SLCO1B1、ApoE 基因多态性对瑞舒伐他汀治疗血脂异常超高危动脉粥样硬化性心血管疾病患者的影响

谢东德 周思婕 黄杰 陈冠群 黄泽棋 吴剑弟

(1佛山市第二人民医院检验科，广东 佛山 528000；2海南医学院热带医学与检验医学院；3佛山市第二人民医院心内科)

目前，心血管相关疾病逐渐成为世界上死亡率最高，且致残率最高的疾病。在心血管相关疾病的危险因素探究中发现，其危险因素已远远超过200种，其中血脂异常与心血管疾病密切相关，也导致了血脂水平异常的发病率增加〔1，2〕。研究报道，在中国人血清中总胆固醇(TC)水平和低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)水平显著低于西方国家人群，且在中老年人群中发生脂异常的概率依旧上升，可能是由于人们生活水平的逐渐提高，导致三高人群急速增加〔3，4〕。脂异常的预防显著差于高血压和糖尿病，脂异常防治的知晓率、治疗率、控制率均较低〔5〕。目前，脂异常是国民暴露率最高的心血管病危险因素，会引发超高危动脉粥样硬化性心血管疾病(ASCVD)，在超高危ASCVD治疗中，血脂管理尤为重要〔6〕。研究显示，降低LDL-C是治疗脂异常所致的超高危ASCVD的有效手段，而他汀类药物能够显著降低LDL-C〔7〕。他汀类药物中常用的且适宜ASCVD的药物包括瑞舒伐他汀。载脂蛋白(Apo)E是降低LDL-C等血脂水平的重要因素〔8〕，SLCO1B1与他汀类药物的毒副作用密切相关〔9〕。突变型基因会影响药物的疗效〔10〕。SLCO1B1和ApoE基因多态性与血脂水平及治疗疗效的影响暂不明确。本文旨在探讨SLCO1B1和ApoE 基因多态性对脂异常所致超高危ASCVD患者瑞舒伐他汀治疗的影响。

1 资料与方法

1.1一般资料 收集佛山市第二人民医院2020年6月至2021年6月收治的268例血脂异常的超高危ASCVD患者，年龄(64.37±3.44)岁；男148例，女120例；冠心病201例，高血压125例，糖尿病64例，体重指数(25.22±2.79)kg/m2。本研究经医院医学伦理委员会批准。所有入选患者行ApoE及SLCO1B1基因型检查，ApoE 基因型结果分为E2/B2、E2/B3、E3/E3、 E2/E4、 E3/E4和E4/EB4组，SLCO1B1 521T>C基因型结果分为TT、TC和CC组，SLCO1B1 388A>G基因型结果分为AA、AG和GG组。纳入标准：①符合超高危ASCVD患者的标准〔11〕；②发生过2次或以上严重ASCVD事件；③患者及其家属均签署知情同意书；④病历资料齐全。排除标准：①对本研究使用的药品过敏者；②肌病；③入院前14 d内已服用降脂药物者；④肝肾功能损害者；⑤患者并发恶性肿瘤，且预期寿命不足半年者。

1.2治疗方法 所有患者进行瑞舒伐他汀钙片治疗，药品的国药准字为HJ20160545，生产于阿斯利康药业(中国)有限公司，10 mg×7片，口服，1片/次，1次/d，治疗半年。

1.3基因检测 用PCR荧光探针法对患者SLCOIBl基因的388A>G、521T>C位点和ApoE基因的526C>T、388T>C位点的多态性进行检测。所有患者进行瑞舒伐他汀治疗，10 mg，1片/d，治疗半年。基因型检测：使用上海宏石医疗科技有限公司生产的全自动荧光定量PCR仪(型号：SLAN-96P)，上海莱枫生物科技有限公司生产的DNA提取试剂盒、武汉友芝医疗科技有限公司生产的SLCO1B1和ApoE基因检测试剂盒(PCR-荧光探针法)进行基因分型：①在Nunc 96孔深孔板中各加入20 μl蛋白酶K及 Mag Bind Particles；②转移200 μl血浆至深孔板中；③加入200 μl缓冲液AL至样品中，且贴上封口膜，1 000～1 400 r/min振荡混匀3 min。70℃水浴10 min；④短暂离心收集管壁的液滴，撕去封口膜；⑤加入400 μl缓冲液BD至样品中。1 000～1 200 r/min振荡混匀3 min；⑥转移至96孔磁力架吸附10 min;⑦加入600 μl缓冲液BW1至孔中，1 000～1 200 r/min振荡混匀2 min打散磁珠；转移至磁力架上吸附3 min，重复⑤和⑥1次；⑧加入600 μl 70%乙醇，1 000～1 200 r/min振荡混匀2 min打散磁珠，转移至磁力架上吸附3 min，重复⑧1次，37～100 μl预热至70℃洗脱缓冲液，1 000 r/min振荡混匀10 min，转移至磁力架上吸附3 min，把 DNA转移至新的96孔板中；⑨将DNA、弱阳性对照组、空白对照分别加入已装有4种 PCR液的反应管中，进行 PCR扩增；⑩反应结束后，根据扩增曲线，划定合适基线和荧光阈值，得出不同通道Ct值，进行结果判定。

1.4观察指标 检测治疗前后患者体内TC、三酰甘油(TG)、LDL-C、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)水平，血清肌酐(Cr)、谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)、肌酸激酶(CK)水平。统计研究期间患者肌痛发生情况。

1.5统计学方法 采用SPSS26.0软件进行Hardy-Weinberg遗传学平衡检测、t检验、F检验及χ2检验。

2 结 果

2.1超高危ASCVD患者的SLCO1B1基因频率 SLCO1B1基因型、等位基因频率符合Hardy-Weinberg 平衡定律(P>0.05)，表明本研究中超高危ASCVD患者具有群体代表性。见表1。

表1 超高危ASCVD患者的基因分布频率〔n(%),n=268〕

2.2SLCO1B1 521T>C各基因型携带者血脂水平及肝肾功能变化比较 治疗前，TC+CC组与TT组各指标差异无统计学意义(P>0.05)；治疗后，TC+CC组LDL-C水平显著低于TT组(P<0.05)，TC+CC组CK水平显著高于TT组(P<0.05)。见表2。

2.3SLCO1B1 388A>G各基因型携带者血脂及肝肾功能比较 治疗前后，AA、AG与GG组血脂及肝肾功能指标差异无统计学意义(P>0.05)。见表3。

2.4ApoE>G各基因型携带者血脂及肝肾功能比较 治疗前，e2、e3与e4组血脂及肝肾功能指标比较差异均无统计学意义(P>0.05)。治疗后，e2、e3与e4组LDL-C水平差异有统计学意义(P<0.05)。见表4。

2.5不同基因型组肌痛发生率比较 SLCO1B1 521T>C：TT、TC+CC组肌痛发生率分别为4.21%(8/190)、11.54%(9/78)，不同基因型患者肌痛发生率差异有统计学意义(χ2=4.998，P=0.025)。SLCO1B1 388A>G：AA、AG及GG肌痛发生率分别为12.5%(1/8)、6.0%(6/100)及6.3%(10/160)，不同基因型患者肌痛发生率差异无统计学意义(χ2=0.533，P=0.766)。ApoE>G：e2、e3及e4组肌痛发生率分别为4.2%(1/24)、7.5%(15/201)及2.4%(1/42)，不同基因型患者肌痛发生率差异无统计学意义(χ2=1.765，P=0.414)。

表2 治疗前后sLCO1B1 521T>C各基因型携带者血脂及肝肾功能比较

表3 治疗前后SLCO1B1 388A>G各基因型携带者组间血脂及肝肾功能比较

表4 治疗前后ApoE>G各基因型携带者组间血脂及肝肾功能比较

3 讨 论

超高危ASCVD是由多种原因引起，此类患者需要严格控制血脂〔12～14〕。保持血脂水平的正常能够有效降低脂异常的超高危ASCVD患者死亡率，提高治愈率。超高危ASCVD的治疗手段包括他汀类降脂药控制血脂。超高危ASCVD患者可使用瑞舒伐他汀降脂且疗效不错〔15〕。有报道显示〔16〕，SLCO1B1、ApoE 基因多态性可能会影响他汀类药物的降脂效果，且可能引发药物毒副作用。

ApoE 是一种多态性载脂蛋白，其部分存在于HDL中，ApoE是LDL和肝细胞CM残粒受体的配体，ApoE多态性能够决定机体的血脂水平〔17〕，且在动脉粥样硬化的发生发展中，也有ApoE的参与〔18〕。SLCO1B1能够转运他汀类药物。SLCO1B1通过从血液中将他汀类药物转运至肝脏进行代谢〔19〕。当SLCO1B1发生基因突变时，会损害其转运功能〔20〕。ApoE、SLCO1B1基因多态性会对瑞舒伐他汀的降脂疗效及安全性有一定影响〔21〕。本研究将所有患者进行ApoE、SLCO1B1基因多态性检测发现，ApoE等位基因分布中e3患者最多，E3/E3 最多，E4/E4最少。在SLCO1B1中521T>C位点基因型中TT 最多，CC最少；SLCO1B1中388A>G位点基因型中GG最多，AA最少，且ApoE、SLCO1B1基因型与基因频率符合Hardy-Weinberg 平衡定律。

本研究结果说明，SLCO1B1 388A>G中TC+CC基因型可能升高了瑞舒伐他汀的血药浓度，提高瑞舒伐他汀的降脂疗效。与王婧等〔22〕研究一致。

有研究显示，他汀类药物对ApoE基因e2等位基因携带者的降脂作用较强，在e4等位基因携带者中效果不佳〔23〕。且ApoE e4携带者与辛伐他汀疗效降低有关。本研究结果与上述结论一致。

他汀类降脂药中瑞舒伐他汀在临床上应用广泛，也具有良好疗效。其能够降低LDL-C水平并提高HDL-C水平，改善内皮功能，从而稳定斑块，但其可能引起肌痛等副作用〔24〕。本研究还提示，在瑞舒伐他汀使用中，应当注重SLCO1B1 521T>C基因型特别是CC基因型的检测。

综上，ApoE 基因中e2等位基因与E3/E3基因型有效降低脂异常所致的超高危ASCVD患者LDL-C水平，e4等位基因的ASCVD者服用瑞舒伐他汀的疗效欠佳，SLCO1B1 521T>C基因多态性会导致瑞舒伐他汀引起肌痛，SLCO1B1 521T>C中CC基因型会更加容易出现肌痛现象。瑞舒伐他汀治疗期间应当注重SLCO1B1、ApoE 基因多态性的检测。