火针疗法对白癜风抗氧化应激能力的作用、皮损面积改善及外周血miR-202-3p、miR-630和nesfatin-1表达的影响

邱洞仙，边 莉，柴旭亚，师小萌，李领娥，吴 娅

(石家庄市中医院,河北 石家庄 050051)

白癜风为一类常见的皮肤疾病，临床症状主要表现为皮肤局部呈斑块状色素淡退、发白且边缘界限清晰，是一类色素脱失性疾病，而发病部位主要集中在手背、前臂与面颈部等肢体暴露处，且以原本肤色较深的患者发病居多，患病后通常无明显瘙痒、疼痛症状，但随着病程延长，患者容貌、肢体渐渐暴露白斑，对患者的日常社交生活和心理造成了不利影响[1]。西医研究认为[2]白癜风的发病与遗传、免疫、环境以及氧化应激等因素有关，临床上常通过口服激素、外用钙调磷酸酶抑制剂类药物以及光疗法进行治疗，但以上治疗方案都存在一定的治疗局限性，如口服激素类药物易伴发不良反应，钙调磷酸酶抑制剂类药物价格昂贵，激光疗法疗效较安全，但疗程较长，因此寻找疗效温和、有效的治疗方案对于改善白癜风患者病情、提高患者生活水平具有重要意义。中医对皮肤疾病有丰富的治疗经验，中医认为白癜风的发生与内外因有关，内在因素在于气本虚，气血津液生化不足，外在因素在于外感风寒湿邪，内外因共同作用导致气血运行不畅，气机壅滞，肌肤毛窍失于濡养而见白斑。火针疗法对于调节气血有较好的疗效，本研究探讨了火针疗法对白癜风抗氧化应激能力的作用和皮损面积改善及外周血miR-202-3p、miR-630与nesfatin-1表达的影响，现将结果汇报如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料

选择100例白癜风患者纳入本治疗，病例选择样本为2019年10月—2020年10月于本院门诊治疗的患者。将100例白癜风患者分为对照组和研究组，分组方法采用随机数字表法。研究组共50例，男性患者30例，女性患者20例，平均年龄(33.42±5.32)岁，平均病程(2.37±0.68)年；病情分期中稳定期30例，进展期13例，快速进展期7例；皮损分布部位中面颈部12例。躯干部22例，四肢部10例，手足部6例；皮疹分布类型中局限型14例，散在型24例，泛发型12例；对照组共50例，男性患者29例，女性患者21例，平均年龄(33.33±5.21)岁，平均病程(2.54±0.73)年；病情分期中稳定期28例，进展期14例，快速进展期8例；皮损分布部位中面颈部14例，躯干部20例，四肢部11例，手足部5例；皮疹分布类型中局限型15例，散在型24例，泛发型11例。经统计学检验证实两组患者性别、年龄、病程、病情分期、皮损分布部位与皮疹分布类型等一般资料比较无统计学意义(P>0.05)，具有可比性。本院医学伦理委员会已审查通过本研究。

1.2 诊断标准

1.2.1 西医诊断标准 参考《中国临床皮肤病学》[3]白癜风诊断标准：①面部、颈部、手臂前侧和手背等暴露或易发生摩擦的部位皮肤颜色减退发白，形状大小有区别，发白区域边缘带加深明显;②发白区域可有轻微瘙痒感，无萎缩或脱屑症状。

1.2.2 中医诊断标准 参考《现代中医皮肤病学》[4]白癜风“气机壅滞”证辨证要点：皮损初起突发，或精神受到刺激后出现，斑色乳白，大小不等，形状不一;兼风邪者白斑可充血发红，瘙痒;逐渐扩散，边缘模糊不清，可伴烦躁失眠，胸胁闷胀，口干溲赤，舌淡红，脉弦细。

1.3 纳入标准

①符合以上诊断标准，且中医辨证类型为气机壅滞证的白癜风患者；②近期无免疫抑制剂、糖皮质激素等药物用药史的患者；③皮损面积不超过全身体表面积10%的患者；④无精神障碍性疾病的患者；⑤签署知情同意书的患者。

1.4 排除标准

①合并严重器官性疾病、内分泌障碍、血液系统疾病和恶性肿瘤等疾病的患者；②患者为妊娠期或哺乳期妇女；③局部皮肤红肿、破损或有感染，不适宜行火针治疗的患者；④患有日光性皮肤病的患者；⑤患病部位特殊，如眼部、外阴部，不适宜行研究相关治疗的患者。

1.5 治疗方法

1.5.1 对照组 患者行308 nm准分子激光治疗，仪器购自美国photoMedex公司制造的新一代威峰VTRACTM紫外线准分子照射系统，选择面颈部、躯干部、四肢部与手足部同一部位皮损至少2片的部位进行激光照射治疗，根据患者最小红斑确定照射初始剂量，照射时距离皮肤1.5 cm，每周治疗2次，间隔时间在72 h以上，连续治疗8周。

1.5.2 研究组 在激光治疗的基础上行火针治疗。针具选择华佗牌一次性无菌针灸针，购自苏州医疗用品厂有限公司，规格0.3 mm×25 mm。取患者舒适体位，对皮损区域和针具进行消毒，左手持夹有酒精棉球的止血钳，右手持针，将针尖于酒精灯上加热至烧红并发白，快速点刺皮损处皮肤，深度约0.5～1 mm，由皮肤外缘向中心均匀点刺，点刺间距为3～5 mm，皮肤出现潮红为佳，点刺结束后，采用75%乙醇进行皮肤及针灸针消毒，每周治疗2次，连续治疗8周。

1.6 观察指标

1.6.1 摄食抑制因子 采集两组患者治疗前和疗程结束后空腹肘静脉血并行血清分离，转速设置3 000 r/min，离心时间10 min，-80 ℃低温保存送检。采用ELISA法测定血清摄食抑制因子(nesfatin-1)含量，试剂盒均购自上海江莱生物科技有限公司。

1.6.2 miRNA-202-3p和miRNA-630 采集两组患者治疗前和疗程结束后空腹外周静脉血，采用荧光定量实时聚合酶链式反应提取miRNA，试剂盒选择miRNeasy Mini Kit TRIzol纯化试剂盒(德国Qiagen公司)，采用LightCycler 480实时PCR仪器测定miRNA-202-3p和miRNA-630表达水平。

1.6.3 皮损面积、靶皮损部位复色率和起效时间 采用格子计数法检测两组患者治疗前和疗程结束后的皮损面积、靶皮损部位复色率和起效时间，其中皮损面积采用带有0.01 cm2小方格透明纸覆于皮损部位，于方格纸上描绘皮损部位并计数皮损面积[5]。

1.6.4 活性氧 采用流式细胞仪测定两组患者治疗前和疗程结束后细胞内活性氧(ROS)水平。

1.7 临床疗效评价标准

参考中国中西医结合学会皮肤性病专业委员会色素病学组发布的《黄褐斑和白癜风的诊疗标准(2010年版)》[6]白癜风疗效评定标准判定疗效。①痊愈:白斑全部消退，恢复正常肤色；②显效:白斑部分消退或缩小，恢复正常肤色面积占皮损面积≥50%；③好转:白斑部分消退或缩小，恢复正常肤色面积占皮损面积≥10%且<50%；④无效:白斑无色素再生或范围扩大。治疗总有效率=(痊愈+显效+好转)例数/总例数×100%。

1.8 统计学处理

2 结果

2.1 两组患者临床疗效比较

研究组治疗总有效率(96.00%)明显高于对照组(74.00%)，差异有统计学意义(P<0.05)。见表1。

表1 两组患者临床疗效比较 [例(%)]

2.2 两组患者治疗前后皮损面积等变化比较

两组患者治疗前皮损面积比较,差异无统计学意义(P>0.05)，疗程结束后两组皮损面积均小于治疗前(P<0.05)，研究组皮损面积明显小于对照组(P<0.05);治疗后研究组靶皮损部位复色率明显高于对照组(P<0.05);治疗后研究组靶皮损部位起效时间明显小于对照组，差异有统计学意义(P<0.05)。见表2。

2.3 两组患者治疗前后miRNA表达水平比较

治疗前两组患者miRNA-202-3p和miRNA-630表达水平差异无统计学意义(P>0.05)，疗程结束后两组患者比较miRNA-202-3p和miRNA-630表达水平均高于治疗前，差异有统计学意义(P<0.05)，研究组miRNA-202-3p和miRNA-630表达水平均明显高于对照组，差异有统计学意义(P<0.05)。见表3和图1～2。

图1 miRNA-202-3p溶解曲线

图2 miRNA-630溶解曲线

2.4 两组患者治疗前后血清nesfatin-1水平比较

两组患者治疗前血清nesfatin-1水平比较差异无统计学意义(P>0.05)，疗程结束后两组患者血清nesfatin-1水平明显低于治疗前(P<0.05)，研究组血清nesfatin-1水平明显低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。见表4。

表4 两组患者治疗前后血清nesfation-1水平比较

2.5 两组患者治疗前后ROS水平比较

两组患者治疗前细胞内ROS水平比较差异无统计学意义(P>0.05)，疗程结束后两组患者细胞内ROS水平明显低于治疗前(P<0.05)，研究组细胞内ROS水平明显低于对照组，差异有统计学意义(P<0.05)。见表5。

表5 两组患者治疗前后ROS水平比较

3 讨论

白癜风是临床常见泛发性、局限性色素脱失性皮肤病，现代医学研究表明，氧化应激学说可能是导致白癜风发病的机制之一，氧化应激平衡是人体最重要的自稳机制之一，氧化应激失衡后，多余的氧化应激产物会抑制细胞黑素合成酶功能、干扰表皮细胞生物蝶呤代谢和对黑素细胞产生直接毒性作用，从而破坏或损伤黑素细胞，感染黑素细胞，加速其代谢，甚至使其死亡一方面损伤黑素细胞，另一方面可损伤细胞器和细胞膜表面蛋白结构及功能，隐秘肽段发生暴露，从而使其释放隐蔽抗原或产生新抗原，打破原有免疫平衡，诱发免疫反应损伤[7]。临床上对于白癜风的治疗方法包括糖皮质激素、免疫调节剂、光化学疗法以及308 nm准分子治疗等，其中糖皮质激素类药物可快速稳定病情，但停药后易复发，且有引起痤疮、体重增加和多毛等副反应的风险[8]；他克莫司等免疫调节剂类药物可通过抑制白介素以及干扰素等炎性相关细胞因子的表达调节自身免疫效应[9]；光化学疗法可刺激黑素细胞增殖和分化，但大量的光疗可能诱导DNA变异，也有研究[10]表明，在光疗的基础上联合热处理可显著缓解光疗带来的损伤。308 nm准分子治疗可通过紫外线照射病变皮肤，调节机体代谢，激活黑素细胞，促进黑素细胞合成及迁移，从而治疗疾病，具有安全性高、方向性好和高效等特点，但其治疗单一，疗效不甚理想，需给予更加有效的治疗措施[11]。

中医对白癜风有悠久的治疗历史，白癜风在中医中无此病名，根据患者临床症状和体征可将其归属于“白驳风”“白处”等范畴。《肘后备急方》中曾记载本病“治面颈忽生白驳，状如癣”，《诸病源候论》提到:“白癜者，面及颈部身体肉色变白，与肉色不同，亦不痒痛，谓之白癜”，均描述了本病的发病特征。中医认为，气行则血行，气滞则血瘀，皮肤聚集经络循环部位，气血需经过经络濡养固护全身肌表，而情志不畅、肝气郁结均可导致气血不和，腠理经络瘀滞，导致肌肤失养，发为白斑。反之血瘀形成，加重气滞，有碍血脉运行，影响新血生成，故行气活血是治疗本病的重点和关键。火针古称“焠刺”“烧针”，是将针体前部及针尖烧红后快速刺入患病部位或特定穴位以达到治疗疾病的目的。《针灸聚英》中曾记载火针“惟借火力，无补泄虚实之害”，具有行气之功，“若风寒湿之气在于经络不出者，宜用火针”以及“凡癥块积结之病，甚宜火针”等记载，揭示了火针有行气活血、疏经通络和消癥散结等多种疗效[12]。中医认为，将针体烧红后快速刺入皮损部位可增强针刺的温热作用，借温热之力扩张局部血管并促进血液循环，从而发挥疗效。现代医学研究[13]表明，热应激反应可提高酪氨酸酶活性并促进黑素合成。张瑾等[14]在对抗酪氨酸酶抗体和抗酪氨酸酶相关蛋白-1抗体与白癜风疾病发展进程的研究中发现，酪氨酸酶与皮肤黑素合成具有密切联系，可能是引起白癜风患者自身免疫作用的重要抗原，且其活性与黑素合成量呈依赖相关性；宋文婷等[15]研究表明，以42℃对皮肤进行热处理后发现，热处理可协同增强黑素细胞的酪氨酸酶活性，同时处于G期的黑素细胞数量降低而S期、G2细胞增加，具有黑素合成以及促进细胞增殖分化的作用；李昌勤等[16]对白芷采用不同加热处理的研究中发现，加热处理可激活酪氨酸酶活性。因此,可推测火针对于白癜风的疗效机制之一可能与热效应作用下的酪氨酸酶活性增加以及黑素细胞合成增多有关。胡文治等[17]研究报道，黑素细胞采用热处理后检测超氧化物歧化酶活性以及细胞内活性氧、细胞凋亡率发现，热处理可显著降低UVB诱导的细胞凋亡，同时降低活性氧含量，恢复超氧化物歧化酶活性，提示了热处理对于黑素细胞的氧化应激损伤具有保护作用。因此，可推测火针治疗带来的热刺激一方面具有抗氧化作用，另一方面由于热处理可促进角质形成细胞的蛋白酶活性增加，并拮抗衰老引起的角质形成细胞分化功能下降，二者共同作用，增强了黑素细胞的合成，继而发挥了治疗白癜风的疗效。

本研究结果表明，研究组治疗总有效率(96.00%)明显高于对照组(74.00%)，疗程结束后研究组皮损面积明显小于对照组，复色率高于对照组且起效时间小于对照组，说明火针疗法有助于减少白癜风皮损面积并提高疗效。有研究表明，白癜风的发病过程与机体自身免疫反应有关。miRNA是小型非编码RNA分子，转录后可通过降解等过程调控多种基因的表达，其中miRNA-202-3p与免疫功能和癌症发病具有相关性。尚智伟[18]研究发现，miRNA-202-3p在白癜风患者皮肤组织以及血液中检测含量有显著的升高，并在人黑素细胞株中通过基因重组技术发现了miRNA-202-3p的过表达可显著抑制细胞中黑素合成以及酪氨酸酶活性。Shang Z等[19]通过定量逆转录聚合酶链式反应发现，miRNA-630在白癜风患者白斑组织中显著降低表达，并可能作为潜在的药物靶点。本研究中疗程结束后研究组miRNA-202-3p和miRNA-630表达水平均高于对照组，说明火针疗法可通过增加miRNA-202-3p和miRNA-630的表达增强酪氨酸酶活性，进而促进黑素细胞生成。nesfatin-1是一类厌食肽，由核联蛋白在激素原转化酶作用下裂解生成而来，Yoshida N等[20]研究表明，nesfatin-1与下丘脑黑皮质素信号通路传导有关，可通过激活去甲肾上腺素能神经元并影响5-羟色胺神经元进一步刺激促肾上腺皮质激素释放激素神经元，从而激活黑素细胞凝集素1调节机体色素生成和色素细胞增殖。本研究中疗程结束后研究组血清nesfatin-1水平明显低于对照组，说明火针疗法降低血清nesfatin-1含量从而改善白癜风症状。疗程结束后研究组细胞内ROS水平明显低于对照组(P<0.05)，说明火针疗法对白癜风患者提高抗氧化应激能力疗效较好。

综上所述，火针疗法对白癜风患者疗效较好，可显著提高患者抗氧化应激能力，减少皮损面积，改善机体免疫功能，降低血清nesfatin-1含量并提高miRNA-202-3p和miRNA-630表达水平。