复方依折麦布瑞舒伐他汀钙片质量研究进展

张玲，张锐武，奚兴苹，李金虹，陈彤，张伟

（1.昆明医科大学药学院暨云南省天然药物药理重点实验室，云南昆明 650500；2.云南龙津康佑生物医药有限公司，云南昆明 650503；3.昆明龙津药业股份有限公司，云南昆明 650503）

随着人们生活水平不断提高，不良饮食习惯、不合理作息等因素使高脂血症的发病率逐年递增[1]，严重威胁人类生命健康。因此，对高脂血症的预防、控制和治疗尤显重要。瑞舒伐他汀钙（Rosuvastatin calcium，ROS）和依折麦布（Ezetimibe，EZT）是临床上常用于治疗高脂血症的两种药物，瑞舒伐他汀钙通过抑制羟甲基戊二酰辅酶A（HMG-CoA）还原酶来减少内源性胆固醇的合成，但它有剂量依赖性，在使用剂量增加时会伴随不良反应增多[2-3]；依折麦布是一种胆固醇吸收抑制剂，可减少外源性胆固醇吸收[4]。将依折麦布与瑞舒伐他汀钙联用，可在减少内源性、外源性胆固醇吸收，同时有效降低缺血性心脏病和急性冠脉综合征病史患者发生心血管事件的风险，有增效减毒的优势[5-6]。

复方依折麦布瑞舒伐他汀钙片是一种固定剂量单片复方制剂，目前规格共有4种：依折麦布/瑞舒伐他汀钙：10 mg/5 mg、10 mg/10 mg、10 mg/20 mg、10 mg/40 mg[7]。药品质量与临床疗效息息相关，对其质量进行全面研究，使药物安全、可靠、质量可控具有重要意义。据调研，对复方依折麦布瑞舒伐他汀钙片的质量研究较少，有高效液相色谱法用于复方制剂的含量测定的文献报道[8]，但鉴别、检查（如溶出度、含量均匀度、有关物质）等方面的相关研究报道甚少。此外，目前各国药典均未收载复方依折麦布瑞舒伐他汀钙片的质量标准，也未查询到其进口注册标准，只收载了单方片剂标准。依折麦布片在《美国药典》（USP43）[9]有收载，瑞舒伐他汀钙片在《美国药典》（USP43）[9]、《英国药典》（BP2020）[10]、《欧洲药典》（EP10.3）[11]有收载。现有的单方片剂质量标准和前人已做过的相关研究可为复方依折麦布瑞舒伐他汀钙片质量标准研究提供一定的参考依据。为了开展复方依折麦布瑞舒伐他汀钙片质量研究，本文查阅并总结了依折麦布、瑞舒伐他汀钙原料药的基本信息（表1）以及近年来国内外有关复方依折麦布瑞舒伐他汀钙片质量研究的文献（包括含量测定、溶出度测定、有关物质检测等），以期为复方依折麦布瑞舒伐他汀钙片的质量研究提供参考。

表1 原料药基本信息Table 1 Basic information of API

1 鉴别

药物鉴别是药品质量检验工作中的首项任务，只有在药物鉴别无误的情况下，进行药物的检查、含量测定等分析才有意义[18]71。目前暂未查询到相关文献和药典中记载复方依折麦布瑞舒伐他汀钙片的鉴别方法，只有依折麦布片在《美国药典》（USP43）[9]，瑞舒伐他汀钙片在《美国药典》（USP43）[9]、《英国药典》（BP2020）[10]、《欧洲药典》（EP10.3）[11]中收载了其鉴别方法：均采用高效液相色谱法，在含量测定项下记录的色谱图中，供试品溶液主峰保留时间应与对照品溶液相应的主峰保留时间一致[9]。采用高效液相色谱法鉴别，其专属性强、灵敏度高，复方制剂鉴别可参考单方制剂的鉴别方法。此外，在药物鉴别时，紫外-可见分光光度法简便易行，准确度高，使用广泛[18]76-77，也可采用此方法鉴别复方依折麦布瑞舒伐他汀钙片。在波长为200～400 nm 范围内，供试品溶液与对照品溶液的最大吸收波长与最小吸收波长应一致[19]。

2 含量测定

国内外研究者针对依折麦布、瑞舒伐他汀钙的含量测定已做大量工作。文献显示，主要有紫外-可见分光光度法（UV）、高效液相色谱法（HPLC）应用于单方依折麦布片、瑞舒伐他汀钙片的含量测定[20-23]，但同时测定复方制剂中依折麦布和瑞舒伐他汀钙含量的报道尚少。据文献显示，主要有HPLC法[8]，因其专属性强、灵敏度高、准确可重复等特点，被广泛应用于该制剂的含量测定。现对文献中高效液相色谱检测方法总结分析，见表2。

从表2 可知，各文献均采用同一种方法同时测定复方制剂中的两种主成分，方法中色谱柱柱温对该分析方法无影响；洗脱方式均采用等度洗脱；流速方面，除文献[29]采用1.5 mL/min 的较大流速外，其余流速均在0.8～1.0 mL/min 范围内，若在满足分离度要求的情况下可适当降低流速，以减少流动相的消耗量，节约物力和人力成本；在检测波长的选择方面，依折麦布和瑞舒伐他汀钙分别在232 nm[30]、242 nm[31]波长处有很强的紫外吸收，文献中检测波长通常设置在230～254 nm之间。

在进行含量测定研究时选择合适的色谱柱也十分关键。各文献使用的色谱柱填料均为C18，但型号不同。文献[26]采用Sunfire BDS C18柱，此色谱柱采用新型的键合和端基封尾技术，极大地提高了酸、碱、中性化合物在低pH条件下的分离度，与普通色谱柱相比其柱效更高，稳定性更好。另外色谱柱长度、粒径大小等都会对结果产生影响，如文献[24]使用的色谱柱粒径相对较小，色谱峰的分离度相对更高。

对于流动相的选择，流动相比例组成非常关键，有机相的比例决定洗脱强度。各文献使用的流动相都为水相加有机相，所用的有机相是甲醇或乙腈。文献[25]中报道，最初使用的流动相是乙酸钠-乙腈（60∶40），但瑞舒伐他汀钙在9.775 min出现宽峰，研究者不断调整流动相比例，使有机相（乙腈）的比例从40%提高到70%，最终选择乙酸钠-乙腈（30∶70）作为流动相，可在改变峰形的同时缩短出峰时间，仅需5 min 的运行时间，极大提高了检测效率。流动相pH值也是关键因素，当被分离的化合物在反相色谱系统中容易解离时，会导致峰形难看或拖尾，这时需调节流动相pH 值来改善[26]，表中各文献研究都将流动相pH值调至弱酸性，抑制样品组分解离，增加组分在固定相的保留，改善峰形，使化合物更好分离。

综上，表2 各文献中测定方法系统适用性均符合要求，两主峰之间的分离度均大于1.5，分离效果良好，方法学验证结果显示其线性、重现性、准确度、专属性以及回收率等均符合要求，均适用于同时测定复方依折麦布瑞舒伐他汀钙片的含量测定，但不同研究报道中色谱峰的出峰时间、色谱峰峰形以及分离度等有一定的差异，如何优化色谱条件以满足现行版《中国药典》有关HPLC 含量测定方法学验证各项要求，特别是专属性试验要求，仍需进一步的研究与开发。

表2 各文献含量测定色谱条件及分离度结果Table 2 Chromatographic conditions and separation results of content determination in each literature

3 含量均匀度测定

目前国内外暂无文献报道，在外国药典中收载的单方制剂中，含量均匀度测定方法、方法验证同含量测定方法[9]，此复方制剂含量均匀度测定可参考其复方制剂的含量测定方法。

4 溶出度测定

溶出度试验是评价和控制药品质量的重要指标之一[32]。目前，国内外对复方依折麦布瑞舒伐他汀钙片的溶出度测定尚无文献报道，因此本文主要根据现有文献中依折麦布片和瑞舒伐他汀钙片的溶出度测定方法来进行分析和总结，见表3。

表3 各文献溶出度测定方法Table 3 Dissolution determination methods of various documents

目前瑞舒伐他汀钙片溶出度测定以桨法为主，有少部分采用篮法。文献[33]采用的是篮法，30 min 后取样，结果显示溶出均一性良好，但此方法转速较高。值得一提的是，瑞舒伐他汀钙在酸性条件下不稳定，会影响瑞舒伐他汀钙溶出度的准确测定[37]。所以文献[34]中研究者为确保pH 值平衡，在HPLC 法进行检测时，用乙酸对流动相进行调节，使pH 值控制在3.5，样品溶出度可达97%以上，释药快速，符合规定。在溶出介质的选择方面，研究者们在进行溶出实验之前，分别对pH=1.2 盐酸溶液、pH=4.5 乙酸盐缓冲液、pH=6.6 枸橼酸缓冲液或磷酸盐缓冲液和水4 种溶出介质进行考察比较，结果显示在这4种条件下药物溶出度都符合要求，在pH=4.5 乙酸盐缓冲液、pH=6.6 枸橼酸缓冲液或磷酸缓冲液、水中较稳定，但在pH=1.2 盐酸溶液中瑞舒伐他汀不稳定，会生成3 种降解产物，分别为瑞舒伐他汀非对映异构体，瑞舒伐他汀-5S-内酯，瑞舒伐他汀-5R-内酯，影响瑞舒伐他汀钙溶出度的准确测定[38]。

国内外对依折麦布片溶出度测定研究较少，尚未见详细报道。国家药品食品监督管理局进口药品注册标准（JX20070201）[36]、USP43 法1 和法2[9]都采用桨法测定依折麦布片溶出度，均使用50 r/min 的转速、用UV法测定，溶出介质略有不同。

由于尚未见文献报道依折麦布瑞舒伐他汀钙片复方制剂的溶出度测定，所以综合以上单方制剂的文献报道提出该复方制剂溶出度研究的思考：

（1）溶出方法：本品为片剂，故首选桨法。

（2）溶出介质：依折麦布片生物药剂学分类（BCS）为Ⅱ类，难溶于水；瑞舒伐他汀钙片BCS 分类为Ⅲ类[10]，溶解性比依折麦布片好，所以溶出介质的筛选主要参考依折麦布片溶出方法进行筛选，在此基础上进行方法摸索调整。

（3）转速：文献结果表明，100、75、50 r/min 3 个转速都能满足要求，且溶出均一性都很好，基于桨法50 r/min 试验条件温和，故建议选择50 r/min 作为转速的控制条件。

（4）检测方法：据文献报道，UV 法、HPLC 法均可用于检测两种药物单方制剂的溶出度，但本品为复方制剂，需综合考虑各因素，兼顾两者。瑞舒伐他汀钙片不稳定，在酸性条件下易降解，实验过程中需考虑检测及时性、是否能准确定量测定等问题。HPLC较UV 法更加专属，故建议首选HPLC 法作为该复方制剂溶出度定量测定方法。

5 有关物质研究

有关物质是否得到合理、有效控制，直接影响药品质量的有效性和安全性[18]95。复方依折麦布瑞舒伐他汀钙片中有关物质数量多且复杂，如有脱氟依折麦布、间氟依折麦布、瑞舒伐他汀酮等工艺杂质，亦有依折麦布四氢呋喃类似物、瑞舒伐他汀内酯、瑞舒伐他汀脱氢类似物等降解杂质[37]，归属和分离此复方制剂中的相关杂质具有很大挑战，因此建立一种有效且分离度好的分析方法来检测此复方制剂中的有关物质极为关键。

朱雪萍等[39]采用HPLC 检测复方依折麦布瑞舒伐他汀钙片的有关物质，采用Kromasil 100-5 C18Di‐mensions 柱（150 mm×4.6 mm，5 μm），以0.05 mol/L 磷酸二氢钾（pH 4.0）-乙腈-甲醇（60:30:10）为流动相A，以0.05 mol/L 磷酸二氢钾（pH 4.0）-乙腈-四氢呋喃（40:50:10）为流动相B，进行梯度洗脱，在242 nm 波长处进行分析检测。结果显示系统适用性符合要求，依折麦布、瑞舒伐他汀钙及各杂质间分离度符合要求。经方法学验证，该方法灵敏度高、专属性强、操作简便，适用于检查复方依折麦布瑞舒伐他汀钙片中的有关物质。鉴于文献中的流动相体系大多较为复杂，配制方法繁琐，苏梅等[40]使用的流动相相对简单，而且使用的色谱柱也较为特别。他们以甲醇-水-三氟乙酸作为流动相A，以含三氟乙酸的乙腈作为流动相B，使用HORIZON Aurashell C18/PFP 色谱柱（150 mm×4.6 mm，2.7 μm）进行梯度洗脱，其特别之处在于选用的检测波长：0～5 min 时在215 nm 波长处进行分析检测；5～90 min 时在242 nm 波长处进行分析检测。同时检测出了依折麦布瑞舒伐他汀片中的23 种已知杂质，各杂质与两主峰之间的分离度均大于1.5；主峰与各杂质峰峰纯度均为1.0。此检测方法专属性强，分离度高，准确度好，检测效率高。

综上，在本复方制剂的有关物质研究中，由于该制剂有关物质比较多，难以分离，等度洗脱的方式已不能满足要求，需要采用梯度洗脱；色谱柱须使用一些特殊的、分离能力强的C8或C18柱；流动相的选择在有关物质方法开发中极其重要，大多方法中流动相体系都较为复杂，配制繁琐，今后研究可以此为切入点，摸索出分离度好、操作简便的流动相体系。复方依折麦布瑞舒伐他汀钙片的有关物质研究是质量研究中的重点也是难点，但国内外研究报道还比较少，在此方面还需要不断深入研究，以保证药品安全、有效、质量可控。

6 结语

药物的质量研究是贯穿于药品整个生命周期包括研发、生产、储存等过程的一个重要方面，它直接关系到药物的安全性和有效性[18]3。复方依折麦布瑞舒伐他汀钙片质量控制方面还存在问题，如相关研究报道少、质量研究资料不全面、大部分研究仍为单方的依折麦布片或瑞舒伐他汀钙片，对于复方制剂研究甚少。药物的质量研究是一个系统工程，本品之所以暂时没有收载进各国药典，原因是多方面的，复方制剂的质量标准绝非简单由两个单方化药的质量检查项目叠加而成，需要同时兼顾两个主成分，还有一些需要综合考虑的因素，如需要考虑两主成分之间是否会相互干扰、两主成分的溶出情况是否一致、在有关物质研究时复方制剂会带来更多潜在杂质等，极具挑战。但相信随着科学研究技术的不断发展，对本复方制剂研究的不断深入，将会带动其质量研究从初级研究层次向更深层次迈进，多学科的交叉融合、新技术的出现也将为本复方制剂的质量研究带来新思路。