高效液相色谱法测定凉皮中苯甲酸、山梨酸和糖精钠含量

张 斌

（山西省检验检测中心（山西省标准计量技术研究院），山西太原 030000）

凉皮清爽可口、柔软美味，是一种具有地方特色的传统美食，流行于中国北方地区，是不可多得的天然绿色无公害食品。大街小巷均可看见它的身影，受到广大消费者的青睐。但有些生产企业为防止食品腐败变质、延长产品保质期和保持食品的原有风味，盲目非法过量添加食品添加剂。其中，苯甲酸、山梨酸可抑制细菌的生长和繁殖，是目前被广泛使用的价格低廉、毒性低、性能稳定的人工合成防腐剂。糖精钠是一种使用历史很长的合成甜味剂，甜度是蔗糖的几百倍。这些食品添加剂给食品行业带来了极大便利，但长期过量食用此类食品添加剂会破坏人体肠道正常菌群平衡，严重时危害人体肝脏和肾脏健康[1-4]。食品添加剂安全问题备受关注，我国相关部门出台了《食品安全国家标准 食品添加剂使用标准》（GB 2760—2014），明确指出了食品添加剂的使用量以及范围。因此，准确测定凉皮中的苯甲酸、山梨酸和糖精钠的含量非常重要，业内常采用便捷高效的液相色谱法进行测定[5-8]。

1 材料与方法

1.1 材料与试剂

市售凉皮；甲醇（色谱纯）；乙酸铵（色谱纯）；苯甲酸标准溶液（1.00 mg·mL-1，中国食品药品检定研究院）；山梨酸标准溶液（1.00 mg·mL-1，中国食品药品检定研究院）；糖精钠标准溶液（1.00 mg·mL-1，中国食品药品检定研究院）；乙酸锌（分析纯）；亚铁氰化钾（分析纯）；纯化水。

1.2 仪器与设备

戴安U3000高效液相色谱仪（DAD检测器，赛默飞世尔科技公司）；MS105DU电子天平（梅特勒托利多科技有限公司）；EX223梅特勒电子天平（梅特勒托利多科技有限公司）；中科中佳HC-3018高速离心机；舒美KQ-500DE超声波清洗器；德国IKA®MS3漩涡混合器。

1.3 试验方法

1.3.1 样品处理

准确称取试样2 g于离心管中，加入纯水约25 mL，涡旋混匀，50 ℃水浴超声10 min，快速冷却，加入92 g·L-1亚铁氰化钾溶液2 mL与183 g·L-1乙酸锌溶液2 mL，混匀，8 000 r·min-1离心10 min，转移水相至50 mL容量瓶中，再向残渣加入20 mL纯水，涡旋混匀，超声5 min，8 000 r·min-1离心5 min，将水相转移入同一容量瓶中，定容至刻度，混匀，取上清液过0.22 μm滤膜，上机测定。

1.3.2 标准溶液的配制

配制苯甲酸、山梨酸、糖精钠质量浓度均为100 mg·L-1的混合标准溶液。将以上3种添加剂混合标准溶液配制成质量浓度分别为1.00 mg·L-1、5.00 mg·L-1、10.0 mg·L-1、20.0 mg·L-1、50.0 mg·L-1和100 mg·L-1的混合标准工作溶液。

1.3.3 仪器条件

色 谱 柱： 资 生 堂 C18柱（250 mm×4.6 mm，5 μm）；流速：1 mL·min-1；检测器：DAD检测器；检测波长230 nm。

2 结果与分析

2.1 线性考察

由图1可知，苯甲酸、山梨酸和糖精钠30 min内完成测试分析，无杂质峰干扰，目标峰效果良好，峰型对称，分离度高。线性考察发现，各组分线性关系良好，线性方程回归系数均在0.996以上。苯甲酸线性方程为y=0.542 3x+0.004 6，r=0.999 8；山梨酸线性方程为y=0.833 7x−0.000 2，r=0.999 6；糖精钠线性方程为y=0.344 5x−0.001 9，r=0.999 7。

图1 苯甲酸、山梨酸、糖精钠的色谱图

2.2 检出限试验

称取约2 g样品分别加入浓度均为1.0 mg·mL-1的苯甲酸、山梨酸和糖精钠标准溶液0.01 mL，按1.3.3方法处理上机测试，3种色谱峰高度均大于其3倍噪音，故样品中苯甲酸、山梨酸和糖精钠的检出限均为 0.005 g·kg-1。

2.3 加标回收试验

称取样品9份，苯甲酸、山梨酸、糖精钠按方法定量限、中间限、最高限3个水平进行回收率试验。每个试验同一水平进行平行3次试验，加标后的9份样品按1.3.2方法处理，按1.3.3上机测试，计算方法的回收率，具体加标量及回收率见表1。试样中3种添加剂组分定量限、中间限、最高限3种浓度水平的回收率为90.47%～107.63%，RSD为0.54%～4.66%。

表1 苯甲酸、山梨酸、糖精钠的回收率试验结果

2.4 精密度试验

称取阴性样品1份，苯甲酸、山梨酸、糖精钠按方法中间限加标后按1.3.2方法处理，按1.3.3上机测试，连续测定6次，记录峰面积，计算RSD值，结果见表2。其精密度为0.32%～1.20%。

表2 苯甲酸、山梨酸、糖精钠的精密度试验结果

2.5 部分市售凉皮检测结果

分别从生活周边的流动性摊贩、有固定门面的餐馆和大型商超采购各类凉皮共30批，并用此方法进行检测。发现流动性摊贩所售的凉皮（10批）、有固定门面的餐馆自制的凉皮（10批）中苯甲酸、山梨酸超标使用的情况非常严重，不合格率超50%，糖精钠的含量均符合规定，结果见表3。

表3 市售凉皮检测含量表

3 结论

本试验利用高效液相色谱仪对凉皮中苯甲酸、山梨酸和糖精钠含量进行检测，并进行了包括线性、检出限、精密度、回收率在内的方法学验证，验证结果均符合要求。本文的检测结果可以对相关凉皮的生产厂商起到一定的警醒作用，为广大消费者选择购买凉皮渠道提供参考，为规范食品添加剂市场秩序提供技术支持，切实保障公众饮食健康安全。