含羞草醇提物镇痛抗炎抗氧化活性研究*

赵春梅，杨 鸥，周理强 ，李 旺，周铭涛

(云南省药物研究所/云南白药集团创新研发中心/云南省中药和民族药新药创制企业重点实验室，云南 昆明 650111)

豆科含羞草属植物含羞草(Mimosapudica L.)的全草[1]。为披散半灌木状草本，生于旷野、山溪边、草丛或灌木丛中。分布于我国西南及福建、台湾、广东、海南、广西等地。文献记载含羞草具有清热利尿，化痰止咳，安神止痛的功效。用于感冒，小儿高热，急性结膜炎，支气管炎，胃炎，肠炎，泌尿系结石，疟疾，神经衰弱；外用治跌打肿痛，疮疡肿毒[2]。为了证明其清热、止痛的功效，进行了镇痛、抗炎的功效研究，并进行抗氧化研究。

1 实验材料

1.1 药物 含羞草醇提取物，由云南省药物研究所提供，70%乙醇提取3次，减压回收，干燥。提取率为12.5%。使用时用纯水配制。药效试验给药剂量以急性毒性试验结果为依据确定。阿司匹林肠溶片，100 mg/片，Bayer Schering Pharma生产，批号：BJ10778；水飞蓟宾胶囊，天津天士力圣特制药有限公司，批号：750702017；SOD试剂盒A001-1，南京建成生物工程研究所，批号：20171026；MDA试剂盒A003-1，南京建成生物工程研究所，批号：20171031；冰醋酸，天津市天达净化材料精细化工厂，批号：020112；二甲苯，广东省化学试剂工程技术研究开发中心，批号：20090831；无水乙醇，国药集团化学试剂有限公司，批号：20150930。

1.2 动物SPF级昆明种小鼠，雌雄各半，体重18～22 g，由广东省医学实验动物中心提供。许可证号：SCXK(粤)2013-0002。小鼠分性别饲养于空调实验室内，室温(25±2)℃，相对湿度40%～70%，喂颗粒标准饲料，自由饮水和摄食。

2 方法

2.1 镇痛试验[3]取小鼠40只，体重18～22 g，雌雄各半，随机分为4组，组别及剂量如表1，按照表1剂量灌胃给药，每日1次，连续6 d，给药容积为20 mL/kg。末次给药后45 min，小鼠腹腔注射0.6%冰醋酸10 mL/kg/只，立即记录15 min内的扭体反应(小鼠出现腹部内凹、躯干与后肢伸张，臀部抬起反应为准)次数，并计算其抑制率。

表1 含羞草醇提取物对醋酸所致小鼠扭体反应的影响

抑制率=[扭体次数(空白对照均数)-扭体次数(给药均数)]×[扭体次数(空白对照均数)]

含羞草醇提取物以2.01 g/kg，4.00 g/kg(相当于生药16.08 g/kg，32.00 g/kg)的剂量连续灌胃给药6 d，2组均能不同程度抑制醋酸所致小鼠扭体性疼痛，抑制率分别为：30.7%、41.3%，4.00 g/kg剂量组作用明显，与空白对照组相比较具有显著性差异。显示出镇痛作用。

2.2 抗炎试验[4]选用18～22 g小鼠40只，按体重随机分为4组，每组雌雄各5只，分组及给药情况见表2。各组均预先每日灌胃给药1次，连续7 d，对照组灌服等容量纯水，各组灌胃容积均为20 mL/kg体重。末次给药后30 min，各组小鼠于右耳两面均匀涂抹二甲苯0.05 mL，左耳不涂为对照。致炎后1h脱颈椎处死动物，用直径6 mm的打孔器将双耳同部位等面积切下，取耳片称重，以两耳片重量之差作为肿胀度。

表2 含羞草醇提取物对二甲苯所致小鼠耳廓肿胀的影响

含羞草醇提取物以2.01 g/kg，4.00 g/kg(相当于生药16.08 g/kg，32.00 g/kg)的剂量连续灌胃给药7 d，2组均能不同程度抑制二甲苯所致小鼠耳廓肿胀，抑制率分别为：32.22%、25.09%，2.01 g/kg剂量组作用明显，与空白对照组相比较差异具有统计学意义。

2.3 抗氧化试验[5]取18～22 g小鼠50只，雌雄各半，随机分为空白对照组，水飞蓟宾阳性组(0.175 g/kg)，含羞草低、高剂量组，共5个组，每组10只。各组动物每日按20 mL/kg容积给药，连续30 d。末次给药后60 min，空白组给予纯水，其余各组均一次性灌胃给予50%的乙醇溶液，所有动物禁食不禁水16 h，摘眼球取血，制备血清，测定SOD活力、MDA含量。处死后取肝脏计算肝脏指数。进行统计学检验。

表3 含羞草对乙醇氧化损伤小鼠肝脏指数、血清SOD活力和MDA含量的影响

与空白对照组比较，模型组肝脏指数上升，且有显著性差异(P<0.001)，表明乙醇产生的自由基氧化损伤肝脏，肝细胞中脂肪堆积，造模成功。与模型组比较，水飞蓟宾，含羞草4 g/kg高剂量均可明显抑制乙醇氧化损伤引起的肝脏指数上升(P<0.05)。

与空白组比较，模型组血清MDA含量明显升高，具有显著性差异(P<0.01)，造模成功。与模型组比较，水飞蓟宾，含羞草2 g/kg，4 g/kg剂量均可明显降低模型小鼠血清中MDA的含量，且差异具有统计学意义(P<0.05，P<0.01)。

与空白组比较，模型组血清SOD含量明显降低，具有显著性差异(P<0.05)，造模成功。与模型组比较，水飞蓟宾，含羞草4 g/kg剂量均可明显升高模型小鼠血清中SOD的含量，且具有显著性差异(P<0.05)。

2.4 小鼠急性毒性实验[6]

2.4.1 正式实验 根据预实验的结果将KM小鼠40只随机分为2组，即溶媒对照组和含羞草13.34 g/kg·bw 1个剂量组，每组20只，♀♂各10只。动物禁食不禁水约6 h 55 min～7h8 min后，按40 mL/kg体重一次灌胃给予相应供试品，观察其急性毒性反应和死亡情况，以后每天观察1次，连续14 d；于给药第4、7、14 d称量体重；观察结束处死动物，大体解剖观察各动物脏器、器官的体积、颜色、质地等有无明显异常。

2.4.2 试验结果与分析

2.4.2.1 毒性反应 小鼠灌胃给予供试品含羞草醇提物后，在4 h内出现毒性反应，主要表现为竖毛。存活动物至第2 d恢复。给药组动物的毒性反应见表4。

表4 含羞草醇提物小鼠灌胃给药急性毒性试验急性毒性症状及动物死亡情况

2.4.2.2 死亡情况 观察期内各组动物均无死亡。

2.4.2.3 体重 试验期间，给药后第3 d，各剂量组小鼠体重持续增长，与溶媒对照组比较无显著性差异(P>0.05)；至给药后第7 d，13.34 g/kg·bw含羞草雄、雌鼠体重增长缓慢，与溶媒对照组比较具有显著性差异(P<0.001)；至给药后第14 d，各剂量组小鼠体重持续增长，与溶媒对照组比较差异无统计学意义(P>0.05)。见表5。

表5 含羞草小鼠灌胃急性毒性试验各组动物的体重

2.4.2.4 解剖观察 观察14 d结束后脱颈椎处死的动物进行大体解剖观察，肉眼观察心、肝、脾、肺、肾、肾上腺、胸腺、卵巢、子宫、精囊、前列腺、睾丸、胃、肠及胸腔、腹腔，各组织和器官的体积、颜色、质地等，含羞草醇提物各剂量组、溶媒对照组各小鼠器官均无肉眼所见异常。

2.4.3 毒性 在本实验条件下，对含羞草醇提物不同剂量进行24 h内小鼠单次灌胃给药急性毒性试验，可见动物于4 h内出现毒性反应，主要表现为竖毛。至第2 d恢复。试验结束对存活动物进行大体解剖观察，各组动物脏器、器官的体积、颜色、质地等均未见明显异常。含羞草醇提物24 h内小鼠灌胃给药最大给药量为13.34 g/kg·bw(相当于生药106.72 g/kg·bw)，各组均未出现动物死亡。

3 小结

含羞草是云南民间常用药。具有清热利尿，化痰止咳，安神止痛的功效。含羞草全草药理作用研究较少。为了探讨和开发含羞草的药用价值，本文对其进行了初步安全性及镇痛、抗炎、抗氧化药理作用的实验研究。急性毒性实验显示，含羞草醇提物24 h内小鼠灌胃给药最大给药量为13.34 g/kg·bw(相当于生药106.72 g/kg·bw)，各组均未出现动物死亡。表明含羞草毒性很低。含羞草能抑制醋酸所致小鼠扭体性疼痛，能抑制二甲苯所致小鼠耳廓肿胀，可提高SOD的活性，降低MDA的含量。表明含羞草具有具有镇痛、抗炎、抗氧化作用。实验结果为含羞草将来产品研发和临床应用提供了科学依据。