宫颈活检P16和Ki-67蛋白表达在高危HPV感染患者中预测早期宫颈癌的价值

宫颈癌属于当下显著威胁女性生命安全的癌症类型之一，应及早诊治，以提高疗效，改善患者预后。目前，临床预测早期宫颈癌的方法较多，常见如宫颈液基薄层细胞学检测（Thinprep cytologic test，TCT）检查、高危人乳头状瘤病毒（human papillomavirus，HPV）检测、阴道镜检查等[1]。而HPV感染患者被诊断为早期宫颈癌的可能性较高，应引起重视，并结合其他检查项目以明确诊断[2]。近几年随着临床研究的不断深入，宫颈活检抑制基因（P16）和增殖细胞核抗原（Ki-67）蛋白表达在早期宫颈癌诊断中获得了广泛运用，并在一定程度上提高了该病的诊断率[3-4]。基于此，本研究为了进一步分析宫颈活检P16和Ki-67蛋白表达在高危HPV感染患者中预测早期宫颈癌的价值，就我院妇科80例高危HPV感染患者的早期宫颈癌诊断情况进行分析，旨在为临床诊断提供参考，以提高诊断率，使患者及早获得治疗，继而改善预后，降低死亡率。现总结汇报如下。

1 资料及方法

1.1 一般资料 采取回顾性研究法，选取我院妇科2020年1月-2021年1月的80例高危HPV感染患者，年龄27-68岁，平均为（46.54±10.37）岁；孕次1-6次，平均（3.22±1.06）次；产次0-3次，平均为（1.21±1.15）次；已婚62例，未婚有性生活史18例；有生育史55例，无生育史25例。本研究经医院伦理委员会审批通过。纳入标准：①因宫颈接触性出血、阴道流液或宫颈炎就诊，②高危HPV感染，③有性行为，④检查前72h内无阴道灌洗及用药史，⑤患者均对研究内容知晓，并签下同意书；排除标准：①宫颈治疗史；②生殖道急性炎症期与月经期，③妊娠、哺乳期女性，④其他恶性肿瘤；⑤精神疾病、意识障碍。

1.2 方法

1.2.1 高危HPV感染诊断标准 将蘸有少许无菌生理盐水的宫颈刷置于宫颈口，均匀同向旋转几圈后抽出，折断宫颈刷柄，刷头置于洗脱管内，旋紧管盖，做好标签，直立放于-20℃冰箱中保存待测。运用HPV核酸扩增分型检测试剂盒（凯普生物化学科技公司）与HybrMax医用核酸分子快速杂交仪检测15种高危型HPV亚型（HPV16、18、31、33、35、39、45、51、52、53、56、58、59、66、68），步骤为：分离提取样本HPV-DNA，反向PCR扩增，导流杂交，显色。经标准程序化处理后，根据有无斑点判定结果：所有高危型HPV亚型中出现任意1种或多种阳性，视为高危HPV-DNA阳性，诊断为高危HPV感染[5]。

1.2.2 宫颈活检P16和Ki-67蛋白 所用标本以10%甲醛溶液固定，苏木精-伊红染色，经显微镜观察后选取。运用免疫组化方法进行检测，经固定、石蜡包埋、切片、苏木精-伊红染色后于光镜下进行细胞形态观察，判断P16、Ki-67的阴阳性，试剂盒为福州迈新公司生产的免疫组化试剂盒，严格按照试剂盒说明书操作。运用免疫组织化学法染色，滴加辣根过氧化物酶显色，苏木素轻度复染，光镜下观察，以磷酸盐缓冲液代替一抗作阴性对照。P16判定标准：细胞核或细胞质出现棕黄色颗粒为阳性细胞。Ki-67判定标准：细胞核出现棕黄色颗粒为阳性细胞。高倍镜下于染色区域随机选取5个视野，计数500个肿瘤细胞，分别计算P16、Ki-67细胞阳性率，阳性细胞数为细胞表达比例，＞5%视为阳性[6]。

1.2.3 组织病理学检测 运用SLC-2000B型光学电子数码阴道镜观察宫颈血管和上皮组织的变化，先行醋酸试验，观察醋白上皮与血管，运用绿色滤镜观察各种血管图像，冻结最佳图像，涂抹复方碘液进行碘试验。于异常部位区活检（包括宫颈上皮基底层的活组织部位），经4%甲醛溶液固定后进行病理检查，诊断结果分为正常/炎症、宫颈上皮内瘤变（cervical intraepithelial neoplasia，CIN）1、CIN2-3、宫颈癌。

1.3 观察指标 ①分析组织病理学诊断结果。②分析宫颈组织不同病变程度的P16和Ki-67蛋白表达阳性率。③以宫颈组织病理学结果为金标准，评价宫颈活检P16和Ki-67蛋白表达在高危HPV感染患者中预测早期宫颈癌的应用价值，计算准确度、敏感度、特异度、阳性预测值、阴性预测值。

1.4 数据处理 运用SPSS21.0软件处理数据，计数资料以%表示，行χ2检验，P＜0.05表示差异有统计学意义。

2 结果

2.1 宫颈组织病理学结果 80例患者中，正常/炎症有3例，CIN1有36例，CIN2-3有25例，宫颈癌有16例。

2.2 宫颈组织不同病变程度的P16和Ki-67蛋白表达阳性率 宫颈组织病理学结果中，正常/炎症、CIN1、CIN2-3、宫颈癌的P16阳性率分别为0%、69.44%、92.00%、100.00%，正常/炎症、CIN1、CIN2-3、宫颈癌的Ki-67阳性率分别为0%、75.00%、96.00%、100.00%。见表1。

表1 宫颈组织不同病变程度的P16和Ki-67蛋白表达阳性率[n(%)]

2.3 宫颈活检P16和Ki-67蛋白表达预测早期宫颈癌的应用价值 以宫颈组织病理学结果为金标准，经计算，P16表达预测早期宫颈癌的准确度、敏感度、特异度、阳性预测值、阴性预测值分别为80.00%、73.58%、92.59%、95.12%、64.10%，Ki-67表达预测早期宫颈癌的准确度、敏感度、特异度、阳性预测值、阴性预测值分别为83.75%、76.92%、96.43%、97.56%、69.23%，联合检验预测早期宫颈癌的准确度、敏感度、特异度、阳性预测值、阴性预测值分别为91.25%、85.42%、100.00%、100.00%、82.05%。见表2。

表2 宫颈活检P16和Ki-67蛋白表达与宫颈组织病理学结果比较(n)

3 讨论

宫颈癌为妇科常见的恶性肿瘤，患病率高，位居女性恶性肿瘤的第二位（仅次于乳腺癌）[7-8]。统计数据显示，我国每年新诊断的宫颈癌患者人数约占全球该病患者人数的25%[9]。而且该病的发病年龄呈年轻化发展趋势，年轻化已成为宫颈癌防治工作面临的新的严峻挑战。该病的病灶主要位于宫颈阴道处或上皮细胞交汇部位，其发生和发展是一个多步骤、多因素的繁杂过程，其癌前病变过程漫长，从癌前病变发展为宫颈癌的时间约为10年，主要可以分为如下几个阶段：低级别上皮内瘤变—高级别上皮内瘤变或原位癌—微小浸润癌—浸润癌[10]。早期发现癌前病变并予以有效治疗则有可能治愈，而局部晚期患者的治疗效果较不理想，存活率低（5年存活率不超过40%），复发者的存活率更低（不超过30%）[11-12]。宫颈癌是唯一能够通过医学干预，降低其发病率和死亡率的恶性肿瘤，尽早发现并积极治疗癌前病变是关键。所以，对该病进行筛查与早期诊断非常关键。

目前已明确高危型HPV感染是诱发宫颈癌癌前病变的主要危险因素。随着相关研究的不断深入，新的筛查技术先后被研发出来，计算机辅助读片技术的使用，让细胞学筛查的准确度得到了很大程度的提升；HPV、TCT的联合应用，能够让宫颈癌及其癌前病变的初筛率得到一定的提高。当前普遍建议，女性应从21岁开始就进行宫颈癌筛查，其中21-29岁的婚育女性应每三年检查1次。筛查项目中，HPV一般不作为常规检查项目，但可用于对非典型鳞状上皮细胞的分型诊断。30-65岁的女性人群，则建议行细胞学、HPV的联合检查，如果两项检查的结果都呈阴性，则可调整检查时间为3-5年一次。宫颈癌的零发病率是不可能的，但过度筛查与治疗也会对女性的身体造成不必要甚至是不可逆的损伤，应引起重视，合理选择筛查方法。

细胞繁衍与细胞死亡之间的动态平衡，对保持多细胞生物组织的自稳定性有着至关重要的作用，一旦这一平衡遭到破坏，则可能引发相关疾病，如细胞繁衍能力异常提升、细胞凋亡抑制等，继而增加癌症的发生风险。P16是细胞繁殖指数，也是调控细胞增生的主要基因[13]。P16定位于9p21，其编码相对分子质量为1.6万。P16蛋白能够通过和同细胞周期依赖性激酶4的竞争结合，继而抑制cyclinD-CDK4复合物的形成，使其有激酶活性降低，使PRB蛋白磷酸化[13-14]。P16对细胞繁衍也有一定的调节作用，能够抑制细胞的繁殖[15]。若P16出现基因突变或缺乏，则CDK4活性增强，细胞分裂加快，最终导致细胞恶性繁殖[16]。Ki-67是一种和细胞周期有关的蛋白质，主要表达于繁衍期细胞的核抗原，基因处于人第10号染色体，Ki-67阳性表达时提示癌细胞呈活跃繁衍状态，且恶性程度越高其表达越强[17]。Ki-67在评估细胞繁衍活性中可发挥显著的指导意义，且敏感度较高，它与细胞有丝分裂相关，也与细胞繁衍有关联[18]。P16、Ki-67对早期宫颈癌的诊断有良好的辅助意义，其表达阳性提示患早期宫颈癌的可能性较高[19-20]。

本研究结果显示，正常/炎症、CIN1、CIN2-3、宫颈癌的P16和Ki-67蛋白表达阳性率出现递增的趋势，提示P16和Ki-67蛋白表达随宫颈组织病变严重程度而逐渐增加。应用价值评价结果显示，P16和Ki-67蛋白表达联合检验预测早期宫颈癌的准确度、敏感度、特异度、阳性预测值、阴性预测值分别为91.25%、85.42%、100.00%、100.00%、82.05%，明显高于单项检验，提示P16和Ki-67蛋白表达在高危HPV感染患者早期宫颈癌的预测中可发挥一定的诊断价值，敏感度、特异度高。

综上所述，宫颈活检P16和Ki-67蛋白表达在高危HPV感染患者中预测早期宫颈癌的应用价值高，值得推广。