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化学发光免疫分析法在梅毒螺旋体抗体检测中的应用探究

2023-03-08

甘肃科技 2023年1期
关键词:孔内梅毒一致性

雪 洲

(平凉市第二人民医院,甘肃 平凉 744000)

梅毒螺旋体(TP)为慢性性传播疾病,由感染梅毒螺旋体(TP)所致。该病可经由母婴、血液、性接触等途径传播,在发病早期不具有明显症状,而随着病毒在全身的持续扩散,可出现梅毒疹及淋巴结肿大、高热等全身症状,及至晚期,可导致多脏器功能受累,使患者生命健康受到显著损害[1]。故对梅毒做出早期诊断并给予有效治疗极为重要。既往常用的梅毒检测方法有酶联法(ELISA)、甲苯胺红不加热血清反应素试验(TRUST)、明胶颗粒凝集试验(TPPA)等,其中TPPA被认为是确认TP抗体(TP-Ab)最佳的方法,但其具有操作步骤复杂、检测费用昂贵、用时长等缺陷,在一定程度上限制其较大范围应用[2]。化学发光免疫分析法(CLIA)为近几年兴起的一种血清学检测方法,有研究指出,其在TP-Ab检测中的灵敏度、特异度均较高,且操作简单、检测用时短[3]。本研究运用CLIA对TP-Ab进行检测,发现其检测效能优于ELISA、TRUST,且和TPPA一致性良好,现报道如下。

1 资料与方法

1.1 资料

以2019年2月—2021年5月甘肃省平凉市第二人民医院接收的258例行TP-Ab检测的患者为研究对象,纳入标准:(1)临床表现为全身淋巴结肿大、发烧、头痛等;(2)意识清醒,无精神疾病;(3)临床资料完备。排除标准:(1)曾接受抗梅毒治疗;(2)凝血功能异常;(3)脏器严重功能病变;(4)不配合检查。患者中男136例,女122例;年龄21~75岁,平均(48.96±5.02)岁;体重指数(BMI)18.7~24.8 kg/m2,平均(21.78±1.95)kg/m2;学历:初中或以下103例,高中/中专91例,高中以上64例;婚姻状况:未婚67例,已婚或离异191例。本研究经医院伦理委员会审批通过。

1.2 方法

1.2.1 标本采集

空腹采集患者肘正中静脉血5 mL,室温静置2 h左右,血液凝固后在3 000 r/min转速下离心10 min,获得血清后于-20 ℃环境下冷藏待测。

1.2.2 检测方法

CLIA检测方法:取样本、磁微粒各50 μL,将其置于微孔板内,再加入100 μL酶结合物,在37 ℃温度下孵育0.5 h,利用磁分离洗涤器进行4次洗涤,然后注入100 μL发光底物,室温下避光反应5 min,最后使用全自动化学发光免疫分析仪(厂商:安图生物,型号:AutoLumo A2000)测定发光强度。样品的发光量(S)/临界值(C)达到或超过1判定为阳性。

ELISA检测方法:依照ELISA试剂盒(上海科华生物工程股份有限公司)说明书开展操作,即取50 μL样本,将其注入预包被条孔处,并设置为3个对照孔(阴性、阳性与空白对照),在37℃温度下孵育1 h,取50 μL酶标物注入阴性、阳性对照孔内,混合均匀后置于37 ℃温度下孵育0.5 h,随后将50 μL底物缓冲液注入各对照孔内,混合均匀后置于37 ℃温度下孵育0.5 h,显色再取50 μL终止液注入各孔内,轻轻摇均后在酶联免疫检测仪(厂商:南京华东电子集团医疗装备有限责任公司,型号:DG5031型)上判读结果。样品吸光度(A)值(S)/临界值(CO)达到或超过1判定为阳性。

TRUST检测方法:将50 μL血清置于卡片圈内,使其均匀涂布于整个圈内。将抗原摇匀,加入血清圈内。将卡片置于脱色摇床上,摇匀后在亮光下用肉眼观察。如见凝集块则判定为阳性。

TPPA检测方法:每份样本做9孔,将标本稀释液注入U型反应板内,其中1孔内注入量为100 μL,其余孔注入量为25 μL,于1孔内注入25 μL血清,混合均匀后取25 μL加入至2孔,依次稀释至9孔,在3孔内注入25 μL未致敏粒子D液,4及后面的其他孔注入25 μL C液,振荡0.5 min后置于有盖湿盒内20~25 ℃避光静止置2 h,对结果进行观察。粒子散开,阳性滴度为1:80判定为阳性。

1.3 观察指标

统计CLIA、ELISA、TRUST 对TP-Ab 的检出情况,并以TPPA为金标准,计算上述3种方法的检测效能。此外,分析3种方法检测结果和TPPA检验结果的一致性。

1.4 统计学方法

运用SPSS 22.0软件分析,用百分比描述计数资料,以χ2检验,一致性分析采用Kappa检验,Kappa<0.4、0.4~0.7、>0.7分别表示一致性差、中等、良好,检验水准=0.05。

2 结果

2.1 比较3种方法的检测结果

258例患者中经TPPA检出TP-Ab阳性83例,阴性175例;CLIA检出阳性84例,阴性174例;ELISA检出阳性81例,阴性177例,TRUST检出阳性69例,阴性152例,见表1。

表1 3种方法的检测结果比较(例)

2.2 比较3种方法的检测效能

CLIA、ELISA 对TP-Ab的检测效能明显优于TRUST(P均<0.05),且CLIA检测的灵敏度、准确度明显优于ELISA(P均<0.05),见表2。

表2 3种方法的检测效能比较 [例(%)]

2.3 检测结果的一致性分析

对CLIA、ELISA、TRUST检测结果和TPPA检验结果进行一致性进分析,结果显示,Kappa分别为0.991、0.928、0.681。提示CLIA、ELISA和TPPA检验结果的一致性良好,TRUST和TPPA检验结果的一致性中等。

3 讨论

梅毒为一种对人体具有极大危害的性病,不仅可损害患者健康,还可通过性行为在人群间传播,并能通过胎盘传染给胎儿,对其子女身心发展产生不良影响[4]。TP为梅毒的病原体,当人体遭受其感染后可生成两种抗体:一种是特异性TP-Ab,包括IgM和IgG等两种,前者产生时间早,但维持时间短,消失迅速。后者产生时间略晚,但可长期留存于人体内,甚至终身留存[5]。另一种为非特异性TP-Ab,是由受到TP破坏的细胞组织所释放的一种具有抗体性质的物质。而通过检测血液中是否存在TP-Ab,可为梅毒诊断提供帮助。

血清学检验方法为TP-Ab检测的主要方法,目前,采用的血清学检验方法颇多,其中TPPA、ELISA、TRUST、CLIA较为常用。TPPA原理是在明胶颗粒上包被TP Nichols株的精制纯化抗原,和样本中的TPAb结合形成凝集反应[6]。此方法对TP-Ab的检测效果较高,多用于梅毒确诊试验中。但由于其检测费用较高、操作繁琐、检测时间长,故不宜于梅毒大样本检测[7]。ELISA为TP-Ab检测的传统方法,其是利用基因重组工程合成TP抗原包被于滴定板处,并采用双抗原夹心法对血清中TP-Ab进行检测。该方法适合大样本检测,但受实验室环境因素、机体内在因素影响,易出现假阳性结果[8-9]。TRUST为一种非特异性TP-Ab血清检测法,其结果具有清晰易读、稳定性好等特点,但灵敏度并不高,会出现假阳性结果,如慢性肾炎、麻风病、红斑狼疮等疾病患者血清中可检测出非特异性TP-Ab[10]。CLIA为一种检测特异性TP-Ab的先进方式,其是将发光物质标记于抗原或抗体上,待免疫反应完成后添加酶底物促使发光。通过测定发光强度,并基于标准曲线计算得到待测物含量[11]。此方法检测原理和ELISA相似,但区别在于CLIA以发光物质取代酶为标记物,并采用仪器测定发光强度来实现定量分析[12]。有研究报道指出,CLIA对梅毒检测的灵敏度、特异度分别高达97.67%、98.85%[13]。在本研究中,CLIA检测的灵敏度、特异度、准确度分别为100.00%、99.43%、99.61%,ELISA分别为93.98%、98.29%、96.90%,TRUST分别为83.13%、86.86%、85.66%。CLIA、ELISA检测效能和TRUST相比明显较优(P均<0.05),CLIA灵敏度、准确度和ELISA相比明显较优;CLIA和TPPA检验结果的一致性良好。说明CLIA对TP-Ab的检测效能优于ELISA、TRUST,和TPPA相当,有助于提高对梅毒诊断的准确性。究其原因,CLIA加入发光底物后产生的化学信号稳定性好,维持时间长,且能够避免光源照射因素对结果分析的影响,故可提高结果的可靠度[14]。加之其具有操作简便、耗时短、易自动化等特点,故可用于对梅毒的大样本筛查中。

综上所述,CLIA对TP-Ab的检测效能媲美TPPA,优于ELISA、TRUST,可减少漏误诊的发生。且其可实现批量操作,不失为一种梅毒筛查的有效方法。

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