新疆某鸡场马立克氏病的实验室诊断及发病原因和场后消毒措施

2022-12-14李虎邢潇月张家浩刘祥杰李莲瑞

中国动物保健 2022年11期

李虎，邢潇月，张家浩，刘祥杰，李莲瑞*

（1.塔里木大学动物科学与技术学院新疆阿克苏 843300；2.新疆生产建设兵团塔里木畜牧科技重点实验室新疆阿克苏 843300；3.新疆生产建设兵团塔里木动物疫病诊断与防控工程实验室新疆阿克苏 843300）

鸡马立克氏病（marek's disease）又名神经淋巴瘤病（neurolymphomatosis），是由马立克病毒引起的一种淋巴组织增生性疾病，特征表现出外周神经、性腺、虹膜、全身各脏器器官、肌肉和皮肤等淋巴样细胞组织增生、浸润和形成肿瘤性的病灶[1]。马立克氏病是一种肿瘤性的疾病，在感染初期到发病时有很长一段时间的潜伏期。在临床上根据症状和发生病变位置的不同，分为内脏性、神经型、皮肤型和眼型[2]。本病易感动物是鸡，病鸡和带毒鸡是本病的传染源，病鸡脱落的带毒羽毛，皮屑常随着尘土伴随着空气传播。马立克氏病毒主要通过呼吸道进入鸡的体内。

1 发病时间和地点

2022 年三月份新疆某肉鸡场，养殖规模12,000 只，在临出栏前24d 突然部分鸡出现精神不振、食欲减退或不食、被毛粗乱，有的鸡拉绿色稀粪，部分鸡关节肿大，鸡卧地不起，呈现大劈叉姿势，每天死亡量在100 只左右。

2 剖检变化

对弱鸡和病死鸡进行检查，鸡呈现大劈叉，其肾脏肿大，有大小不一的肿瘤，肝脏和脾脏肿大，心脏外膜有黄白色的肿瘤，腺胃肿大增厚，黏膜出血，浆膜苍白。根据解剖和流行病学特点，初步认定为鸡马立克氏病。

3 实验室诊断

取三只病死鸡的心、肝、脾和肾组织，把采集的病料进行实验室诊断，做进一步诊断。

3.1 病料的处理

把每只病鸡的心肝肾脾组织各取一小块放入1.5mL 的离心管中，共计3 个，加入1,000mL生理盐水，放入破碎机进行研磨后取上清，用DNA/RNA 双提试剂盒提取后放于-20℃保存。

3.2 荧光定量PCR 检测

使用鸡马立克氏病核酸检测试剂盒进行检测，用提取好的DNA 作为PCR 模板。加入模板DNA 5μ L、PT-PCR 反应液10μ L、酶反应液0.8μ L、引物探针混合物1.6μ L、无菌无核酸酶水2.6μ L，反应总体积25μ L。扩增参数：预变性95℃3min，变性95℃5sec，退火/延伸55℃40sec，选择荧光素FAM 为信号采集通道，淬灭集团None，染料矫正None。得到结果（图1）：

图1 鸡马立克氏病核酸检测

结果判定：阴性对照无Ct 值并且无扩增曲线，阳性对照的Ct值应＜21，并出现典型的扩增曲线。如阴性和阳性对照不满足以上条件，此次实验视为无效。阴性：无Ct 值，且无特征性扩增曲线，表明样品为阴性。阳性：Ct 值≤37.0，且出现典型的扩增曲线，表示样品为阳性。依据结果判定三只鸡均为阳性。

在了解厂区的环境和疫苗免疫情况后，了解到鸡场在上一批次鸡出栏时没有对鸡舍进行彻底的消毒，鸡舍内有大量上批次鸡羽毛，也没有对器具和地面进行彻底的清扫，随即对环境进行采样检测，环境采样检测方法同上。得到结果（图2）：

图2 环境马立克氏病核酸检测

诊断结果：判定方法同上。在检测环境羽毛样品中，结果显示为阳性。

4 结果

根据病鸡发病情况、临床症状、剖检变化和实验室诊断判断新疆某肉鸡场发病为马立克氏病。

5 消毒

确定病情之后养殖场迅速做出反应，马上对鸡场病鸡弱鸡进行淘汰处理，病死鸡进行无害化处理，对鸡舍进行全面消毒处理。清扫鸡舍灰尘和羽毛，集中焚烧。对鸡笼等金属器具进行火焰消毒，料槽等塑料制品用3%氢氧化钠冲洗干净后晾晒一周，对墙壁和地面用高压水枪冲洗。由于是冬天，畜舍环境温度较低，影响消毒剂效果，要对畜舍进行升温处理，在畜舍达到25℃后采用甲醛溶液进行熏蒸消毒。密闭鸡舍，1～2d 后打开鸡舍的门窗进行通风。

6 讨论

在了解肉鸡场的免疫情况和环境检查后，发现鸡场在上一批鸡出栏后没有对鸡舍进行彻底的清扫和消毒处理，在鸡舍留有较多的上批次鸡毛，鸡场养殖方式为平养，在漏缝地板上面发现了很多鸡的粪便和羽毛，风机开启时明显感觉鸡舍内有较大的灰尘，导致这一批次鸡感染。在患病肉鸡的毛囊和皮肤黏膜中含有马立克氏病毒，随着空气的流通，健康鸡呼入后会出现感染的情况，感染后的鸡继续在环境中排放马立克病毒。因此，鸡场没有彻底的清扫和消毒是导致这次发病的主要原因。养殖户堆粪的位置在鸡舍门口，严重不符合要求，应在鸡场下风口距离鸡场200m 以上的地方进行粪便的处理，防止病毒在鸡群传播。由于现在还没有关于马立克的特效药物，所以在肉鸡养殖过程中，鸡舍的消毒对预防马立克有至关重要的作用，在肉鸡种蛋孵化时，就要对种蛋就行初次消毒，可以用0.1%高锰酸钾溶液进行消毒处理，同时也可以对孵化室进行熏蒸消毒。肉鸡也可以带鸡消毒，由于环境中的灰尘带毒为传播本病的主要方式，为消灭灰尘和病原微生物，一星期最少要进行一次带鸡消毒，在鸡2 周龄的时候可以选择0.1%苯扎溴铵等，在晚上的时候进行喷雾消毒，同时注意关好门窗。冬天消毒时注意畜舍温度，在温度达到25℃使用最佳。在鸡周龄较大时可以使用10%的生石灰水进行鸡舍消毒[3]。空舍消毒时应把鸡舍内所有器具搬出鸡舍，对墙壁地面和屋顶进行冲洗，清理垃圾粪便羽毛等杂物，然后对地面进行火焰消毒，再用0.3%的过氧乙酸进行喷雾消毒，最后用甲醛和高锰酸钾进行熏蒸消毒。同时要注意人员和车辆的消毒。在肉鸡引种时也要严格注意不能从疫区引种。同时在临床上对肉鸡进行疫苗的免疫也是预防马立克氏病毒的重要途径，鸡马立克氏病火鸡疱疹病毒活疫苗、血清Ⅱ型疫苗和血清Ⅲ型疫苗被广泛使用。在免疫疫苗的时候注意要检查疫苗的规格、注意疫苗的免疫操作和喂药抗生素的影响。在对肉鸡记进行免疫接种时，注意针头的更换，防止出现交叉感染。推荐免疫马立克氏病疫苗，在雏鸡1 日龄进行首次免疫，可以达到较好的免疫效果。同时要加强肉鸡的饲养管理，科学养殖。最好是统一管理，全进全出，方便鸡舍的清扫和消毒，在对鸡舍进行全面的消杀后再引进下一批鸡苗，能够降低因为环境卫生导致鸡群免疫力降低而导致的发病。饲料的选择对鸡群健康也有一定的影响，不要随意换料，挑选经济实惠质量高的饲料。对鸡群成长的不同阶段调整鸡舍的温度湿度，给鸡群一个良好的畜舍环境。畜舍的卫生经常打扫，对粪便、积尘和羽毛等及时清理，按时对畜舍进行消毒。