血清LDH、ADA及EBV-DNA对儿童传染性单核细胞增多症的诊断价值分析

张 云 李寿军 周 星 卜晓敏

江苏省仪征市人民医院儿科 211400

EB病毒属于嗜人外周血B淋巴细胞的DNA病毒，能够诱发淋巴瘤、鼻咽癌、IM等临床疾病，因该病毒引发的血液系统疾病极为常见，且其引发的疾病性质多为恶性[1]。IM发生后，早期无典型临床表现，且经流行病学调查研究表明，全球感染过该病毒的群体高达90%，在儿童被感染者中，该病毒会存在4d到半个月的潜伏期，且多数患者在发病时仅会出现上呼吸道症状，仅有少数患者会延发为IM[2-3]。虽多数患者在患病后预后较佳，但也存在部分患者会延发为嗜血综合征等并发症，对其生命安全造成威胁。故对该疾病的早期诊断与治疗至关重要。目前，临床对该疾病的诊断主要是通过测定EBV-DNA完成。但受 EBV潜伏期较长影响，早期会出现无法检出的情况，故为了提高疾病早期检出率，探究其他生化指标的测定势在必行。LDH属于糖酵解以及糖异生过程中的重要参与酶，而ADA是核酸代谢酶，现为探究将这两项指标与EBV-DNA联合应用于该疾病中的具体诊断价值，特对2018年1月—2022年4月间在我院接受治疗的IM患儿70例以及同期在我院接受体检的健康儿童70例进行上述三种指标的联合测定，并对测定结果进行总结分析，现汇总如下。

1 资料与方法

1.1 临床资料 选取2018年1月—2022年4月我院接受的儿童IM患儿70例为观察组。再选取同期在我院接受体检的健康儿童70例为对照组。本研究在院伦理委员会通过并批准。观察组中男38例，女32例，年龄4～12岁，平均年龄(8.01±0.34)岁；对照组中男37例，女33例，年龄4～12岁，平均年龄(7.98±0.33)岁。两组患儿基础资料对比差异无统计学意义(P>0.05)。参与此次研究的患者及其家属均对研究过程知情且同意。纳入标准：(1)与《诸福棠实用儿科学》[4]中该疾病诊断标准相符；(2)入组前未接受免疫抑制剂、抗感染等相关治疗；(3)EBV特异性抗体阳性。排除标准：(1)合并恶性肿瘤、免疫系统疾病、血液系统疾病者；(2)合并咽峡炎、扁桃体炎、肺炎等其他炎性疾病者；(3)非EB病毒引发的疾病者。

1.2 方法 两组患儿均在入院1d内/入组时对其进行空腹静脉血的采集，采集2份血液标本，第1份采集量在3～5ml，第2份采集量为2ml。将采集的3～5ml血液置入含乙二胺四乙酸抗凝剂的试管中进行充分混匀后送检。将血液标本放置到低速自动平衡离心机(长沙湘智离心机仪器有限公司生产的TD24-WS)中，在10cm半径，4℃，3 000r/min的条件下进行持续15min的离心。将离心后的标本进行血清提取，并将提取出的血清放置到-80℃的超低温冰箱中进行保存准备ADA指标以及LDH指标的测定，并在2d内完成相关指标的测定。其中，ADA指标的测定在全自动生化分析仪(雅培Aeroset)中完成，采用宁波美康科技有限公司提供的测定试剂盒，测定方法为过氧化酶法；LDH指标的测定是在AttuneCytPix 流式细胞仪(赛默飞世尔科技有限公司)中完成的，采用上海雅吉生物科技有限公司提供的DTNB速率比色法测定试剂盒，测定方法为速率比色法。

将采集到的2ml血液置入含乙二胺四乙酸抗凝剂的试管中抗凝后，将其放置到含有淋巴细胞分离液的试管中，将该试管放置在离心机中，在18cm半径，2 000r/min的条件下进行持续20min的离心。离心完成后，对白细胞层进行提取至1.5ml的离心管中，再将离心管放置在离心机中，在10cm半径，12 000r/min的条件下进行持续5min的离心。离心完成后，将上清液弃去，将DNA 提取液加入沉淀物中，并通过c1000荧光定量PCR仪(南京贝登电子商务有限公司)以及默克DNA试剂盒[西格玛奥德里奇(上海)贸易]进行EBV-DNA指标的测定，测定方法为荧光PCR技术。

1.3 观察指标 对比两组间EBV-DNA阳性率以及LDH以及ADA水平。通过Pearson相关分析LDH、ADA及EBV-DNA三项指标之间的相关性。通过ROC曲线计算LDH、ADA及EBV-DNA三项指标之间的诊断效能。

2 结果

2.1 两组EBV-DNA阳性率对比 观察组EBV-DNA阳性率高于对照组(χ2=124.559，P=0.000<0.05)。见表1。

表1 两组EBV-DNA阳性率对比[n(%)]

2.2 两组LDH、ADA水平对比 观察组LDH、ADA水平均高于对照组(P<0.05)。见表2。

表2 两组LDH、ADA水平对比

2.3 LDH、ADA及EBV-DNA三项指标之间的相关性对比 LDH、ADA及EBV-DNA三项指标之间存在相关性(P<0.05)。见表3。

表3 LDH、ADA及EBV-DNA三项指标的相关性对比

2.4 LDH、ADA及EBV-DNA三项指标之间的诊断效能 ROC曲线表明，EBV-DNA以703.22copies/ml为临界值时，诊断效能最高，再依次为ADA、LDH。详情见表4及图1。

表4 LDH、ADA及EBV-DNA三项指标诊断效能对比

图1ROC曲线

3 讨论

IM由支原体、腺病毒、巨细胞病毒以及EB病毒等多种病原体感染诱发的传染性自限性疾病，以儿童以及青少年为主要高发群体[5]。其中，EB病毒是诱发该疾病发生的主要致病菌，以外周血异型淋巴细胞增多、肝脾肿大、淋巴结肿大以及发热为典型临床表现[6]。多数患者还会伴有上呼吸道感染症状以及轻度咽炎，少数患儿还会伴有噬血细胞综合征、溶血性贫血、血小板减少性紫癜等血液系统疾病，突发性耳聋、视神经炎、脑炎等神经系统疾病，并可能会出现呼吸道梗阻、喉头水肿、肺炎、心肌炎等并发症。故为保障患儿的预后，早期的诊断与治疗至关重要[7-8]。

本文结果表明，观察组EBV-DNA阳性率以及LDH、ADA水平高于对照组(P<0.05)；LDH、ADA及EBV-DNA三项指标之间存在相关性(P<0.05)；ROC曲线表明，EBV-DNA以703.22copies/ml为临界值时，其诊断IM患儿的特异性为0.949、敏感性为0.897，诊断效能最高，之后依次为ADA、LDH。结果证实血清LDH 、ADA及EBV-DNA联合应用在IM患儿的疾病诊断中具有较高的临床价值。这与胡杰等[9]的观点一致。结合本文结果进行分析，ADA参与了嘌呤核苷代谢过程，是将腺嘌呤核苷催化成次黄嘌呤核苷，再在核苷磷酸化酶的辅助下转化成次黄嘌呤，以尿酸为代谢缓和终产物[10-11]。因此，在机体的不同组织中均有其存在，但以淋巴细胞、脾、胸腺处存在量更大，以骨骼肌、肾、肺、肝处含量较少；该指标在淋巴细胞的成熟、分化以及增殖过程中具有所参与，且主要参与T 淋巴细胞的活化过程，属于该淋巴细胞的非特异性指标之一[12-13]。且该指标还与机体细胞免疫活性具有较大的关系，通过与体液、血液中该指标及其同工酶的测定，可有效对疾病进行鉴别诊断；而在IM疾病中，由于该疾病由EBV 感染引发，而EBV基因是由B 淋巴细胞携带，并对相应的抗原做出表达，故会对 T 淋巴细胞刺激而引发其异常的分化、增殖，故导致ADA水平急剧增加[14]。因此，EBV-DNA指标在诊断IM患儿方面具有较高的特异度和灵敏度。而LDH 属于酶类物质，参与了糖酵解与对丙酮酸以及乳酸的催化之间氧化还原反应，其在机体任何组织细胞胞质内均存在，但在肾脏组织中分布最广，能够用于恶性肿瘤以及肝脏疾病的鉴别诊断[15]。在IM疾病中，EB病毒结合B 淋巴细胞上的 EBV 受体，进而导致B 细胞在受到感染后，其表面抗原发生改变，诱发了T 细胞异常活性，对B细胞造成杀伤，进而对组织造成损害，诱发LDH水平急剧增多。

综上所述，在IM的诊断中，EBV-DNA、LDH及ADA具有较高的诊断效能，应用价值显著。