等因素有关[7]。有研究认为在接受治疗后若AIH患者转氨酶水平仍维持在2倍正常值上限则治疗失败,即治疗后应答不佳[8]。其中以类固醇为基础的免疫抑制治疗是AIH基础方案,然而接受该方案治疗的部分患者可能应答不佳,增加了患者家庭及社会的经济负担[9]。故寻求有效评估AIH患者治疗应答不佳的潜在生物学标志物具有极其重要的意义。Th17/Treg比值是反映机体免疫功能的可靠指标,其主要通过调控机体内促炎性细胞因子及抑炎性细胞因子的表达,进一步介导免疫性疾病的发生、发展过程[10]。LECT2最早是由于在肝癌中存在异常表达而被广泛关注,是有效诊断肝癌的标志物之一,其具有一定的炎症调控作用,在AIH疾病的发生、发展过程中可能扮演着至关重要的角色[11]。CXCL10介导了细胞黏附及迁移等过程,可能调控了效应细胞和调节细胞的募集,进一步参与机体免疫应答过程[12]。

本研究结果显示,病例组Th17/Treg比值、LECT2、CXCL10、AST及ALT水平均高于对照组,Th17与白细胞介素(IL)-17、IL-6及IL-23等促炎性细胞因子分泌密切相关,而Treg与IL-10、转化生长因子(TGF)-β等抑炎性细胞因子的分泌有关,二者动态平衡维持机体的免疫功能稳定,当上述平衡被打破后,机体免疫功能出现异常,进而导致免疫性疾病的发生、发展[13]。AIH的发生会导致多种炎症细胞大量分泌,进一步刺激炎症的发生,而LECT2作为肝脏因子之一,可发挥调控炎症的作用,因此在AIH患者中存在异常高表达[14]。CXCL10作为Th1相关趋化因子之一,介导了Th1型细胞炎症反应,进一步加重了肝脏损伤,间接参与了AIH的发生、发展过程[15]。治疗4周后病例组患者Th17/Treg比值、LECT2、CXCL10、AST及ALT水平均低于治疗前1 d。Pearson相关性分析发现,AST、ALT水平与Th17/Treg比值、LECT2、CXCL10水平均呈正相关,提示Th17/Treg比值及血清LECT2、CXCL10存在异常高表达与AIH患者肝功能密切相关。此外,经多因素Logistic回归分析发现,Th17/Treg比值升高、LECT2升高、CXCL10升高、AST升高、ALT升高、 IgG升高是AIH患者治疗应答不佳的危险因素。Th17/Treg中的Th17与IL-6及IL-23等促炎性细胞因子表达息息相关,而Treg与IL-10及TGF-β等细胞因子的表达有关,二者比值的增大往往反映了动态平衡朝Th17方向移动,促炎性细胞因子分泌显著增加,进而加剧肝损伤,增加治疗难度,促使患者无法从治疗中获益[16]。LECT2水平升高可能是机体为抵抗炎性细胞因子侵蚀,抑制炎症反应,加强免疫调节自我保护机制所致,因此其表达的升高往往反映了机体内炎症反应的加剧,患者病情加剧,预后欠佳[17]。CXCL10可通过趋化单核巨噬细胞、T淋巴细胞及嗜碱性粒细胞等多种细胞,促进了IL-6、肿瘤坏死因子-α等多种促炎性细胞因子的合成、分泌,进而加剧肝脏局部炎症反应,诱导肝损伤[18]。随着AST及ALT水平的升高,表明患者肝脏损伤加剧,甚至可能出现严重的肝纤维化症状,进而导致患者对相关治疗应答不佳。IgG是反映机体免疫功能的可靠指标之一,其表达水平的升高反映了机体免疫反应的异常程度加剧,促进了患者病情进展,最终使患者难以从相关治疗中获益。

综上所述,Th17/Treg比值、LECT2及CXCL10在AIH患者肝功能损伤过程中起着重要作用,可在一定程度上反映治疗后应答状况,但本研究样本量较少,还需进一步验证。此外,本研究并未分析不同分型AIH患者上述各项指标的差异,有待后续开展更深入的研究。