HBV相关肝衰竭患者Th1/Th2型细胞因子变化及与预后的关系

刘艳丽，李 静，于 彬，李 瑾，柴 梅，李沧友

(沧州市第三医院 1.供应室;2.肝病科,河北 沧州061000)

乙型肝炎病毒(HBV)感染呈世界性流行，是目前世界范围内的主要公共卫生问题之一[1]。全球约有3.5亿慢性乙型肝炎病毒感染者，每年有100多万人死于HBV感染所致的肝衰竭、肝硬化和肝癌，严重危害大众身心健康，对患者造成痛苦，也对医疗资源造成极大消耗[2-3]。慢性乙型肝炎(CHB)的发病与细胞因子关系密切，而辅助性T细胞(Th)是分泌产生细胞因子的主要细胞之一，分为Th1和Th2两个亚群[4]。近年研究发现，Th1/Th2平衡是维持正常免疫功能所必需的，机体对HBV的免疫应答失衡是CHB及其重症化的重要发生机制之一，因而研究HBV感染时Th1/Th2状态对认识乙型肝炎重症化发病、发展、预后评估中的作用逐渐引起重视[5-6]。本研究探讨Th1/Th2细胞因子在预测HBV相关慢加急性肝衰竭(HBV-ACLF)患者短期预后的价值，现报道如下。

1 对象与方法

1.1 研究对象

采用回顾性分析法，病例纳入时间为2021年1月至2021年12月，共有69例HBV-ACLF患者入组本研究。纳入标准：①诊断符合2018年《肝衰竭诊治指南》[7]中ACLF诊断标准；CHB诊断参照2019年《慢性乙型肝炎防治指南》[8]，并通过 HBV 血清学检查、HBV DNA 定量、实验室指标等检查确诊；②年龄>18岁，有HBV感染史，首次发病；③意识、认识及精神正常；④自愿配合并签定知情同意书；⑤研究方案经我院医学伦理委员会批准同意。排除标准：①依从性差，不能配合研究者；②恶性肿瘤、合并免疫系统疾病或其他嗜肝病毒感染者；③脂肪肝或药物性肝炎；④严重肝、肾、心功能衰竭或其他严重原发性疾病者。HBV-ACLF组男41例，女28例，年龄26-65岁，平均年龄(48.14±6.35)岁；肝衰竭分型：早期36例，中期21例，晚期12例；既往病史：高血压53例，2型糖尿病45例，冠心病29例。CHB组70例，男43例，女27例，年龄24-66岁，平均年龄(49.03±6.18)岁；既往病史：高血压49例，2型糖尿病40例，冠心病24例。同期健康者70例，其中男40例，女30例，年龄24-65岁，平均年龄(49.11±6.22)岁。

1.2 HBV-ACLF组分期标准

早期：无顽固性的腹水，血肌酐水平正常，凝血酶原活动度(PTA)31%-40%；中期：PTA 21%-30%，无顽固性的腹水，血肌酐上升<正常范围的10%；晚期：PTA≤20%，有顽固性腹水、消化道出血，血肌酐>1.5 mg/dL。

1.3 HBV-ACLF组不同预后

根据患者 3 个月后的病情转归情况分组，其中病情好转出院或者病情得到稳定控制的患者分为生存组，病情恶化死亡的患者为死亡组。

1.4 方法

采集各组对象第2 d晨起空腹血样本5 ml，凝聚2 h后，将血液样本上离心机进行离心处理，转速为 3 500 r/min，时间15 min，完成后收集上层血清储存于-80℃ 的冷冻箱中准备检测。应用Roche cobas8000 原装配套试剂检测丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天门冬氨酸氨基转移酶(AST)、白蛋白(ALB)及总胆红素(TBiL)水平。采用电化学发光法记录乙肝表面抗原(HBeAg)阳性情况，定量 PCR 法检测血清 HBV DNA 定量水平；应用ELISA法检测Th1细胞因子[血清白细胞介素-2(IL-2)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、干扰素-γ(IFN-γ)]、Th2细胞因子[IL-4、IL-6、IL-10]水平进行比较，整个操作过程应实施无菌操作，严重按照试剂盒(雅酶生物技术有限公司)说明书中方法操作，确保检测质量。

1.5 统计学处理

2 结果

2.1 三组对象血清Th1/Th2型细胞因子水平比较

HBV-ACLF组患者血清IL-2、INF-γ、TNF-α、IL-6高于对照组及CHB组，IL-4、IL-10低于对照组及CHB组(P<0.05)，见表1、表2。

表1 三组对象血清Th1细胞因子水平比较

表2 三组对象血清Th2细胞因子水平比较

2.2 不同病情程度HBV-ACLF患者血清Th1/Th2型细胞因子水平比较

随着病情的加重，INF-γ、TNF-α、IL-6水平升高(P<0.05)，IL-4、IL-10水平下降(P<0.05)，IL-2水平无显著变化，见表3、表4。

表3 不同病情程度HBV-ACLF患者血清Th1型细胞因子水平比较

表4 不同病情程度HBV-ACLF患者血清Th2型细胞因子水平比较

2.3 不同预后HBV-ACLF患者血清Th1/Th2型细胞因子水平比较

生存组INF-γ、IL-6、TNF-α水平低于死亡组(P<0.05)，IL-4、IL-10水平高于死亡组(P<0.05)，IL-2水平无显著变化，见表5、表6。

表5 不同预后HBV-ACLF患者血清Th1型细胞因子水平比较

表6 不同预后HBV-ACLF患者血清Th2型细胞因子水平比较

2.4 血清Th1/Th2型细胞因子和HBV-ACLF患者预后的Logistic回归分析

将血清 INF-γ、TNF-α、IL-4、IL-6、IL-10作为自变量，将是否死亡作为因变量，经过 Logistic 回归分析显示，血清INF-、TNF-α、IL-4、IL-6、IL-10水平是影响HBV-ACLF患者预后的独立危险因素(P<0.05)，见表7。

表7 血清Th1/Th2型细胞因子和HBV-ACLF患者预后的Logistic回归分析

3 讨论

据统计，亚洲国家中约 70%以的ACLF病人是由HBV感染所诱发，寻找一种有效评估ACLF病人病情与预后的可靠指标在挽救患者生命，改善预后方面发挥极重要作用[9-10]。HBV-ACLF的诱发因素较多，发病机制复杂，其中细胞因子参与ACLF的发生与发展。

近年来，Th1/Th2细胞因子动态变化在乙肝肝衰竭病情发展中的作用逐渐引起重视[11,12]。Th1细胞主要包括IFN-γ、TNF-α和IL-2等因子，主要参与机体细胞免疫反应与迟发性超敏反应。IFN-γ是可以有效反映Th1细胞功能的因子，其不仅参与病原体的清除，还可以募集下游的免疫活性细胞参与机体的免疫反应。IFN-γ除了在CHB中可以促进下游免疫效应细胞的增殖，刺激细胞活化外，还在ACLF发病中发挥免疫扩大效应[13]。IL-2是重要的免疫增强因子，能够激活T细胞，刺激 T细胞增殖，IL-2水平在一定程度上反映了细胞的免疫功能状态[14]。TNF-α是典型的炎症反应因子，是诱导肝细胞坏死的最直接因子[15]。Th2细胞主要分泌IL-4、IL-6、IL-10，能够辅助B细胞分化为抗体分泌细胞，抑制Th1 型细胞因子的产生，并介导体液免疫。Th2免疫占优势时，可以导致病毒感染的慢性化。

本研究显示，HBV-ACLF组患者血清IL-2、INF-γ、TNF-α高于对照组及CHB组(P<0.05)，且随着病情的加重，INF-γ、IL-6水平升高，IL-4、IL-10水平下降。同时生存组INF-γ、IL-6、TNF-α水平低于死亡组，IL-4、IL-10水平高于死亡组。且血清INF-γ、TNF-α、IL-4、IL-6、IL-10水平是影响HBV-ACLF患者预后的独立危险因素(P<0.05)，显示出Th1/Th2细胞因子动态变化在HBV-ACLF患者的发生和发展过程中均具有重要作用，通过分析是由于有以下原因：和CHB与健康对照组对比，HBV-ACLF存在着肝脏损伤现象，肝细胞处在严重的炎症反应与应激反应的状态下，进而细胞因子被大量释放，肝细胞受损程度加重，阻断肝细胞再生，形成恶性循环，且在病情较重及死亡的患者中，肝细胞损害程度和肝脏组织会发生重构及纤维化，细胞核与线粒体的正常生理功能受到严重伤害，这一过程也进一步刺激了细胞因子的表达[17-18]。这此本研究认为，通过了解HBV-ACLF患者基线Th1/Th2细胞因子的水平有助于判断ACLF病人的短期预后，在今后的临床中，也可考虑动态监测Th1/Th2细胞因子的表达来判断预后，尤其是监测血清INF-γ、TNF-α、IL-4、IL-6、IL-10水平变化在指导临床用药上也具有积极意义。但本研究尚存在一定的不足，仅观察了基线血清INF-γ、TNF-α、IL-4、IL-6、IL-10水平的表达，未详细探讨其在对 HBV-ACLF诊断中的应用价值，且样本量偏少，未来也需进一步深入研究。