化学发光免疫分析法在梅毒螺旋体抗体检测中的应用探究

雪 洲

（平凉市第二人民医院，甘肃 平凉 744000）

梅毒螺旋体（TP）为慢性性传播疾病，由感染梅毒螺旋体（TP）所致。该病可经由母婴、血液、性接触等途径传播，在发病早期不具有明显症状，而随着病毒在全身的持续扩散，可出现梅毒疹及淋巴结肿大、高热等全身症状，及至晚期，可导致多脏器功能受累，使患者生命健康受到显著损害[1]。故对梅毒做出早期诊断并给予有效治疗极为重要。既往常用的梅毒检测方法有酶联法（ELISA）、甲苯胺红不加热血清反应素试验（TRUST）、明胶颗粒凝集试验（TPPA）等，其中TPPA被认为是确认TP抗体（TP-Ab）最佳的方法，但其具有操作步骤复杂、检测费用昂贵、用时长等缺陷，在一定程度上限制其较大范围应用[2]。化学发光免疫分析法（CLIA）为近几年兴起的一种血清学检测方法，有研究指出，其在TP-Ab检测中的灵敏度、特异度均较高，且操作简单、检测用时短[3]。本研究运用CLIA对TP-Ab进行检测，发现其检测效能优于ELISA、TRUST，且和TPPA一致性良好，现报道如下。

1 资料与方法

1.1 资料

以2019年2月—2021年5月甘肃省平凉市第二人民医院接收的258例行TP-Ab检测的患者为研究对象，纳入标准：（1）临床表现为全身淋巴结肿大、发烧、头痛等；（2）意识清醒，无精神疾病；（3）临床资料完备。排除标准：（1）曾接受抗梅毒治疗；（2）凝血功能异常；（3）脏器严重功能病变；（4）不配合检查。患者中男136例，女122例；年龄21～75岁，平均（48.96±5.02）岁；体重指数（BMI）18.7～24.8 kg/m2，平均（21.78±1.95）kg/m2；学历：初中或以下103例，高中/中专91例，高中以上64例；婚姻状况：未婚67例，已婚或离异191例。本研究经医院伦理委员会审批通过。

1.2 方法

1.2.1 标本采集

空腹采集患者肘正中静脉血5 mL，室温静置2 h左右，血液凝固后在3 000 r/min转速下离心10 min，获得血清后于-20 ℃环境下冷藏待测。

1.2.2 检测方法

CLIA检测方法：取样本、磁微粒各50 μL，将其置于微孔板内，再加入100 μL酶结合物，在37 ℃温度下孵育0.5 h，利用磁分离洗涤器进行4次洗涤，然后注入100 μL发光底物，室温下避光反应5 min，最后使用全自动化学发光免疫分析仪（厂商：安图生物，型号：AutoLumo A2000）测定发光强度。样品的发光量（S）/临界值（C）达到或超过1判定为阳性。

ELISA检测方法：依照ELISA试剂盒（上海科华生物工程股份有限公司）说明书开展操作，即取50 μL样本，将其注入预包被条孔处，并设置为3个对照孔（阴性、阳性与空白对照），在37℃温度下孵育1 h，取50 μL酶标物注入阴性、阳性对照孔内，混合均匀后置于37 ℃温度下孵育0.5 h，随后将50 μL底物缓冲液注入各对照孔内，混合均匀后置于37 ℃温度下孵育0.5 h，显色再取50 μL终止液注入各孔内，轻轻摇均后在酶联免疫检测仪（厂商：南京华东电子集团医疗装备有限责任公司，型号：DG5031型）上判读结果。样品吸光度（A）值（S）/临界值（CO）达到或超过1判定为阳性。

TRUST检测方法：将50 μL血清置于卡片圈内，使其均匀涂布于整个圈内。将抗原摇匀，加入血清圈内。将卡片置于脱色摇床上，摇匀后在亮光下用肉眼观察。如见凝集块则判定为阳性。

TPPA检测方法：每份样本做9孔，将标本稀释液注入U型反应板内，其中1孔内注入量为100 μL，其余孔注入量为25 μL，于1孔内注入25 μL血清，混合均匀后取25 μL加入至2孔，依次稀释至9孔，在3孔内注入25 μL未致敏粒子D液，4及后面的其他孔注入25 μL C液，振荡0.5 min后置于有盖湿盒内20～25 ℃避光静止置2 h，对结果进行观察。粒子散开，阳性滴度为1:80判定为阳性。

1.3 观察指标

统计CLIA、ELISA、TRUST 对TP-Ab 的检出情况，并以TPPA为金标准，计算上述3种方法的检测效能。此外，分析3种方法检测结果和TPPA检验结果的一致性。

1.4 统计学方法

运用SPSS 22.0软件分析，用百分比描述计数资料，以χ2检验，一致性分析采用Kappa检验，Kappa＜0.4、0.4～0.7、＞0.7分别表示一致性差、中等、良好，检验水准=0.05。

2 结果

2.1 比较3种方法的检测结果

258例患者中经TPPA检出TP-Ab阳性83例，阴性175例；CLIA检出阳性84例，阴性174例；ELISA检出阳性81例，阴性177例，TRUST检出阳性69例，阴性152例，见表1。

表1 3种方法的检测结果比较（例）

2.2 比较3种方法的检测效能

CLIA、ELISA 对TP-Ab的检测效能明显优于TRUST（P均＜0.05），且CLIA检测的灵敏度、准确度明显优于ELISA（P均＜0.05），见表2。

表2 3种方法的检测效能比较 [例（%）]

2.3 检测结果的一致性分析

对CLIA、ELISA、TRUST检测结果和TPPA检验结果进行一致性进分析，结果显示，Kappa分别为0.991、0.928、0.681。提示CLIA、ELISA和TPPA检验结果的一致性良好，TRUST和TPPA检验结果的一致性中等。

3 讨论

梅毒为一种对人体具有极大危害的性病，不仅可损害患者健康，还可通过性行为在人群间传播，并能通过胎盘传染给胎儿，对其子女身心发展产生不良影响[4]。TP为梅毒的病原体，当人体遭受其感染后可生成两种抗体：一种是特异性TP-Ab，包括IgM和IgG等两种，前者产生时间早，但维持时间短，消失迅速。后者产生时间略晚，但可长期留存于人体内，甚至终身留存[5]。另一种为非特异性TP-Ab，是由受到TP破坏的细胞组织所释放的一种具有抗体性质的物质。而通过检测血液中是否存在TP-Ab，可为梅毒诊断提供帮助。

血清学检验方法为TP-Ab检测的主要方法，目前，采用的血清学检验方法颇多，其中TPPA、ELISA、TRUST、CLIA较为常用。TPPA原理是在明胶颗粒上包被TP Nichols株的精制纯化抗原，和样本中的TPAb结合形成凝集反应[6]。此方法对TP-Ab的检测效果较高，多用于梅毒确诊试验中。但由于其检测费用较高、操作繁琐、检测时间长，故不宜于梅毒大样本检测[7]。ELISA为TP-Ab检测的传统方法，其是利用基因重组工程合成TP抗原包被于滴定板处，并采用双抗原夹心法对血清中TP-Ab进行检测。该方法适合大样本检测，但受实验室环境因素、机体内在因素影响，易出现假阳性结果[8-9]。TRUST为一种非特异性TP-Ab血清检测法，其结果具有清晰易读、稳定性好等特点，但灵敏度并不高，会出现假阳性结果，如慢性肾炎、麻风病、红斑狼疮等疾病患者血清中可检测出非特异性TP-Ab[10]。CLIA为一种检测特异性TP-Ab的先进方式，其是将发光物质标记于抗原或抗体上，待免疫反应完成后添加酶底物促使发光。通过测定发光强度，并基于标准曲线计算得到待测物含量[11]。此方法检测原理和ELISA相似，但区别在于CLIA以发光物质取代酶为标记物，并采用仪器测定发光强度来实现定量分析[12]。有研究报道指出，CLIA对梅毒检测的灵敏度、特异度分别高达97.67%、98.85%[13]。在本研究中，CLIA检测的灵敏度、特异度、准确度分别为100.00%、99.43%、99.61%，ELISA分别为93.98%、98.29%、96.90%，TRUST分别为83.13%、86.86%、85.66%。CLIA、ELISA检测效能和TRUST相比明显较优（P均＜0.05），CLIA灵敏度、准确度和ELISA相比明显较优；CLIA和TPPA检验结果的一致性良好。说明CLIA对TP-Ab的检测效能优于ELISA、TRUST，和TPPA相当，有助于提高对梅毒诊断的准确性。究其原因，CLIA加入发光底物后产生的化学信号稳定性好，维持时间长，且能够避免光源照射因素对结果分析的影响，故可提高结果的可靠度[14]。加之其具有操作简便、耗时短、易自动化等特点，故可用于对梅毒的大样本筛查中。

综上所述，CLIA对TP-Ab的检测效能媲美TPPA，优于ELISA、TRUST，可减少漏误诊的发生。且其可实现批量操作，不失为一种梅毒筛查的有效方法。