HCCR-1、Bcl-2的表达与结直肠癌的相关性分析

张淑华 张勇

（确山县人民医院病理科，河南 确山 463200）

约95%的结直肠癌是由结肠和直肠内壁的腺细胞发展而来，癌症通常开始于内壁最内层，并缓慢生长到外层。结直肠癌（Colorectal Cancer，CRC）早期症状包括排便习惯改变（如便秘或者腹泻）、大便细窄、粪便中含有鲜红或韩红色血液、骨盆或下腹持续疼痛（如胀气、肿胀或疼痛）、不明原因的体重减轻、恶心或偶遇及精神不振等表现，随着疾病发展，其肿瘤增大导致肠腔狭窄，从而造成机械性肠梗阻，还可能发生肠穿孔和出血等并发症，对患者生命造成严重的威胁。

近年来，结直肠癌发病率和死亡率在世界范围内呈现上升趋势。通过mRNA差异展示、杂合性丢失等研究方法，发现了100多种抑癌基因，通过对这些抑癌基因的研究，可以阐述肿瘤形成机制，为未来抗肿瘤治疗新方法提供理论依据[1]。人宫颈癌癌基因（Human Cervical Cancer Oncogene，HCCR）定位于人染色体12q，包括HCCR-1与HCCR-2。国内有研究报道，HCCR在肝癌内中过表达，逐渐成为肝癌诊断线索[2]。B淋巴细胞瘤-2（B-cell Lymphoma-2，Bcl-2）可抑制多种原因引起的细胞凋亡，其过表达可使细胞抵抗正常凋亡。

因此，为了进一步探究其在CRC组织中的作用机制，本文对其CRC组织和癌旁正常组织中的HCCR-1、Bcl-2蛋白表达情况进行检测，揭露HCCR-1、Bcl-2蛋白表达之间的关系，评价其表达在诊断、治疗CRC中的临床价值。

1 资料与方法

1.1 一般资料

回顾性分析2019年3月至2022年3月本院收治的CRC患者的临床资料。其中女60例，男53例，年龄35-78岁，平均年龄55.76±3.88岁。以距癌组织边缘5 cm以上无癌浸润的癌旁正常组织作为正常对照。

纳入标准：临床资料完整；均经病理学确诊；符合《NCCN结直肠癌诊治指南（2017）》中CRC诊断标准[3]；排除标准：有严重造血系统疾病和传染病者；合并心、肺、肝、肾等其他脏器并发症者；合并恶性肿瘤和全身感染者；存在认知功能障碍和心理问题者。本研究经本院伦理委员会同意，且患者及家属知情签署《知情同意书》。

1.2 方法

1.2.1 HCCR-1、Bcl-2表达的检测方法

均采用免疫组化法对HCCR-1、Bcl-2表达进行检测。选取手术后癌旁正常组织和CRC组织的石蜡块（本院病理科提供）。4μm连续切片，60℃烤片1 h，切片脱蜡和水化，加0.01 mol·L-1枸橼酸缓冲液（pH6.4）于高压锅中，加热至喷气，持续2 min。冷却后，蒸馏水冲洗，PBS溶液浸洗3次，每次5 min，用新鲜配置的3%双氧水处理15 min，PBS浸洗3次，每次5 min，室温封闭0.5 h。吸干液体，滴加鼠抗人HCCR-1、Bcl-2多克隆抗体，覆盖标本，将切片放入湿盒中孵育，PBS浸洗3次，每次5 min，滴加Envision试剂，覆盖标本，37℃保温箱内孵育1 h，PBS浸洗3次，每次5 min。室温下显色，复染，充分水洗，脱水透明，重型快干胶封片，在高倍显微镜下观察。PBS代替一抗作为阴性对照，阳性对照采用试剂公司提供的阳性切片（试剂盒均购自上海通蔚试剂有限公司，操作步骤按试剂盒说明书进行）。

1.2.2 HCCR-1、Bcl-2阳性表达的判定

阳性表达定位于细胞核和细胞质，在肿瘤细胞胞质、胞膜上可见棕黄或棕褐色颗粒。100×光镜下取肿瘤实质区，400×光镜下随机选择5个视野。根据染色强度评分：阴性=0，弱阳性=1，中等阳性=2，强阳性=3。染色阳性细胞数分为：≤10%（阴性=0），11%-30%（弱阳性=1），31%-50%（中等阳性=2），＞50% （强阳性=3）。当两者分数之和≥3时判定HCCR-1、Bcl-2为阳性。

1.3 观察指标

（1）对比CRC组织和癌旁正常组织间HCCR-1、Bcl-2蛋白表达水平；（2）对比不同临床特征CRC组织的HCCR-1、Bcl-2蛋白表达情况；（3）分析CRC组织中HCCR-1、Bcl-2表达的相关性。

1.4 统计学方法

采用SPSS 26.0统计学软件分析数据，n（%）表示，χ2检验；相关性采用Spearnan相关性分析；以α=0.05为检验水准。

2 结果

2.1 CRC组织与癌旁正常组织间HCCR-1、Bcl-2蛋白表达水平对比

HCCR-1在癌旁正常组织中无阳性表达，在113例CRC组织中有83例阳性表达，表达率为73.45%。

Bcl-2在113例CRC组织中有62例阳性表达，表达率为54.87%；且CRC组织HCCR-1、Bcl-2蛋白阳性率均显著高于癌旁正常组织（P＜0.05）。见图1。

图1 Bcl-2、HCCR-1免疫组化代表图（×100）

2.2 不同临床特征CRC组织的HCCR-1、Bcl-2蛋白表达情况

CRC组织中HCCR-1、Bcl-2的表达均与Dukes分期相关（P＜0.05）；均与患者年龄、性别、肿瘤大小、组织类型、肿瘤分化程度、淋巴结转移无关（P＞0.05）。见表1。

表1 不同临床特征CRC组织的HCCR-1、Bcl-2蛋白表达情况比较（例(%)）

2.3 CRC组织中HCCR-1、Bcl-2蛋白表达的相关性分析

Spearman相关分析结果显示在CRC组织中，HCCR-1蛋白表达与Bcl-2蛋白表达相关性呈负相关（r=-0.298，P＜0.05）。见表2。

表2 CRC组织中HCCR-1、Bcl-2蛋白表达相关性

3 讨论

CRC是胃肠道中常见的恶性肿瘤，其具体病因目前尚未完全明确，有专家认为，可能是遗传、环境、饮食习惯及消化道疾病等多种因素共同作用的结果，且我国CRC近几年病死率呈明显上升。

HCCR是近年来发现的致癌基因，与人类多种肿瘤密切相关，可作为诊断肝癌、乳腺癌的标志物。有研究表明，HCCR-1编码的细胞膜外蛋白可造成线粒体功能障碍，以抵抗和抑制短波紫外线（Ultra Violet C，UVC）诱导的细胞凋亡[4]。有学者认为，HCCR-1通过与人宫颈癌癌基因结合蛋白-1（Human Cervical Cancer Oncogene Binding Protein -1，HCCRBP-1）相互作用来诱导肿瘤发生[5]。陈粉合等发现卵巢浆液性恶性肿瘤组患者的HCCR阳性表达率为70.00%，高于对照组的8.00%，临床分期III、IV期、组织学分级为中、低分化、有淋巴结转移的卵巢浆液性恶性肿瘤患者HCCR蛋白阳性表达水平较高，且通过单因素分析得出，组织学分级是影响卵巢浆液性恶性肿瘤患者HCCR蛋白水平的因素[6]。

潘云翠等学者采用免疫组化法检测HCCR-1在乳腺浸润性导管癌中的表达，结果发现HCCR-1在乳腺浸润性导管癌中呈现高表达（66.9%，107/160），且HCCR-1表达与临床分期，组织学分级，淋巴结转移，雌激素受体表达，孕激素受体表达相关[7]。

Bcl-2基因是近年来发现的细胞凋亡调控基因，通过抑制细胞凋亡来延长细胞寿命[8]。熊见等发现胃癌中细胞凋亡率及Bcl-2表达率在胃黏膜癌变进展中呈上升趋势，且Bcl-2的过度表达使细胞凋亡受抑，从而促进胃癌的发生和发展[9]。本研究结果中HCCR-1蛋白在正常结肠粘膜组织中无表达，在CRC组织中阳性表达率为73.45%，这一结果与陈粉合、潘云翠等研究结果基本一致，提示HCCR-1蛋白过量表达与CRC早期发生及病程进展有关。另一方面，HCCR-1、Bcl-2的表达均与Dukes分期有关，且CRC组织HCCR-1、Bcl-2蛋白阳性率均显著高于癌旁正常组织，说明HCCR-1、Bcl-2与肿瘤侵袭有关。Spearman相关分析结果显示在CRC组织中，HCCR-1与Bcl-2蛋白表达呈负相关，原因可能是Bcl-2的抑制作用导致HCCR-1过表达，与熊见等研究结果类似。另外，HCCR-1、Bcl-2的表达与患者年龄、性别、肿瘤大小、组织类型、肿瘤分化程度、淋巴结转移无关，与陈粉合、潘云翠等研究结果不一致，可能是因为本研究的样本量太小。

综上，HCCR-1、Bcl-2蛋白在CRC组织中存在过表达状态，与其临床病理特征显著相关，并能作为一种新的预后判断指标和治疗靶点，为疾病诊断、预后判断提供参考价值。