新生儿胃液与咽拭子标本11种病原体核酸检测结果一致性研究*

李 宁，王晓帅，谭宝莹，左雪梅，刘郴州，△

(1.广东医科大学，广东 湛江 524000；2.江门市中心医院儿科ICU，广东 江门 529030)

新生儿感染病原体有细菌、真菌、病毒、支原体、衣原体、螺旋体、原虫等[1]。目前，病原体常规检测方法有病原体分离、核酸检测、抗原检测、血清学抗体检测、培养等，同时进行多个单种病原体常规检测存在价格昂贵、操作烦琐、耗时长且可能存在漏诊等问题。围产期母婴病原体核酸悬浮微珠液相芯片检测技术是将靶序列富集多重聚合酶链反应[2-3]和Luminex液相芯片[4]技术相结合建立的一种可在单个反应体系中同时检测围产期新生儿感染的11种病原体[包括沙眼衣原体(CT)、微小脲原体(UP)、大肠埃希菌(EC)、解脲脲原体(UU)、淋球菌(NG)、人类疱疹病毒(EB)、B族链球菌(GBS)、巨细胞病毒(CMV)、生殖道支原体(MG)、肠道病毒(EnV)、人型支原体(MH)]的快速分子检测方法，从理论上来讲，其可作为可靠、快速、高通量的新生儿感染早期诊断方法，为新生儿感染的早期干预提供了依据。新检测技术的成功推广涉及多个环节[5]，其中检测标本的选择对检测技术的推广应用具有重要意义。刚出生的可疑感染新生儿常规病原体检测可选择胃液标本，围产期母婴病原体核酸悬浮微珠液相芯片检测技术是否可选择更加简单、易行的咽拭子标本替代、2种标本检测结果是否一致目前尚鲜见文献报道。本研究选取120例刚出生可疑感染新生儿作为研究对象，采集出生后3 h内胃液和咽拭子标本，通过围产期母婴病原体核酸检测悬浮微珠液相芯片完成11种病原体检测，评价检测结果是否一致，现报道如下。

1 资料与方法

1.1资料

1.1.1一般资料 选取2021年2—6月广东省江门市中心医院儿科重症监护病房收治的可疑感染新生儿120例作为研究对象，其中男61例，女59例；出生胎龄25～42周。本研究获广东省江门市中心医院伦理委员会审批。

1.1.2纳入标准 (1)广东省江门市中心医院儿科重症监护病房住院的可疑感染新生儿；(2)出生3 h内；(3)对本研究知情同意并签署同意书。

1.1.3排除标准 (1)出生后已进行喂养者；(2)出生后已进行洗胃者。

1.2方法

1.2.1标本采集 先采集咽拭子标本，然后采集胃液标本。

1.2.1.1咽拭子标本采集 无菌操作采集标本。新生儿出生后3 h内采集咽拭子标本。将拭子送入新生儿口腔深部、咽喉部，轻柔快速擦拭两侧腭弓、咽部，反复擦拭3次及以上，将采集好的拭子头垂直插入分子转运介质(MTM)保存液试管中，4 ℃保存备用。

1.2.1.2胃液标本采集 无菌操作采集标本。新生儿出生后3 h内入室后采集胃液标本。患儿取仰卧位，经口缓慢插入胃管经咽部至预期深度，用注射器回抽胃管确认胃管在胃内后留取胃液标本2 mL至MTM保存液试管中，4 ℃保存备用。

1.2.2标本保存及检测 采集胃液及咽拭子标本保存至MTM保存液中。MTM保存液主要组成成分为Hank′s平衡盐、苯酚红、庆大霉素、多黏菌素B、胍盐、冷冻保护剂等。采集获得标本送广东辉锦创兴生物医学科技有限公司，使用围产期母婴病原体核酸检测悬浮微珠液相芯片试剂检测11种病原体。

1.2.3观察指标 (1)分析胃液和咽拭子标本中11种病原体检出率的差异。(2)分析胃液和咽拭子标本中11种病原体检测结果的一致性。

1.2.4结果判读 胃液和咽拭子标本检测结果中有病原体检出为阳性结果，无病原体检出为阴性结果。咽拭子标本检测结果以胃液标本检测结果作为对照，胃液标本结果为阳性，同一新生儿咽拭子标本有病原体检出，且病原体分类与其胃液检出结果一致结果判读为阳性，否则为阴性；胃液标本结果为阴性，同一新生儿咽拭子标本有病原体检出结果判读为阳性，否则为阴性。

1.3统计学处理 应用SPSS22.0统计软件进行数据分析，计数资料以率或构成比表示，采用χ2检验。P<0.05表示差异有统计学意义。采用Kappa检验比较胃液和咽拭子标本11种病原体核酸检测结果的一致性。Kappa值评价标准[6-7]：Kappa<0.20一致性极低，0.20～<0.40一致性一般，0.40～<0.60中度一致性，0.60～<0.80较高度一致性，Kappa≥0.80极好一致性，几乎完全一致。

2 结 果

2.1检测结果 120例新生儿中胃液标本病原体阳性14例(11.67%)，其中UP 8例，EC 4例，UU 1例，MH 1例；咽拭子标本病原体阳性12例(10.00%)，其中UP 6例，EC 4例，UU 1例，MH 1例；胃液和咽拭子标本病原体阳性一致10例，其中UP 6例，EC 2例，UU 1例，MH 1例；胃液和咽拭子标本均未检出CT、NG、EB、GBS、CMV、MG和EnV。

2.2胃液和咽拭子标本UP、EC、UU、MH检出率比较 胃液和咽拭子标本UP、EC、UU、MH检出率比较，差异均无统计学意义(P>0.05)。见表1。

表1 胃液和咽拭子标本UP、EC、UU、MH检出率比较[n(%)，n=120]

2.3胃液和咽拭子标本阳性检出UP、EC、UU、MH一致性 胃液和咽拭子标本UP、EC、UU、MH检测一致性良好(Kappa=0.848、0.483、1.000、1.000，P<0.05)。见表2～5。

表2 胃液和咽拭子标本阳性检出UP一致性(n)

表3 胃液和咽拭子标本阳性检出EC一致性(n)

表4 胃液和咽拭子标本阳性检出UU一致性(n)

表5 胃液和咽拭子标本阳性检出MH一致性(n)

2.4胃液和咽拭子标本阳性检出11种病原体总体一致性 胃液和咽拭子标本检测总体结果具有较高一致性(Kappa=0.673，P<0.001)。见表6。

表6 胃液和咽拭子标本阳性检出11种病原体总体一致性(n)

3 讨 论

新生儿机体器官尚未完全发育，抵抗力较差，特别是早产儿、极低出生体重儿，由于自身防御及免疫系统发育不完善，极易感染各种病原体[8-9]，部分病原体可引起新生儿急性呼吸窘迫综合征或严重脓毒症而导致死亡，有些甚至可快速在医院内播散引起严重的医院内感染，导致灾难性后果[10-11]。新生儿感染早期快速、准确的筛查诊断对早期干预、改善患儿预后具有重要意义。在新生儿感染中有11种较常见病原体(CT、UP、EC、UU、NG、EB、GBS、CMV、MG、EnV、MH)[12-13]，围产期母婴病原体核酸悬浮微珠液相芯片检测技术即针对此11种新生儿感染的常见病原体，从理论上来讲，能满足高效、快速、高通量的要求，适合作为新生儿感染的筛查、诊断方法，而合适的检测标本的选择对其临床推广应用具有重要意义。

对刚出生的可疑感染新生儿常规病原体检查，如细菌培养、病原体核酸检测均可选择胃液标本，胃液标本常作为除羊水外的另一种标本用于鉴定产前感染[14]，但胃液标本的采集过程比咽拭子复杂，新生儿出生后短时间内完成度较低，且为侵入性操作，操作过程易造成患儿消化道损伤。咽拭子标本具有取材方便、无创、简单易操作、出生后产房内即可快速完成标本采集等优点[15-16]。本研究选取120例刚出生的可疑感染新生儿作为研究对象，采集出生后3 h内胃液和咽拭子标本，通过围产期母婴病原体核酸检测悬浮微珠液相芯片完成11种病原体检测，结果显示，新生儿胃液和咽拭子标本11种病原体核酸检测结果基本一致。

本研究是对可疑感染新生儿的病原体筛查，检测结果阳性率偏低，胃液标本总阳性检出率为11.67%，咽拭子标本总阳性检出率为10.00%，11种病原体中仅有UP、EC、UU、MH 4种病原体检出阳性，其他7种病原体均未检出，但考虑到为配对资料，且样本量大于100例，统计学结论具有一定的临床意义，认为新生儿胃液和咽拭子标本11种病原体核酸检测结果基本一致，也可通过提高样本量进一步验证结果的代表性。