HCV核心抗原检测在丙型肝炎感染早期诊断中的应用研究

江 灵， 李 晟， 王芝瑶， 燕德敏， 黄远帅， 王雨涵

丙型肝炎(简称丙肝)是由丙型肝炎病毒(hepatitis C virus，HCV)导致的一种呈全球流行的病毒性肝炎，也是输血传播的感染性疾病之一。HCV属黄病毒科黄病毒属，为单股正链核糖核酸(ribonucleic acid,RNA)病毒，主要攻击人体肝细胞，变异性极强，不同年龄、性别和种族人群均对HCV易感。据统计，全球有1.15亿～1.85亿人感染HCV，有39.9万人死于HCV感染导致的肝硬化或原发性肝癌(hepatocellular carcinoma，HCC)[1]。在病毒性肝炎中，丙肝的发病率高，仅次于乙肝，我国HCV感染率年均增长14.4%，严重威胁人们的健康[2]。目前尚无有效的预防性丙肝疫苗可用[3]，且本病发病隐蔽，早期症状不明显，不易被发觉[4-5]。临床实验室检查是丙肝早期诊断的主要依据，在本病的早期诊断和治疗中起着重要作用。本研究旨在探讨丙肝病毒核心抗原(hepatitis C virus core antigen,HCV-cAg)与丙型肝炎病毒核酸(hepatitis C virus ribonucleic acid,HCV-RNA)及谷丙转氨酶(glutamic-pyruvic transaminase,ALT)的关系及其在丙肝感染早期诊断中的应用价值。

1 资料与方法

1.1一般资料 选择2020年1月至2021年7月西南医科大学附属医院接治的血清HCV-cAg阳性患者90例，其中男48例，女42例，年龄33～77(48.68±14.25)岁；血清丙型肝炎抗体(hepatitis C virus antibody,HCV-Ab)阳性患者164例，其中男88例，女76例，年龄33～72(46.45±16.76)岁。两组性别和年龄比较差异无统计学意义(P>0.05)。排除有甲、乙、戊型肝炎患者；有血液透析史者；合并自身免疫性肝炎、脂肪肝、酒精性肝炎等其他类型非特异性免疫原性肝病患者；有肝脏肿瘤者；合并有人类免疫缺陷病毒(human immunodeficiency virus,HIV)感染并且未进行抗病毒治疗者。

1.2研究方法 留取两组研究对象的空腹外周静脉血8 ml，3 000 r/min离心10 min后分离血清，进行相关实验指标检测。

1.2.1 HCV-cAg检测 采用山东莱博生物科技有限公司生产的丙肝核心抗原检测试剂盒，按照试剂说明书和实验室操作规程进行实验。应用化学发光法免疫分析仪测定光密度(optical density,OD)值，S/CO(sample′s optical density/cut-off)值[S/CO中的CO为cut-off，S/CO是样本OD值与临界质控(阳性对照)OD值之比]>1判定为阳性。

1.2.2 HCV-Ab测定 采用安图生物技术有限公司生产的丙型肝炎病毒IgG抗体检测试剂盒，按照试剂说明书和实验室操作规程进行实验。应用全自动化学发光法测定仪测定OD值，S/CO值>1判定为阳性。

1.2.3 HCV-RNA检测 严格按照罗氏丙型肝炎病毒核酸检测试剂盒说明书操作，采用罗氏COBAS AmpliPrep对丙肝病毒进行提取，以COBAS Tasman进行核酸的扩增检测。HCV-RNA含量>500 IU/ml为阳性。

1.2.4 ALT检测 采用迈瑞BS-2000M生化分析仪检测，ALT>40 IU/L判定为肝功能结果异常。

2 结果

2.1HCV-cAg、HCV-Ab与HCV-RNA、ALT的关联性分析结果 90例HCV-cAg阳性患者中，HCV-RNA阳性76例(84.44%)，肝功能异常54例(60.00%)。164例HCV-Ab阳性患者中，HCV-RNA阳性114例(69.51%)，肝功能异常75例(45.73%)。HCV-cAg阳性组的HCV-RNA阳性率以及肝功能异常率均显著高于HCV-Ab阳性组(P<0.05)。见表1。

表1 HCV-cAg、HCV-Ab与HCV-RNA、ALT的关联性分析结果[n(%)]

2.2HCV-cAg检测的S/CO值与HCV-RNA阳性及肝功能异常的关联性分析结果 以HCV-cAg检测的S/CO值不同分为1.01～5.00、5.01～10.00、10.01～15.00和>15.00四个组。结果显示，HCV-cAg检测的S/CO值与肝功能异常率存在关联性(P<0.05)，与HCV-RNA阳性率关联性不显著(P>0.05)。见表2。

表2 HCV-cAg检测的S/CO值与HCV-RNA阳性及肝功能异常的关联性分析结果[n(%)]

3 讨论

3.1丙肝是HCV感染所致的传染病，主要经由母婴传播、输血或血制品传播、性传播[6]。丙肝感染初期一般都是急性丙肝期，这个时期是治疗丙肝的最佳时期，经过有效的抗病毒治疗，HCV可以从体内彻底清除，完全治愈。但是丙肝起病隐匿[7]，没有明显的临床症状，最初患者并不知晓，因而错失最佳治疗时间，严重者发展为肝硬化和肝癌。目前，丙肝感染的发病机制仍不完全清楚，而且HCV的变异性较高，迄今没有针对丙肝的预防性疫苗。因此，实验室检查对本病的早期诊断及控制有重要的意义。目前，实验室用于丙肝的检测方法主要是HCV-Ab检测和HCV-RNA检测。其中HCV-RNA可反映患者血清中HCV的病毒载量，是病毒分裂增殖的标志，也可间接反映患者病情的变化，是临床进行抗病毒治疗的指征。一般当患者感染HCV 7～14 d时，血清中即可检测到HCV-RNA，并且特异度和灵敏度均较高，因此将HCV-RNA检测结果作为金标准[8-9]。但HCV-RNA检查对标本以及实验室环境和设备的要求都比较高，如果实验标本采集保存不当，会导致病毒核酸降解，导致假阴性。同时，病毒核酸检测对实验室的要求比较严苛，检测价格昂贵，耗时较长，对检测人员要求高，很难在基层医院开展，不适于早期丙肝感染筛选[10-11]。

3.2HCV-Ab检测是目前诊断丙肝的常规筛查方法，因为其操作简便，灵敏度高，不易被污染，已经广泛应用在临床检验中。但是，HCV-Ab不是中和性抗体，没有保护机体的作用，仅能反映患者的既往感染或者现症感染，有一定的窗口期，平均为70 d[12-13]，长的可至6～9个月或更长。对于个别因免疫缺陷或免疫系统发育不完全者，HCV-Ab可持续阴性，因此HCV-Ab检测存在假阴性问题。另外，HCV抗体可终身携带，HCV-Ab阳性不代表体内一定有HCV复制。本研究164例HCV-Ab阳性患者中，HCV-RNA阳性114例(69.51%)。HCV-Ab不能用于监测抗病毒疗效，不能区别既往感染，不能说明患者是否携带HCV，不能及时对病毒感染进行诊断[14]，不适于丙肝感染的早期诊断与治疗。ALT水平是临床常规检测的指标，是肝脏的特异性酶，正常情况下ALT主要存在于肝细胞质中，血清中的活性较低，而当肝细胞受到损害时，ALT会大量释放入血液中，是肝细胞损伤或死亡的敏感指标[15-16]。在HCV感染中，病毒核心蛋白等刺激机体的免疫应答，造成肝细胞坏死及功能破坏，ALT水平明显升高，是HCV感染患者癌变的一个有效预测因子，提示肝内炎症在疾病进展中起着关键作用，故而将ALT用于疾病辅助诊断[17-18]。本文90例HCV-cAg阳性患者中，肝功能异常54例(60.00%)；164例HCV-Ab阳性患者中，肝功能异常75例(45.73%)，并且，随着HCV-cAg检测的S/CO值的增高，肝功能异常率也在不断升高。以上提示HCV-cAg阳性能更好反映肝功能状态，对临床诊疗效果评价有更重要的意义。

3.3目前，HCV-cAg检测越来越受到研究者的青睐。研究发现HCV-cAg可在感染后2～3周内检测到，几乎与HCV-RNA相同[19]，并与HCV-RNA检测结果高度相关[20]，因此，Chang等[21]认为HCV-cAg是丙肝检测的重要指标，这与本文的研究结果一致。本研究中，90例HCV-cAg与HCV-RNA检测的符合率为84.44%，显著高于HCV-Ab的符合率69.51%。HCV-cAg可以区分既往感染的HCV或现症感染的HCV，可作为HCV感染的早期检测指标。同时HCV-cAg还可用于监测抗病毒疗效和预测持续病毒学应答(continuous virological response，SVR)[22-23]。本文90例HCV-cAg阳性患者的肝功能异常率为60.00%，显著高于HCV-Ab阳性组(45.73%)。

综上所述，HCV-cAg检测与核酸检测的符合率高，并且方法简单，价格便宜，对实验环境和设备要求以及操作人员的资历要求不高，适合各层次医院开展普查，便于在基层医院推广，对丙肝的早期筛查和疗效的评估具有重要意义。