半夏泻心汤通过抑制炎症抑制小鼠溃疡性结肠炎*

张梁坤 ，谷文超 ，吴婷婷 ，李灵 ，吴秀花 ，张新生 ，韩涛 ，陈健

（1.济南市中心医院，济南 250013；2.临朐张新生中医诊所（新生堂），临朐 262600；3.山东中医药大学，济南 250355）

溃疡性结肠炎（UC）是现阶段国内外公共卫生领域面临的重要挑战，患者常出现腹痛、泄泻、体质量减轻甚或便血、脓血便等临床表现，严重影响患者生活质量，降低幸福感[1]；同时有研究证明，UC迁延不愈可导致直结肠癌的发生[2-4]。因此，积极探寻合理有效的UC防治方法迫在眉睫。半夏泻心汤出自《伤寒杂病论》，是中国古代经典名方之一。课题组前期经循证及实验研究发现，半夏泻心汤单独应用或联合应用可通过调节肠道微生态、外周及中枢5-羟色胺（5-HT）水平，促进Th1/Th2以及Th17/Treg免疫细胞平衡，改善局部炎症反应进而发挥治疗UC 的作用[5-9]。

半夏泻心汤中含有有毒药物半夏，且原方中用量为半升，约为39.1 g，远超《中华人民共和国药典》（2020年版）[10]（以下简称《药典》）中半夏的用量，故有关半夏的临床用量亦被历代医家深入论述。文章基于半夏的不同用药剂量组方以探究不同剂量的半夏泻心汤防治UC的疗效差异。生理状态下，机体中抗炎因子与抑炎因子之间的动态平衡是维持机体健康的基本保证，而炎症在UC的发生发展过程中发挥着举足轻重的作用[11-13]，故UC患者体内必存在各类炎症因子的失衡。文章基于模型小鼠血清及局部结肠组织的炎症因子含量探究半夏泻心汤防治UC的作用机制。

本研究基于古代经典名方原意及现代用药法则，选用与原方中洗半夏最为接近的半夏现代炮制品——清半夏，且以半夏的原方用量及药典最大用量为基准，依据半夏泻心汤各药物剂量比[14]进行组方（半夏泻心汤古方量方及半夏泻心汤药典量方），干预右旋葡聚糖硫酸钠（DSS）诱导建立的UC模型小鼠（DSS-UC小鼠）以探究不同剂量的半夏泻心汤防治UC的疗效差异及其作用机制。以期为经典名方半夏泻心汤的临床合理应用及UC的防治提供实验基础。

1 材料

1.1 实验动物 本研究选用的实验动物为SPF级健康 C57BL/6J小鼠，雄性、6周龄（18～22 g），40只；其均购自北京维通利华实验动物技术有限公司，实验动物生产许可证号：SCXK（京）2016-0006，质量合格证号：1100111911047707。

1.2 中药材 清半夏（批号190501）、干姜（批号190101）、黄连（批号 180501）、黄芩（批号 190301）、人参（批号190401）、炙甘草（批号181106）和大枣（批号190506），以上药物均采自山东百味堂中药饮片有限公司，并经山东中医药大学中药鉴定学教研室主任徐凌川教授鉴定均为真品。分别精确称取清半夏 39.10g、9.00g，干姜 46.90g、10.80g，黄连 15.60g、3.60 g，黄芩 46.90 g、10.80 g，人参 46.90 g、10.80 g，炙甘草 46.90 g、10.8 g和大枣 31.00 g、7.2 g组成半夏泻心汤古方量方（总生药量：273.30 g）和半夏泻心汤药典量方（总生药量：63.00 g）。取上述两剂药分别加8倍量蒸馏水，冷浸120 min，大火开锅后微沸煎煮30 min后，倾出药液，趁热过滤，去滓再煎至154 mL药液；分别获取半夏泻心汤古方量方水煎液（生药浓度：1.776 5 g/mL）和半夏泻心汤药典量方水煎液（生药浓度：0.409 5 g/mL），4℃保存备用。

1.3 试剂 右旋葡聚糖硫酸钠（美国MP公司相对分子质量36 000～50 000，批号S2839），冰醋酸（国药集团化学试剂有限公司，批号10000218），伊红（Solarbio，批号 E8090），中性树脂（Solarbio，批号 G8590），苏木素（Sevicebio，批号G1004），4%多聚甲醛（Biosharp，批号 69111800）。

仪器：正置显微镜（徕卡显微系统有限公司，型号DM1000），恒温烘箱（上海一恒科学仪器有限公司，型号DHG-9023A），石蜡切片机（徕卡显微系统有限公司，型号RM2235），摊片烤片机（湖北康强医疗器械有限公司，型号TKD-TK），生物组织包埋机-冷冻机（泰维科技，型号TB-718L），生物组织包埋机（泰维科技，型号TB-718D），自动组织脱水机（湖北康强医疗器械有限公司，型号TKD-TSF），酶标仪（LabsystemsMultiskan，型号MS352型）。

2 方法

2.1 动物实验设计 本研究采用C57BL/6J雄性小鼠，接受动物后置于观察室观察1周，期间通过体质量区间分组法将32只小鼠随机分为空白组、模型组、半夏泻心汤古方量组（以下简称古方量组）和半夏泻心汤药典量组（以下简称药典量组）；实验开始后除空白组外所有小鼠自由饮用浓度为2.5%的DSS水溶液7 d；同时古方量组及药典量组按0.2 mL/10 g给予相应的中药水煎液干预，空白组及模型组给予等量的灭菌水予以对照。干预7 d后，停止DSS水溶液自由饮用，古方量组及药典量组继续中药干预1周。实验第14天晚，所有小鼠禁食禁水12 h，随后收集小鼠各类标本以供检测。具体流程如图1。

图1 半夏泻心汤防治溃疡性结肠炎小鼠模型的实验流程Fig.1 Experimental workflow of the prevention and treatment of ulcerative colitis mice model by Banxia Xiexin Decoction

本实验过程中，所有实验小鼠均饲养于山东中医药大学实验动物中心SPF级屏障环境设施（实验动物使用许可证号为SYXK（鲁）20170022）内。实验期间采用60Co灭菌大小鼠维持饲料。环境温度（22±2）℃；相对湿度50%±5%；光照交替12/12 h。

本研究实验方案经山东中医药大学实验动物福利伦理审查委员会审查通过，所有实验操作严格遵循山东中医药大学动物伦理委员会相关规定进行。

2.2 UC动物模型复制 本研究采用C57BL/6J小鼠自由饮用浓度为2.5%的DSS水溶液7 d诱导建立UC模型。在诱导建模过程中，每笼小鼠给药瓶充足且瓶中DSS溶液足量，以减少因小鼠竞争饮水而导致给药量不足所带来的偏倚。

2.3 实验动物给药 在实验开始、动物造模之初同时予以中药灌胃干预。具体如下：自实验第1天起，各组小鼠每天于11∶00-13∶00灌胃1次，连续灌胃14 d。空白组、模型组予以生理盐水灌胃（给药量为0.2 mL/10 g）；古方量组、药典量组则分别予以半夏泻心汤古方量方（生药浓度：1．776 5 g/mL）、药典量方（生药浓度：0．409 5 g/mL）水煎液灌胃（给药量为0．2 mL/10 g）。

2.4 实验动物 一般状况的记录实验期间每日观察、记录实验小鼠的饮食摄水量、粪便、被毛、活动和精神状态、体质量及死亡率等一般情况，并详细记录小鼠腹泻及便血程度。同时根据文献[15]方法计算疾病指数（DAI）值：DAI=体重指数+大便黏稠度指数+出血情况指数。各指标计算标准如下：体重指数（体质量不变为0，下降1%～5%为1分，下降5%～10%为2分，下降10%～15%为3分，下降大于15%为4分）；大便黏稠度指数（正常为0，松散的大便为2分，腹泻为4分）和大便出血指数（正常0分，隐血阳性为2分，显性出血为4分）。

2.5 实验动物标本的收集与检测 1）通过小鼠眼眶后静脉丛收集血液，4℃下静置30 min后，在4℃、3 000 r/min条件下离心15 min，离心半径12．5 cm，取上清，-80℃保存，供炎症因子检测。2）打开小鼠腹腔，摘取胸腺、肝、脾、肾脏，滤纸吸干残血后称质量（g），计算脏器指数。3）分离肠管，水平拉直肠管测量肠管总长度及结肠长度（cm），称取肠管总质量及结肠质量（g）。4）截取结肠近段及远段，磷酸盐缓冲液（PBS）冲洗干净，4%甲醛溶液固定保存，经苏木精-伊红（HE）染色以观察结肠组织病理损伤情况；截取结肠中间段用PBS冲洗干净，-80℃保存，供炎症因子检测。

2.6 统计学方法 本研究数据分析、作图采用Graphpad Prism 9统计学软件包，并使用均数±标准差（±s）表示；多组间数据差异比较采用one-way ANOVA进行分析，组间两两比较采用LSD t-test。相关性分析则采用R version 3．5．3软件进行计算及作图。P＜0．05表示具有统计学差异。

3 结果

3.1 各组小鼠HE染色比较 为观察半夏泻心汤各方对DSS-UC模型小鼠局部组织的病理损伤的影响，分别对各组别小鼠结肠近段及远段组织进行HE染色，以分析其局部组织病理学改变。HE染色结果显示：空白组小鼠结肠组织近段及远段均无明显的炎症浸润，其黏膜完好、肠腺排列整齐，隐窝结构无改变，可见大量杯状细胞，见图2A、B。DSS-UC模型小鼠则出现严重的炎性细胞浸润，同时出现肠腺排列紊乱、上皮细胞黏液分泌减少，并伴有隐窝萎缩、分支等结构改变，见图2C、D。而药物干预组结肠组织损伤均有显著改善，上皮细胞完整性改善、黏液分泌增多，炎性细胞浸润减少，杯状细胞数量已显著增加；且古方量组的改善优于药典量组，见图 2E、F、G、H。

图2 半夏泻心汤防治溃疡性结肠炎各组小鼠结肠组织病理变化（HE染色，×200）Fig.2 Pathological changes the prevention and treatment in colon tissue of ulcerative mice in each group of by Banxia Xiexin Decoction(HE staining，×200)

此结果表明，半夏泻心汤可显著改善DSS-UC模型小鼠结肠近段及远段的组织病理学损伤，且古方量组疗效优于药典量组。

3.2 各组脏器指数比较 脏器指数结果如图3所示，与空白组相比，模型组小鼠的肝脏指数（P＜0．01）、脾脏指数（P＜0．01）、结肠指数（P＜0．01）、结总肠质量比升高（P＜0．05），均具有统计学差异。结总肠长度比有上升趋势，但无统计学差异（P＞0．05）；胸腺指数降低，差异具有统计学意义（P＜0．01）。与模型组相比，两给药组小鼠胸腺指数、肝脏指数、脾脏指数、结肠指数、结总肠长度比、结总肠质量比均有不同程度的恢复，其中古方量组小鼠胸腺指数恢复明显，具有统计学差异（P＜0．05）；药典量方对小鼠结总肠长度比、结总肠质量比的恢复明显，而古方量方则对小鼠胸腺指数、肝脏指数、脾脏指数的恢复显著。肾脏指数及结肠长度质量比在各组别小鼠间无明显差异。

图3 半夏泻心汤防治溃疡性结肠炎小鼠的脏器指数Fig.3 Organ index of the prevention and treatment in ulcerative colitis mice by Banxia Xiexin Decoction

此结果表明DSS-UC模型小鼠的肝脏指数、脾脏指数、结肠指数、结总肠长度比、结总肠质量比显著高于正常小鼠，而胸腺指数则显著低于正常小鼠，肾脏指数及结肠长度重量比则无显著变化；半夏泻心汤可不同程度的预防DSS造模所带来的脏器指数的变化，其中古方量方对胸腺指数的恢复尤为显著；不同剂量的半夏泻心汤对脏器指数的影响不尽相同，药典量方在预防UC小鼠结总肠长度比、结总肠质量比的改变方面更有优势，而古方量方则在预防UC小鼠胸腺指数、肝脏指数、脾脏指数的改变方面更有优势。

3.3 各组小鼠炎症因子水平比较 炎症在UC发生发展过程中起着极为重要的作用，研究检测各组小鼠血清及结肠组织中各炎症因子含量以探究半夏泻心汤各组方在防治UC发生发展中对血清及结肠组织炎症因子含量的影响。现分述如下。

如图4所示，与空白组相比，模型组小鼠血清及结肠组织白介素（IL）-4含量升高，差异具有统计学意义（P＜0．01）；而古方量组、药典量组小鼠血清及结肠组织IL-4含量低于模型组，差异具有统计学意义（P＜0．01）。此结果表明半夏泻心汤可防治 DSS-UC小鼠模型血清及结肠组织中IL-4的升高。

图4 半夏泻心汤防治溃疡性结肠炎小鼠的IL-4水平Fig.4 Serum IL-4 level of the prevention and treatment in ulcerative colitis mice by Banxia Xiexin Decoction

如图5所示，与空白组相比，模型组小鼠血清及结肠组织IL-10含量降低，差异具有统计学意义（P＜0．01）；与模型组相比，古方量组、药典量组小鼠血清及结肠组织IL-10含量则有不同程度的恢复。古方量方及药典量方对实验小鼠结肠组织IL-10含量的恢复明显（P＜0．05），其中古方量方显著（P＜0．01），差异均具有统计学意义。此结果表明半夏泻心汤可防治DSS-UC小鼠模型血清及结肠组织中IL-10的降低，且以古方量方为优。

图5 半夏泻心汤防治溃疡性结肠炎小鼠的IL-10水平Fig.5 Serum IL-10 level of the prevention and treatment in ulcerative colitis mice by Banxia Xiexin Decoction

如图6所示，与空白组相比，模型组小鼠血清及结肠组织IL-17含量降低，差异具有统计学意义（P＜0．01）；与模型组相比，古方量组小鼠血清及结肠组织IL-17含量与模型组相近；而药典量组小鼠仅血清IL-17含量有恢复，差异具有统计学意义（P＜0．01），结肠组织IL-10含量与模型组相比，无统计学差异（P＞0．05）。此结果表明半夏泻心汤药典量方可防治DSS-UC小鼠模型血清IL-10的降低。

图6 半夏泻心汤防治溃疡性结肠炎小鼠的IL-17水平Fig.6 Serum IL-17 level of the prevention and treatment in ulcerative colitis mice by Banxia Xiexin Decoction

如图7所示，与空白组相比，模型组小鼠血清及结肠组织肿瘤坏死因子（TNF）-α含量升高，差异具有统计学意义（P＜0．01）。与模型组相比，古方量组、药典量组结肠组织TNF-α含量均有恢复（P＜0．01），而对于血清TNF-α 含量，药典量组小鼠较模型组降低（P＜0．01），差异均具有统计学意义，但古方量组小鼠仅有下降的趋势。此结果表明半夏泻心汤古方量方及药典量方可防治DSS-UC小鼠模型结肠组织中TNF-α的降低，而半夏泻心汤药典量方则可防治DSS-UC小鼠模型血清TNF-α的降低。

图7 半夏泻心汤防治溃疡性结肠炎小鼠的TNF-α水平Fig.7 Serum TNF-α level of the prevention and treatment in ulcerative colitis mice by Banxia Xiexin Decoction

如图8所示，与空白组相比，模型组小鼠血清及结肠组织干扰素γ（IFN-γ）含量升高，差异具有统计学意义（P＜0．01）。古方量组、药典量组小鼠血清及结肠组织IFN-γ含量较模型组小鼠无变化。此结果表明半夏泻心汤各组方对DSS-UC小鼠模型血清及结肠组织IFN-γ水平无显著影响。

图8 半夏泻心汤防治溃疡性结肠炎小鼠的IFN-γ水平Fig.8 Serum IFN-γ level the prevention and treatment in ulcerative colitis mice by Banxia Xiexin Decoction

如图9所示，与空白组相比，模型组小鼠血清及结肠组织5-HT水平均下降，差异具有统计学意义（P＜0．01）；而与模型组相比，药物干预组小鼠血清及结肠组织5-HT水平均有恢复，差异具有统计学意义（P＜0．01），其中药典量组小鼠血清及结肠组织5-HT水平均已恢复到空白组水平，与空白组比较无统计学差异（P＞0．05）；但古方量组小鼠血清 5-HT 水平低于空白组（P＜0．05），而结肠组织 5-HT 水平则高于空白组（P＜0．01），差异均具有统计学意义。此结果表明，半夏泻心汤可预防DSS-UC模型小鼠血清及结肠组织5-HT含量的降低。

图9 半夏泻心汤防治溃疡性结肠炎小鼠的5-HT水平Fig.9 Serum 5-HT level the prevention and treatment in ulcerative colitis mice by Banxia Xiexin Decoction

如图10A、B所示，与空白组相比，模型组小鼠血清及结肠组织IL-4/IL-10水平升高，差异具有统计学意义（P＜0．01）；与模型组相比，古方量组、药典量组小鼠血清及结肠组织IL-4/IL-10水平则降低，差异具有统计学意义（P＜0．01），与空白组小鼠水平相近。此结果表明半夏泻心汤可防治DSS-UC小鼠模型血清及结肠组织IL-4/IL-10的降低。

如图10C、D所示，与空白组相比，模型组小鼠结肠组织IL-10/IL-17水平升高，差异具有统计学意义（P＜0．05），而血清 IL-10/IL-17水平则无变化。与模型组相比，古方量组小鼠血清及结肠组织IL-10/IL-17 水平则进一步升高（P＜0．05），且血清 IL-10/IL-17 水平升高尤为显著（P＜0．01），差异均具有统计学意义。药典量组小鼠结肠组织IL-10/IL-17水平亦进一步升高，具有统计学差异（P＜0．05），但血清IL-10/IL-17水平则无显著变化，与空白组、模型组小鼠相似。此结果表明半夏泻心汤古方量方可升高DSS-UC小鼠模型血清及结肠组织IL-10/IL-17的水平，而药典量方仅可升高DSS-UC小鼠模型结肠组织IL-10/IL-17的水平。

如图10E、F所示，与空白组相比，模型组小鼠结肠组织IFN-γ/IL-4水平降低，差异具有统计学意义（P＜0．01），而血清IFN-γ/IL-4 水平则无显著变化。与模型组相比，古方量组小鼠结肠组织IFN-γ/IL-4水平有恢复（P＜0．01），药典量组小鼠血清 IFN-γ/IL-4水平有恢复（P＜0．01），差异均具有统计学意义。此结果表明半夏泻心汤古方量方可防治DSS-UC小鼠模型结肠组织IFN-γ/IL-4的降低，而药典量方可防治DSS-UC小鼠模型血清IFN-γ/IL-4的降低。

图10 半夏泻心汤防治溃疡性结肠炎小鼠的相关炎症因子比值Fig.10 Ratio of inflammation-related factors of experimental mice of the prevention and treatment in ulcerative colitis mice by Banxia Xiexin Decoction

3.4 各组小鼠诸指标的相关性分析 本研究同时还对上述各指标进行了相关性分析，如图11，结果发现血清5-HT水平与血清IL-4、IL-17、TNF-α水平以及结肠指数具有相关性，差异具有统计学意义（P＜0.05）；其中与IL-17 水平（r=0.611 4，P=0.001 2）成正相关，与 IL-4水平（r=-0.730 5，P=0）、TNF-α 水平（r=-0.567 3，P=0.003 1）以及结肠指数（r=-0.429 5，P=0.032 2）成负相关。血清IL-10水平分别与胸腺指数、脾脏指数、结肠指数具有显著相关性（P＜0.01）；其中与胸腺指数（r=0.661 1，P=0.000 3）成正相关，与脾脏指数（r=-0.602 1，P=0.001 4）以及结肠指数（r=-0.643 1，P=0.000 5）成负相关。

图11 半夏泻心汤防治溃疡性结肠炎小鼠各指标的相关性Fig.11 Correlation each indicator in experimental of ulcerative colitis mice by Banxia Xiexin Decoction

结肠组织5-HT水平分别与结肠组织IL-4水平（r=-0.431 4，P=0.031 3）、TNF-α 水平（r=-0.850 3，P=7.39E-08）成显著负相关。结肠组织IL-10水平分别与结肠组织IL-4水平（r=-0.420 4，P=0.036 4）、结肠指数（r=-0.489 7，P=0.01 3）成显著负相关。结肠组织IL-17水平与胸腺指数（r=0.447 8，P=0.024 8）成负相关。

胸腺指数与脾脏指数（r=-0.690 1，P=0.000 1）及结肠指数（r=-0.456 4，P=0.021 8）成负相关。脾脏指数与结肠指数（r=0.436 5，P=0.029 1）成正相关。

4 讨论

半夏泻心汤原方用于治疗柴胡汤证误下之“心下痞”证及“呕而肠鸣”，其由小柴胡汤去柴胡、生姜加黄连三两、干姜一两而成，由原来治疗表里之枢病转变为治疗上下之枢病[16-17]。《黄帝内经》有云：“饮入于胃，游溢精气，上输于脾。脾气散精，上归于肺，通调水道，下输膀胱。”而UC患者脾气不升，无法将运化来的水谷精微布散全身，聚而为水湿，湿性重浊，下趋肠腑，郁久化热，血腐肉败而发病；其基本病机为脏（脾）气不升、腑（肠）气不降，实为中焦上下枢机之邪：在上为脾气虚，在下在肠蕴湿热。半夏泻心汤以“辛开苦降甘补”组方，方中甘温之参、草、枣可补脾益气，复中土之功；辛温为阳，主升主动，姜、夏助脾气升提布散；“六腑以通为用”，故芩、连之苦寒即可清热燥湿，消除肠中湿热，又可顺腑气。且方中半夏味辛性降，可辛散助开、降逆助合；开上泻下，为开上下枢机之要药。诸药相伍，补中益气，复脾升肠降，中焦上下枢机得通，病症自除。

“经方不传之秘在于量”“古方之妙，全在药量”。由此可见，历代医家对经方药物剂量的重视。经方的临床应用中，合理理解并应用各药物的剂量是平衡经方有效性及安全性的关键所在，亦是提高中医疗效的引发点。经典名方半夏泻心汤因方中含有有毒药物半夏，故其药物剂量的选用被历代医家所争论。研究在课题组前期研究的基础之上，保持全方各药物剂量比例不变，以半夏的古方用量及现代《药典》的日最大应用剂量为基准组方，分别干预DSS-UC模型小鼠，通过分析小鼠体质量、死亡率等一般状态，DAI指数、脏器指数等指标以及结肠局部病理损伤的差异以探究半夏泻心汤各组方防治UC的疗效差异。研究结果显示：DSS-UC小鼠可见精神萎靡、活动量减少、被毛蓬松等临床表现，体质量显著减轻、DAI指数、肝脏指数、脾脏指数、结肠指数、结总肠长度比、结总肠质量比显著升高，胸腺指数则显著低，结肠局部炎症反应严重，大量炎性细胞浸润。而经半夏泻心汤干预防治后上述指标出现不同程度的恢复，尤其是半夏泻心汤古方量组小鼠改善尤为明显。说明半夏泻心汤可防治因DSS诱导建模所致的小鼠局部组织及全身损伤，且古方量方疗效为佳，表明了经方原方组方的合理性。

同时本研究对半夏泻心汤治疗UC的作用机制进行初步探讨，结果表明，半夏泻心汤可以通过升高DSS-UC模型小鼠血清及结肠组织中IL-10、5-HT水平，降低血清及结肠组织中IL-4、TNF-α水平，改善IL-4/IL-10、IFN-γ/IL-4水平，进而改善DSS-UC小鼠肠道炎症反应，改善组织损伤情况，从而发挥治疗UC的治疗作用。

IL-4是由机体活化T细胞产生，具有多种生物学功能[18]。大量研究证实IL-4能抑制IL-1β和TNF-α的产生，同时降低活化单核巨噬细胞分泌氧自由基，具有显著的抑炎特征[19-20]。但亦有研究表明IL-4在UC中可发挥促炎作用，其可在UC患者体内显著升高，且其水平与UC疾病活动度成正相关[21-24]，此结果与本研究结果相一致。推测原因可能是：IL-4可诱导B细胞并刺激内皮细胞，分泌黏附因子及趋化性细胞因子，且IL-4是小鼠巨噬细胞趋化因子，其可以显著促进IL-1ra的产生，并抑制单核细胞产生IL-1、TNF和IL-6；此外IL-4可诱导单核细胞及嗜酸性粒细胞并刺激肥大细胞增殖参与炎症反应[23-24]。经半夏泻心汤干预后，DSS-UC模型小鼠结肠组织及血清IL-4水平显著降低，表明半夏泻心汤可以降低UC模型中促炎因子IL-4水平以发挥治疗作用。

IL-10是由Th2细胞产生的抗炎因子，是机体维持肠道免疫平衡的关键因子[25-26]。IL-10可以通过抑制抗原提呈和产生并抑制促炎趋化因子和细胞因子的产生，进而抵抗炎症引起的组织损伤，其水平降低是UC的重要表现之一[27-30]；同时有研究发现，敲除或抑制IL-10基因后，小鼠患UC的几率显著增加，对炎症性肠病表现出强敏感性[31-35]。本研究结果显示，DSS-UC模型小鼠血清及结肠组织中IL-10水平显著于正常对照组，且经半夏泻心汤干预后显著恢复；此表明IL-10在UC的免疫反应中起重要作用，且半夏泻心汤可以通过升高DSS-UC模型小鼠IL-10水平，从而抑制抗炎因子水平，改善肠道炎症，进而发挥治疗UC的作用。对各炎症因子进行相关性分析发现，抑炎因子IL-10水平与IL-4水平成负相关，此结果亦佐证了IL-4在UC中发挥促炎作用。

IL-17主要有免疫细胞Th17产生，此外巨噬细胞、树突状细胞、CD8+T细胞、嗜中性粒细胞、肥大细胞、上皮细胞和肿瘤细胞中也可产生少量IL-17；IL-17家族共有6个成员，分别为IL-17A、IL-17B、IL-17C、IL-17D、IL-17E（亦称为 IL-25）和 IL-17F。目前有关IL-17生物学功能的研究众多，但其具体的生物学功能尚无定论，不用研究的结果已有所差异。有研究显示IL-17可以与其他细胞因子协同，刺激中性粒细胞聚集、促进前列腺素E2表达，从而诱导并加重炎症反应，多种自身免疫病（如系统性红斑狼疮[36]、银屑病[37]、风湿性关节炎[38]等）均与其水平升高有关；同时亦有研究发现UC患者病变肠黏膜中的IL-17表达水平明显高于正常黏膜[39-43]，且选择性敲除或抑制IL-17基因可减轻UC的炎症反应[44]，上述研究表明IL-17在机体内为重要的促炎因子。但有研究发现在各类炎症性疾病中IL-17水平显著下降，并认为IL-17能加强上皮细胞的连接同时保护肠黏膜通透性，在UC中发挥抑炎效应[45-46]。本研究中已发现DSS-UC模型小鼠血清及组织中IL-17水平显著降低，且经半夏泻心汤干预后显著恢复，推测可能是由于IL-17在UC中发挥抑炎作用，半夏泻心汤可以升高抑炎因子IL-17的水平以发挥治疗UC的作用，但其具体机制仍需进一步的临床验证。

TNF-α、IFN-γ是经典的促炎因子。IFN-γ是可溶性二聚体细胞因子，是II型干扰素的唯一成员，亦是常见的促炎性细胞因子[47-48]。研究表明，IFN-γ在UC患者结肠组织及血清异常高表达，可参与UC的发生发展[49-51]。TNF-α、IFN-γ等炎症因子可刺激产生更多干扰素γ诱导蛋白10（IP10），并进一步导致免疫细胞聚集，加重炎症反应；同时可直接或间接损伤肠黏膜屏障以诱发UC[52]。研究结果显示，DSS-UC模型小鼠血清IFN-γ水平显著上升，与上述研究结果相一致；但结肠组织IFN-γ水平显著下降，与上述研究结果相悖，通过查阅文献，但未查询到相关资料，因此DSS-UC模型小鼠结肠组织IFN-γ水平下降的具体原因有待于进一步的探究。TNF-α主要由巨噬细胞、T细胞、B细胞等多种细胞产生，是调节免疫细胞的关键细胞因子，属于前促炎细胞因子，最早表达于炎症反应中，与炎症的严重程度相关[53-55]。其是目前公认的能够介导UC发病的细胞因子，可以促使其他各类促炎因子的释放，扩大炎症连锁反应，参与UC的炎症反应及免疫应答[56-58]。本研究结果显示，半夏泻心汤可以显著降低DSS-UC模型小鼠结肠组织及血清TNF-α水平。众多研究结果与本研究结果相似，表明半夏泻心汤可以抑制结肠组织及血清TNF-α水平，抑制肠道炎症反应，改善局部组织损伤，进而改善UC症状[5-6，59]。

5-HT主要由肠道中的嗜铬细胞和肠肌间神经丛合成，其可作为免疫调节因子作用于淋巴细胞、巨噬细胞和树突状细胞免疫细胞上的5-HT受体，调节免疫细胞功能，分泌IL-6、IFN-γ等细胞因子，介导炎症反应[60]；同时5-HT还作为重要的脑肠肽，在“脑肠轴”中发挥重要地位[61]；除此之外，5-HT还参与肝脏脂质代谢等众多生理过程[62]。研究表明，5-HT参与UC的发生与发展，但其在UC中发挥的生物学功能尚有歧义。有研究者发现UC患者结肠黏膜中5-HT生成量增加、5-HT的再摄取量减少，从而导致UC患者结肠黏膜中及血清中5-HT的有效含量升高[63-65]，且UC患者结肠黏膜24 h的5-HT释放量且与UC疾病活动度（Mayo评分）呈正相关性[64]。但亦有研究发现UC患者体内5-HT水平降低[66]，本研究结果与其一致，DSS-UC模型小鼠血清及组织中5-HT水平显著见底，而经半夏泻心汤干预后，其均有显著恢复。但此结果与课题组前期研究结果[6]不一致，推测其可能的原因是：5-HT水平可能随疾病的不同阶段或是不同的时期有关。但其具体机制仍需要进一步的实验探究以明确5-HT水平与UC的关系。

5 结论

半夏泻心汤可以通过升高DSS-UC模型小鼠血清及结肠组织中IL-10、5-HT水平，降低血清及结肠组织中IL-4、TNF-α水平进而改善DSS-UC小鼠肠道炎症反应，改善组织损伤情况，从而发挥治疗UC的治疗作用；且以古方量效果为佳。

6 展望

本研究基于免疫稳态、从炎症因子水平入手，通过检测不同剂量的半夏泻心汤对DSS-UC模型小鼠血清及结肠组织中炎症因子水平的影响，探究半夏泻心汤治疗UC的作用机制。基于实验结果，笔者对在UC疾病中生物学效应存在争议的炎症因子（如 IL-4、Il-17、5-HT）进行了科学合理的阐释，但本研究仅采用了2.5%DSS诱导的小鼠为动物模型，且未从多角度对相关因子进行动态监测。故后期计划采用多种动物模型及临床研究，采用多种方法检测UC发展及转归的不同时间点各相关炎症因子的动态变化，深入探究各炎症因子在UC疾病中的变化规律，以阐释UC的发病机制。