茄子绵疫病的病原分离及鉴定

2022-12-28谭智勇谌潇雄韦海霞郑燕飞陈文俊谭军

浙江农业科学 2022年1期

谭智勇，谌潇雄，韦海霞，郑燕飞，陈文俊，谭军

(1.铜仁学院 a经济管理学院，b农林工程与规划学院，贵州铜仁 554300；2.贵州财经大学公共管理学院，贵州贵阳 550025； 3.铜仁市锦江绿色蔬菜产业发展有限公司，贵州铜仁 554300；4.中国热带农业科学院香料饮料研究所，海南万宁 571533)

茄子是贵州省聚焦种植七个优势单品蔬菜之一，全省种植面积达4万hm2，绵疫病为茄子三大病害之一，全生育期均可发生，苗期和成株期均可受害，一般减产20%～30%，发病严重时损失超过50%，主要危害茄果，也能危害叶、茎、花器等部位。据相关文献报道，辣椒疫霉菌[1-3]和烟草疫霉菌[3-4]均能引发茄子绵疫病，不同地区引发的病原菌有所差异。据笔者调研了解，近年来碧江区茄子绵疫病发病较重，目前尚未见贵州碧江茄子绵疫病病原菌的研究报道。本研究对该病害的病原菌进行了形态学和分子生物学鉴定，明确引起贵州茄子绵疫病病原菌，旨在为生产上防治茄子绵疫病提供理论依据。

1 材料与方法

1.1 材料

2020年9—10月，分2次在贵州省铜仁市碧江区和平乡蔬菜种植基地采集茄子绵疫病病株。

1.2 病原菌的分离

选取感病的茄子果实，用75%的乙醇擦净表面，去除表皮，在病健交界处剪取小块组织至PDA培养基上25 ℃培养，待分离物上长出菌丝，挑取菌落边缘进行纯化，置于4 ℃冰箱中保存。

1.3 病原菌形态观察

病原菌接种至PDA平板培养基，于25 ℃恒温箱暗培养，定期观察病原菌的菌落生长，记录菌落的颜色、形态及生长情况，在光学显微镜下拍照记录病原菌的菌丝和孢子形态。

1.4 病原菌分子鉴定

参考文献[4]。采用rDNA-ITS序列分析方法对病原菌进行分子生物学鉴定，以ITS1、ITS4为引物对菌株的rDNA进行扩增。反应条件为95 ℃预变性5 min；35个循环，95 ℃变性30 s，58 ℃退火30 s，72 ℃延伸1 min，循环结束后72 ℃延伸7 min。PCR产物用AxyPrep DNA凝胶回收试剂盒回收，具体操作按试剂盒说明书进行。取各菌种纯化后的PCR产物，使用测序仪ABI3730-XL进行DNA测序，将所得序列在NCBI中比对，选择相似度最大的序列作为物种鉴定结果。

2 结果与分析

2.1 茄子绵疫病症状

田间症状。茄子绵疫病主要为害果实(图1)，病部果肉呈现黄褐色至黑褐色腐烂状，部分严重果实上面有白色絮状菌丝。

图1 茄子绵疫病果实症状

2.2 病原菌形态特征

病原菌在PDA培养基上培养，菌落为白色，表面密被绒状(图2中A)。菌丝无隔膜，孢子囊呈椭圆形，且有明显乳头状突起(图2中B)。按照柯赫氏法则步骤将所分离到的疫霉菌株(编号gjq)接种茄子后发病症状与大田的症状相似，从发病部位再次分离得到的病原菌的形态与图2中A相同。

图2 茄子绵疫病形态学鉴定结果

2.3 病原菌分子鉴定

将测序所得序列进行BLAST在线比对，通过分子系统发育(图3)分析发现，分离获得的菌株gjq的rDNA ITS序列与NCBI数据库中对应登录号KJ696538.1、LT707536.1、KC677731.1、GU111643.1和MH842162.1序列的相似度为100%，病原菌菌株gjq鉴定为辣椒疫霉菌，与棕榈疫霉(Phytophthorapalmivora)相似度为65%。