EGFR敏感突变阴性非小细胞肺癌脑转移患者的临床特征

李淑莹 杨振华 田 蕊 杨胜楠 娄小平

(ThePracticalJournalofCancer,2023,38:0152～0155)

非小细胞肺癌(non small cell lung cancer，NSCLC)属于多发的肺癌类型，发病率可达肺癌的80%，发生原因可能与吸烟、大气污染、电离辐射、遗传等因素有关。且7%～10%的NSCLC患者初诊时合并脑转移，30%～50%患者会出现脑转移症状。NSCLC脑转移患者具有病情发展快，预后差的特点，随着病情的发展，肺癌会占据肺的大部分面积，对肺呼吸功能造成严重影响，加重患者呼吸困难的症状，不利于患者的生命安全[1-2]。由于NSCLC脑转移患者早期无典型症状，确诊时大多已至中晚期，此时患者出现淋巴结转移，不利于后期治疗。因此，及早确定疾病并采取治疗方案有利于提升患者生存质量。表皮生长因子(EGFR)突变是NSCLC诊断中最常见的敏感基因类型，EGFR相关信号通路在肺癌的发生和发展中起到重要作用，与肿瘤细胞增殖、血管生成、入侵和转移等具有密切关系。但EGFR阴性突变与NSCLC脑转移的临床症状之间的关系仍不明确[3-4]。因此，本研究进一步分析EGFR敏感突变阴性NSCLC脑转移患者的临床特征。

1 资料与方法

1.1 一般资料

本研究选取2016年1月至2020年12月我院92例EGFR突变阴性NSCLC患者为阴性组，并以1∶1比例选取同期92例EGFR突变阳性患者作为阳性组。阴性组：男性49例、女性43例，年龄42～78(59.68±2.46)岁；术后病理类型：腺癌79例，大细胞癌3例，鳞癌10例。阳性组：男性47例，女性45例；年龄42～78(59.52±2.44)岁；术后病理类型：腺癌71例，大细胞癌5例，鳞癌16例。2组一般资料均衡可比(P>0.05)。

1.2 选取标准

纳入标准：①经影像学检查发现肺部或颅内占位性病变；②脑转移经严格影像学检查确诊；③患者接受EGFR敏感基因突变检测；④患者病历资料完整。排除标准：①患者经治疗后仍出现脑转移需要进行手术治疗者；②患者伴有其他系统严重疾病。

1.3 方法

1.3.1 检测仪器与试剂 使用Applied Biosytems 提供的实时荧光定量监测仪，样本DNA分离试剂盒及EGFR基因突变实时荧光检测试剂盒均由厦门艾德生物提供。

1.3.2 处理标本 将新鲜脑转移病理标本放置在10%的中性福尔马林中进行6～12 h的固定，并将标本实施石蜡包埋、切片、染色，随后实施病理细胞学查看及免疫检测，确定病理类别。每例标本需制成厚5～10 μm的5～8份切片，直接放置在1.5 ml的EP管内，石蜡切片样品并确保伴有肿瘤病变组织，肿瘤细胞组织比率需>50%，为确保切片组织中含有一定比例的肿瘤细胞，需加同样细胞组织的染色片子。

1.3.3 DNA提取 选取石蜡切片，经消融、去二甲苯、无水乙醇、消化、裂解、去交联、沉淀、过柱结合、漂洗、二次漂洗、离心、挥发、洗脱等措施，获取样本DNA后，检查DNA浓度，纯化DNA样本若超过6 h，并放置在-20 ℃温度下储存，操作过程需结合DNA试剂盒说明书实施。

1.3.4 基因突变检测 使用扩增阻滞突变研究18～21外显子热点突变状况，并按照荧光检测说明书实施操作，在试剂盒的反应预混液8联管各孔中均添加4.7 μL DNA，产生5 μL 反应体系。反应程序设定标准：95 ℃ 5 min是1个循环；95 ℃ 25 s，64 ℃ 20 s，72 ℃ 20 s是15个循环；93 ℃ 25 s，60 ℃ 35 s，72 ℃ 20 s是31个循环。最后使用实时荧光定量监测仪的操作流程实施扩增，并结合扩增曲线实施判断，质控标准石蜡切片Ct需维持在15～21左右，并在阴性对照符合条件下实施结果判断。

1.4 观察指标

(1)EGFR阳性与阴性NSCLC患者的脑转移发病率。(2)统计EGFR阴性NSCLC脑转移患者的发病部位、病灶数目、大小。(3)统计EGFR阴性NSCLC脑转移患者的发病症状。

1.5 统计学方法

2 结果

2.1 脑转移发病情况

EGFR阳性患者初诊脑转移为26.09%、1年累积脑转移39.13%，与EGFR阴性患者的25.00%、27.17%比较，无显著差异(P>0.05)；但EGFR阴性组3年累积脑转移率(28.26%)较阳性组(46.74%)低(P<0.05)。见表1。

表1 EGFR与脑转移发病率的关系(例，%)

2.2 EGFR突变阴性NSCLC患者脑转移的发病部位、病灶数目、大小

本组26例EGFR突变阴性NSCLC脑转移患者中，发病部位幕上占61.54%、幕下占3.85%、幕上幕下同时累积30.77%、侵犯颅骨3.85%，其中幕上以顶叶(23.08%)和额叶(19.23%)较为常见。脑转移病灶数1个、2～3个、>3个分别占34.62%、34.62%、30.77%。病灶大小范围<1.0 cm、<2.0 cm、<3.0 cm分别占26.92%、34.62%、38.46%。见表2。

表2 EGFR突变阴性NSCLC患者脑转移的发病部位、病灶数目、大小

2.3 EGFR突变阴性NSCLC患者脑转移的发病症状

本组26例EGFR突变阴性NSCLC脑转移患者中，临床症状中呼吸系统症状占46.15%、神经系统症状占26.92%、疼痛11.54%、胸部影像学异常11.54%、食欲降低3.85%，其中神经系统症状中包含瘫痪15.38%、癫痫3.85%、头痛3.85%、运动障碍3.85%。见表3。

表3 EGFR突变阴性NSCLC患者脑转移的发病症状

3 讨论

NSCLC是肺癌的一种类型，主要起源于腺体或支气管黏膜，由环境、辐射、慢性感染病等多种因素共同作用引发。脑转移是最常见的颅内肿瘤之一，具有较高发病率和病死率，是肺癌的晚期表现，20%～45%的肺癌患者在疾病阶段均确诊为脑转移。NSCLC脑转移患者会出现颅内压增高、恶心、呕吐、视力降低等症状，如不及时治疗，患者体内的癌细胞会进一步增殖，严重者还会引起脑疝，压迫患者呼吸循环中枢，造成呼吸心跳骤停[5-6]。临床常采用手术治疗NSCLC脑转移，但术后复发的可能性较大，患者生存率低。因此，探索NSCLC脑转移的发生发展机制，有利于诊断疾病，为后期治疗和预后改善提供依据[7-8]。

EGFR是具有酪氨酸激酶活性的膜表面传感器，是一个巨大的跨膜糖蛋白，其普遍表达于人体表皮细胞和基质细胞。基因突变是指EGFR基因序列出现变化而导致基因活性发生异常，引起疾病的产生发展，临床上通过检测EGFR基因突变可以明确恶性肿瘤类型，便于选取适当的药物进行靶向治疗。本研究结果表示，阴性组3年累积脑转移率(28.26%)较阳性组(46.74%)低(P<0.05)，提示EGFR敏感突变阴性NSCLC患者脑转移风险相对较低。EGFR是目前肺癌治疗中最主要的靶点，其属于ErbB的家族成员之一，在调节细胞增殖及分化中起到重要作用，可以通过细胞外区与配体结合，形成二聚体，调节细胞的侵袭和凋亡。EGFR基因突变可发生于较多基因位点，造成正常细胞生物学特征出现变化，引发癌症，而异常的EGFR活化会促使肿瘤细胞增殖、迁移、分化及血管新生，还可以抑制肿瘤细胞的凋亡，提高肿瘤的发病率[9-12]。经进一步研究表示，本组26例EGFR突变阴性NSCLC脑转移患者中，发病部位以幕上为主，脑转移病灶数目1个、2～3个、>3个占比分别为34.62%、34.62%、30.77%。病灶大小范围<1.0 cm、<2.0 cm、<3.0 cm分别占26.92%、34.62%、38.46%。此外，EGFR敏感突变阴性NSCLC脑转移患者主要表现为呼吸系统症状和神经系统症状。结合Balasubramanian等[13]研究，进一步证实EGFR敏感突变阴性NSCLC脑转移患者发病数目较少，但病灶体积较大。EGFR可以表达所有细胞的表面，在正常状况下可以精准地调控细胞的生长和死亡，当其出现基因突变时，不再受制于配体，使细胞不受控制，进一步诱发癌变症状，破坏脑部病灶周围的神经功能，诱发中枢神经系统异常[14-15]。

综上所述，EGFR敏感突变阴性NSCLC患者脑转移风险较低，发病部位主要为幕上，主要表现为呼吸系统症状和神经系统症状。