四磨汤对肝脾气滞证功能性消化不良大鼠胃肠运动及血清GAS、MTL的影响

周 姝，周赛男，韩运宗，刘 琴，陈思清

(湖南中医药大学第一附属医院， 湖南 长沙 410007)

功能性消化不良(functional dyspepsia，FD)是临床上高发的一种功能性胃肠道疾病，患病率为7.2%～16%，以早饱、餐后饱胀、伴或不伴腹部疼痛或烧灼感，并排除器质性改变为主要特征[1-3]。依据罗马Ⅳ标准，FD被分为上腹疼痛综合征(PDS)、餐后窘迫综合征(EPS)和PDS重叠EPS(混合型) 3个亚型[4]。FD的病因与发病机制目前并未完全明确，西医普遍认同FD的主要病理生理学基础是胃肠道动力障碍，其中30%～60%存在胃排空减慢[5]。中医认为FD的发病与肝脾两脏密切相关，虽然证型诸多，然而气机升降失调是其核心病理环节[6]。四磨汤源于宋代严用和的《济生方》，由乌药、槟榔、沉香、人参组成，它能明显改善FD患者症状，但作用机制目前尚不清楚。本研究以胃肠道动力障碍为切入点，探讨了四磨汤对肝脾气滞证FD大鼠的胃排空率、小肠推进率及血清胃泌素(GAS)、胃动素(MTL)水平的影响，以为临床应用提供客观依据。

1 实验材料与方法

1.1动物 健康Wistar大鼠36只，购于湖南斯莱克景达实验动物有限公司，实验动物使用许可证号：SCXK(湘)2019-0004，大鼠使用全价颗粒饲料喂养，自由饮水，饲养于清洁级动物房。本实验操作经湖南中医药大学动物伦理委员会审核批准(ZYFY20210913-04)。

1.2药物 四磨汤组成：槟榔9 g、乌药6 g、沉香6 g、人参6 g，中药材购自湖南中医药大学第一附属医院药剂科，常规水煎浓缩为0.32 g/mL(高剂量)后4 ℃冰箱保存备用，采用高剂量水煎浓缩液加蒸馏水稀释制备低剂量浓度(0.18 g/mL)和中剂量浓度(0.24 g/mL)。枸橼酸莫沙必利片(成都康弘药业集团股份有限公司，国药准字H20031110，规格：5 mg/片)，将药片研磨为粉末，与蒸馏水比配成浓度0.030 5 mg/mL的混悬液，放置4 ℃冰箱备用。

1.3主要仪器与试剂 ELISA试剂盒：GAS(批号：U13032070)、MTL(批号：Z08036488)，武汉华美生物工程有限公司。台式高速冷冻离心机(湖南湘仪实验室仪器开发有限公司，型号：H1650R)；全自动酶标洗板机(深圳市汇松科技发展有限公司，型号：PW-812 )；多功能酶标分析仪(深圳市汇松科技发展有限公司，型号：MB-530)。

1.4实验方法 采用分层随机设计, 将36只大鼠随机分为空白组、模型组、四磨汤低剂量组、四磨汤中剂量组、四磨汤高剂量组、莫沙必利组。结合既往实验结果[7-8]，采用夹尾刺激法和不规则喂养法对除空白组的大鼠进行FD肝脾气滞证造模：每日7:00，10:00，13:00，16:00用长钳夹住大鼠尾巴的近心端(约2/3)，以不夹破皮为准则，使其暴怒，从而与同笼的其他大鼠撕打，激怒其他大鼠，每次刺激30 min左右；每日喂水，隔日喂食。连续干预21 d后，通过大鼠行为学、胃排空及血清GAS和MTL水平判断是否造模成功。证实造模成功后，空白组和模型组灌胃蒸馏水(10 mL/kg)，四磨汤低、中、高组分别灌胃1.8 g/(kg·d)、2.4 g/(kg·d)、3.2 g/(kg·d)四磨汤，莫沙必利组灌胃0.305 mg/(kg·d)莫沙必利混悬液，均每日1次，持续14 d。

1.5观察指标和方法

1.5.1大鼠一般状态 每日观察大鼠的精神状态、姿势、皮毛色泽、活动度以及粪便等全身情况。

1.5.2大鼠体重 实验开始后，隔日7:00称量大鼠体重，根据体重调整给药量，比较各组大鼠灌胃第1天和第14天的体重。

1.5.3胃排空率 采用酚红法测定：末次灌胃结束后禁食1 d，各组大鼠灌注2 mL甲基纤维素-酚红溶液，半小时后处死大鼠，打开腹腔，结扎胃贲门和幽门，取出鼠胃，顺胃大弯剖开，将胃内容物冲洗干净，定容为20 mL。加入0.5 mol/L NaOH溶液20 mL搅匀，放置1 h，取5 mL上清液加入20%三氯乙酸0.5 mL以去蛋白，以3 500 r/min离心10 min，取上清液用分光光度计在560 nm处测定吸光度(A)值，再取10%甲基纤维素-酚红溶液2 mL，依次加入18 mL蒸馏水、20 mL的0.5 mol/L NaOH溶液、4 mL的20%三氯乙酸，搅匀后测定吸光度值。胃排空率=(1-实测酚红A/标准酚红A)×100%。

1.5.4小肠推进率 取出胃后，分离出肠系膜，剪取幽门至回盲部的一段肠管，将不施牵引力的肠管平摊于白纸上，测量小肠中的移行距离。小肠推进率=碳粉前端至幽门括约肌距离/幽门括约肌至小肠末端距离×100%。

1.5.5血清GAS和MTL水平 全血标本于室温放置2 h,于2～8 ℃下 1 000×g离心15 min，取上清,按照ELISA试剂盒操作说明检测，记录酶标仪在450 nm波长处各孔吸光度(OD值)，以标准品的浓度为纵坐标，OD值为横坐标得到相应曲线，根据其OD值由标准曲线换算相应浓度。

2 结 果

2.1大鼠一般状态比较 空白组大鼠精神状态良好，皮毛荣润，活动度正常，粪便不干不稀，饮水进食正常；模型组大鼠精神颓靡，皮毛粗糙，喜欢聚集笼箱一角，易受惊吓刺激，易呈现高攻击状态，粪便溏结不调，易黏滞于垫料，进食量减少；药物干预后，四磨汤高剂量组与莫沙必利组大鼠攻击力减弱，进水进食增加，粪便正常。

2.2大鼠体重比较 灌胃第14天，模型组大鼠体重明显低于空白组(P<0.05)，四磨汤各剂量组与莫沙必利组大鼠体重均明显高于模型组(P均<0.05)；四磨汤高剂量组大鼠体重与莫沙必利组比较差异无统计学意义(P>0.05)，四磨汤低、中剂量组均明显低于莫沙必利组(P均<0.05)。见表1。

表1 空白组和肝脾气滞证功能性消化不良各组大鼠灌胃第1天及第14天体重比较

2.3大鼠胃排空率与小肠推进率比较 模型组大鼠胃排空率、小肠推进率均明显低于空白组(P均<0.05)，四磨汤中、高剂量组和莫沙必利组大鼠胃排空率与小肠推进率均明显高于模型组(P均<0.05)；四磨汤高剂量组胃排空率明显高于四磨汤低、中剂量组和莫沙必利组(P均<0.05)，莫沙必利组均明显高于四磨汤低、中剂量组(P均<0.05)；四磨汤高剂量组及莫沙必利组大鼠小肠推进率均明显高于四磨汤低剂量组(P均<0.05)，与空白组比较差异均无统计学意义(P均>0.05)，且四磨汤高剂量组与莫沙必利组比较差异无统计学义(P均>0.05)。见表2。

表2 空白组和肝脾气滞证功能性消化不良各组大鼠胃排空率与小肠推进率比较

2.4大鼠血清GAS和MTL水平比较 模型组大鼠血清GAS、MTL水平均明显低于空白组(P均<0.05)；四磨汤各剂量组和莫沙必利组大鼠血清MTL、GAS水平均明显高于模型组(P均<0.05)；四磨汤高剂量组大鼠血清MTL、GAS水平均明显高于四磨汤低、中剂量组和莫沙必利组(P均<0.05)，且莫沙必利组均明显高于四磨汤低、中剂量组(P均<0.05)。见表3。

表3 空白组和肝脾气滞证功能性消化不良各组大鼠血清GAS和MTL水平比较

3 讨 论

根据FD的症状，临床多将FD归于中医学“痞满”“胃脘痛”等范畴。中医认为FD以脾虚为根本，气滞为关键病机，贯穿疾病全程[9]。四磨汤以乌药为君，疏肝郁、行脾滞；沉香为臣，下气降逆；佐以槟榔、人参，开郁行气而不伤正，四药共奏行气降逆、宽胸散结之效。现代药理学研究显示，乌药含有大量的呋喃倍半萜及内酯等物质, 具有抗炎止痛、抗肿瘤、抗氧化等作用[10]。沉香具有镇痛、神经保护、抗炎抗菌、抗抑郁等作用[11]，其主要成分倍半萜类化合物和2-(2-苯乙基)色酮类化合物可抑制乙酰胆碱酯酶活性[12]。人参可抗菌，调节人体免疫力[13]。体现槟榔生物活性的重要化合物是槟榔碱，槟榔碱可以通过提高小肠推进率、胃平滑肌收缩幅度和胃肠激素来调节胃肠道功能[14]。本课题组前期研究也表明四磨汤能明显改善肝脾气滞证FD患者症状[15]。

莫沙必利是治疗FD的常用药，它能兴奋胆碱能神经元释放乙酰胆碱，促进胃排空与小肠蠕动[16]，故本研究将该药设为阳性对照药。然而，长期使用莫沙必利会出现一系列不良反应，如腹泻、腹痛、皮疹和头晕[17]，寻求一种安全有效的治理方案尤为重要。

FD的病因众多，与胃肠道运动障碍、胃肠激素分泌紊乱、内脏感觉高敏、幽门螺杆菌感染、精神等多方面都有关联，而在FD的发病中起着尤为关键作用的当属胃肠道运动障碍[18]。胃肠道的运动功能与平滑肌细胞的电活动紧密相关，以周期性移行性复合运动(MMC)为表现形式。GAS和MTL都属于兴奋性胃肠激素，其中GAS可增强胃肠蠕动,并且有促进胃肠道黏膜修复及增加血流量, 促进胃酸、胃蛋白酶、胰液分泌等作用[19]。MTL主要是通过肠神经系统触发MMC来促进胃肠道蠕动，刺激胃蛋白酶的分泌，可作用于胃肠平滑肌上的胃泌素受体，增强平滑肌收缩功能[20]。

本研究中通过复合病因方法建立肝脾气滞证FD大鼠模型，显示FD大鼠胃肠功能明显减退，主要表现为胃残留率升高，小肠推进率及血清MTL、GAS水平降低，而这恰恰反映了肝脾气滞导致胃肠蠕动减慢的FD发生特点；四磨汤高剂量组胃残留量明显减少，小肠推进率及血清GAS、MTL水平增高。提示四磨汤可改善肝脾气滞型FD大鼠胃肠运动，其效应可能是通过升高大鼠血清中GAS和MLT水平来实现的。然而四磨汤调节MTL、GAS表达的作用机制以及改善胃肠动力的具体作用靶点通路尚不明确，这些问题均有待在后续研究中完善。

利益冲突：所有作者均声明不存在利益冲突。