HPLC法同时测定直立式聚丙烯输液袋中抗氧剂1010与抗氧剂168的含量

鹿广玲，田 鑫，王兰周，张建永

(1.遵义医科大学 药学院，贵州 遵义 563099；2.遵义医科大学 基础药理教育部重点实验室暨特色民族药教育部国际合作联合实验室，贵州 遵义 563099；3.贵州天地药业有限责任公司，贵州 兴义 562400)

直立式聚丙烯输液袋作为常用的药品包装材料，采用全密闭输液方式[1]；可直立摆放[2]；重量轻且不易破碎；生产成本低[3]；性质稳定，无毒无味且废物处理不产生毒害[4]。较之其他包装材料更受医务人员青睐。然而直立式聚丙烯输液袋中所采用的聚丙烯材料在成型、储存和使用过程中一旦受到金属离子、热、光照等外界因素影响，易发生老化降解，从而导致其物理化学性能下降，因此在生产过程中通常会加入抗氧剂以延缓其老化过程[5-7]。但是随之而来的聚丙烯材料在与药品长期直接接触过程中，抗氧剂会存在不同程度向药品迁移溶出的现象[8]，抗氧剂本身有明确的生物毒性会影响药物的性质，甚至对人体有害[9]。依据国食药监注[2012]267号《化学药品注射剂与塑料包装材料相容性研究技术指导原则(试行)》，对于抗氧剂必须进行药品与包装材料的相容性研究，以证实包装材料与制剂具有良好的相容性。欧洲药典抗氧剂质量标准中规定单个抗氧剂含量不超过0.3%,且抗氧剂总量不超过0.3%[10]。所以需要严格控制直立式聚丙烯输液袋中抗氧剂的含量，以保证和提高产品质量。

本实验参照欧洲药典9.0版等[11-12]采用高效液相色谱法建立了直立式聚丙烯输液袋中抗氧剂1010、抗氧剂168 的含量测定方法，并用于产品检测，为采用直立式聚丙烯输液袋包装的注射液等提供参考。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 仪器 UV-1900紫外可见分光光度计(日本岛津公司)；LC-2010AHT高效液相色谱仪(日本岛津公司)；SPD-20A高效液相色谱仪(日本岛津公司)；AE240天平(梅特勒-托利多仪器有限公司)；FST18000二级反渗透装置(山东淄博华周制药设备有限责任公司)；KQ-500DA型超声仪(昆山市超声仪器有限公司)。

1.1.2 试剂 抗氧剂1010对照品(CAS号：6683-19-8，批号：M08A7D12647，纯度：98%)和抗氧剂168对照品(CAS号：31570-04-4，批号：K09A7Y128 36，纯度：98%)均由源叶生物提供；甲醇、乙腈、四氢呋喃为色谱纯；其他试剂均为分析纯；水为纯化水。

1.1.3 样品 直立式聚丙烯输液袋由生产企业贵州天地药业有限责任公司提供，其原料聚丙烯树脂216由中国石油天然气股份有限公司兰州石化分公司提供(塑料助剂含抗氧剂1010与抗氧剂168)。

1.2 方法

1.2.1 色谱条件 色谱柱：Welch XB-C18色谱柱(4.6 mm×250 mm,5 μm)；流动相：乙腈-四氢呋喃-水(63∶30∶7)；流速：1.5 mL/min；柱温：30 ℃；检测波长：280 nm；进样体积：20 μL。

1.2.2 空白溶剂制备 取四氢呋喃和乙腈适量，配制成体积比为1∶1的混合液，即得。

1.2.3 对照品储备溶液的制备 精密称取抗氧剂1010、168适量，以空白溶剂稀释制成每1 mL分别约含2.4 mg的混合溶液，即得。

1.2.4 对照品溶液的制备 精密量取10 mL对照品储备液于100 mL容量瓶中，以空白溶剂定容，即得。

1.2.5 供试品溶液的制备 直立式聚丙烯输液袋剪碎(或聚丙烯树脂)取2.0 g置于250 mL圆底烧瓶中。向圆底烧瓶中加入80 mL甲苯作为萃取溶剂，煮沸回流1.5 h后停止加热并放置于室温条件下冷却到60 ℃，之后边搅拌边向圆底烧瓶中加入120 mL甲醇，混合后用砂芯漏斗过滤，用适量甲苯和甲醇混合液(40∶60)冲洗玻璃棒、圆底烧瓶和漏斗，合并滤液与洗液并稀释到250 mL，摇匀。取50 mL滤液于蒸发皿中60 ℃水浴挥干，用适量空白溶剂溶解残余物，并定容至5.0 mL，即得。

2 结果

2.1 专属性 取空白溶剂、对照品溶液、供试品溶液按“1.2.1”项下色谱条件进样，记录色谱图。结果供试品溶液与对照品溶液色谱峰的保留时间基本一致，抗氧剂1010(5.9 min)、抗氧剂168(15.9 min)，且分离度均大于1.5，理论塔板数均大于7 000。空白溶剂在相应的保留时间内未检测到色谱峰，本法具有较好的专属性(见图1)。

A：空白溶剂；B：对照品溶液；C：直立式聚丙烯输液袋供试品；D：聚丙烯树脂供试品；标识峰中：1：抗氧剂1010；2：抗氧剂168。

2.2 线性关系 取抗氧剂1010、168对照品适量，精密称定，加空白溶剂溶解并分别稀释成每1 mL中约含0.48 mg的溶液作为抗氧剂1010、168的线性储备溶液。将线性储备溶液依次稀释成抗氧剂1010浓度为2.362、4.724、47.236、236.180、283.416 μg/mL；抗氧剂168浓度为4.724、9.447、47.236、236.180、283.416 μg/mL的线性溶液。按“1.2.1”项下色谱条件进样，记录色谱图。以浓度为横坐标，峰面积为纵坐标，进行线性回归。表1的结果显示：抗氧剂1010与抗氧剂168分别在2.362～283.416 μg/mL，4.724～283.416 μg/mL浓度范围内，呈现良好的线性关系。

表1 抗氧剂1010、168的回归方程与相关系数

2.3 检测限与定量限 取“1.2.4”项下混合对照品溶液加空白溶剂稀释，按“1.2.1”项下色谱条件进样，记录色谱图，当信噪比S/N约为4∶1时，抗氧剂1010、抗氧剂168 的检测限分别为0.945、1.890 μg/mL。当信噪比S/N约为10∶1时，抗氧剂1010、抗氧剂168的定量限分别为2.362、4.724 μg/mL。

2.4 重复性试验 精密称取同一批供试品(批号：D25210612)6份，按“1.2.5”项下方法制备供试品溶液，按“1.2.1”项下色谱条件进样，记录色谱图。抗氧剂1010和抗氧剂168含量测定结果的RSD分别为2.14%和3.71%。

2.5 中间精密度试验 在不同时间，由不同人员分别精密称取同一批供试品(批号：D25210612)6份，按“1.2.5”项下方法制备供试品溶液，按“1.2.1”项下色谱条件分别用LC-2010AHT高效液相色谱仪(日本岛津公司)与SPD-20A高效液相色谱仪(日本岛津公司)进样，记录色谱图。抗氧剂1010和抗氧剂168两次含量测定结果的RSD分别为2.22%和3.57%，表明方法具有良好的准确度和精密度。

2.6 稳定性试验 将“1.2.5”项下供试品溶液放置于室温下，分别在0、6、12、18、24、30、48 h按“1.2.1”项下色谱条件进样，记录色谱图。结果抗氧剂1010和抗氧剂168峰面积的RSD分别为3.25%和4.37%，抗氧剂1010和抗氧剂168溶液在48 h内基本稳定。

2.7 回收率试验 取上述重复性考察项下的供试品，分别加入“1.2.3”项下对照品储备溶液适量，按“1.2.5”项下方法操作，分别制成低、中、高三个系列混合溶液。每个浓度平行制备3份，按“1.2.1”项下色谱条件进样，记录色谱图。计算样品回收率(见表2)。

表2 抗氧剂1010、168的平均回收率和相对标准偏差

2.8 样品的测定 取9个不同批号的直立式聚丙烯输液袋，按“1.2.5”项下方法制备供试品溶液，测定峰面积并计算含量，单个抗氧剂含量均不超过0.10%,且抗氧剂总量均不超过0.15%(见表3)。

表3 直立式聚丙烯输液袋中抗氧剂含量测定结果(%)

3 讨论

3.1 检测波长的选择 欧洲药典中对检测波长没有明确的规定，本研究分别取一定质量浓度的抗氧剂1010、抗氧剂168以及其混合溶液在200～400 nm波长范围内进行扫描，发现抗氧剂1010在276 nm处、抗氧剂168在271 nm处、混合溶液在276 nm处有强吸收带。参考文献[13-15]本实验取“1.2.4”，“ 1.2.5”项下对照品溶液和供试品溶液分别在270、276、280 nm处进行测定。结果表明：在280 nm处，测得杂质峰少，样品分离度好，更有利于检测。故选择280 nm为检测波长。

3.2 流动相的选择 欧洲药典中流动相为乙腈-四氢呋喃-水(60∶30∶10)，本研究分别以乙腈、乙腈-甲醇(1∶1)、甲醇、乙腈-四氢呋喃-水(63∶30∶7)为流动相，结果表明：流动相为乙腈-四氢呋喃-水(63∶30∶7)时，待测物峰型好，分离度均达到1.5以上，且出峰时间适中。故选择乙腈-四氢呋喃-水(63∶30∶7)为流动相。

3.3 样品处理方法的选择 本研究以甲苯作为提取溶剂，分别对供试品超声1.0、1.5、2.0 h，加热回流1.0、1.5、2.0 h，结果表明：采用加热回流作为提取方法，提取效果更好更完全且加热回流1.5 h后，待测物可基本被完全提取。故选择加热回流1.5 h作为提取方法。

3.4 聚丙烯输液袋中抗氧化剂的含量测定方法 目前对直立式聚丙烯输液袋质量研究的报道很少。且经联机检索，未查询到直立式聚丙烯输液袋在境外批准上市的信息。国内直立式聚丙烯输液袋虽已批准多年，但未见颁布国家药包材标准。本研究可为直立式聚丙烯输液袋在生产加工过程中加入合理用量的抗氧剂提供参考，使其在提高输液袋稳定性的同时不会影响制剂安全。

本文建立了一种测定直立式聚丙烯输液袋中抗氧剂1010、168含量的高效液相色谱方法，可为直立式聚丙烯输液袋的质量控制提供科学依据。