抗角蛋白抗体、抗核周因子、葡萄糖-磷酸异构酶联合检测在类风湿关节炎临床诊断中的应用价值

杨春秋，王俊杰，邹 瑞

(安徽省太和县人民医院/皖南医学院附属太和医院，安徽 阜阳 236600)

类风湿关节炎(rheumatoid arthritis，RA)属于自身免疫性疾病，在我国有着较高的发病率，在0.32%～0.36%[1]。随着患者病情进展，在2年内可出现无法逆转的骨关节破坏，影响患者关节功能。类风湿因子为RA患者血清中主要的一种自身抗体，是临床中常用诊断RA的标准，但其特异性不高[2]。随着对RA研究不断深入，更多的自身抗体如抗角蛋白抗体(anti keratin antibody，AKA)、抗核周因子(antinuclear factor，APF)也被逐渐应用于临床，为早期诊断RA提供更全面参考依据，可减少了RA致残率[3]。有研究表明，RA患者血液及关节液中的葡萄糖-磷酸异构酶(glucose phosphate isomerase，GPI)均有明显升高，对RA早期诊断参考作用[4]。但在临床中单独实验室指标用于临床诊断均存在一定局限性，因此本文使用AKA、APF、GPI联合检测，分析三者联合检测在RA中的应用价值，以期为临床早期诊断提供新方向。

1 资料与方法

1.1 一般资料2019年3月至2021年3月我院收治的106例RA患者(RA组)，纳入标准：①资料无缺失；②符合美国风湿病学会联合欧洲抗风湿病联盟(ACR/EU-LAR)中的诊断标准[5]。排除标准：①入院前进行非甾体类消炎药、抗风湿药、免疫抑制剂等治疗者；②存在代谢性疾病者；③合并其他脏器肿瘤者。RA组男41例，女65例，年龄40～80岁[(51.65±6.69)岁]，病程2个月至10年[(5.15±1.31)年]，DAS28评分2～12分[(4.16±1.24)分]。RA患者活动性判断标准[6]：①关节肿胀≥6个；②关节压痛≥16个；③红细胞沉降率≥30 mm/h；④晨僵≥45 min；⑤C反应蛋白大于正常上限的1.5倍。RA患者存在①+②同时伴有③、④、⑤三项的任何两项被认为活动(活动期)；不同时满足①+②或仅③、④、⑤一项，被认为不活动或活动度低(非活动期)。其中51例为活动期，55例为非活动期。根据X射线检查结果分为轻度组(轻微关节侵蚀)58例，重度组(严重关节侵蚀)48例。另选取同期收治的非RA自身免疫性疾病患者91例作为非RA组，其中男36例，女55例，年龄39～81岁[(50.71±6.33)岁]，骨性关节炎44例、系统性红斑狼疮31例、干燥综合征9例、强直性脊柱炎7例。两组一般资料比较差异无统计学意义(P>0.05)，具有可比性。

1.2 检测方法入院当日收集入选者静脉血液3 ml待检。间接免疫荧光法进行AKA、APF检测，AKA抗原：大鼠食道中1/3段横切面，APF抗原：正常人即将脱落的颊黏膜上皮细胞，在与入选者血清充分反应后，将荧光素所标记兔抗人IgG抗体加入到血清当中，随后进行观察。AKA试剂为德国欧蒙公司提供，阳性：在荧光显微镜下观察标本角质层呈线性，可见板层状荧光则判定为阳性[7]。APF试剂为北京和杰公司提供，阳性：在细胞质中出现大小不等的椭圆形或圆形的均质荧光颗粒[8]。GPI使用双抗体夹心法进行检测，试剂盒为上海北加生化试剂公司提供，结果判读：≥0.2 mg/L为阳性。

1.3 观察指标①RA组与非RA组AKA、APF、GPI表达。②活动期与非活动期患者AKA、APF、GPI阳性率。③不同病情程度患者AKA、APF、GPI阳性率。④分析AKA、APF、GPI单独及联合检测对类风湿关节炎的诊断价值。

1.4 统计学方法采用SPSS 20.0统计学软件分析数据。计量资料以均数±标准差描述，组间比较采用t检验；计数资料以率或构成比表示，组间比较采用χ2检验。P<0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 RA组与非RA组AKA、APF、GPI阳性率比较RA组AKA、APF、GPI阳性率高于非RA组(P<0.05)。见表1。

表1 RA组与非RA组AKA、APF、GPI阳性率比较 [n(%)]

2.2 活动期与非活动期患者AKA、APF、GPI阳性率比较活动期患者AKA、APF、GPI阳性率高于非活动期患者(P<0.05)。见表2。

表2 活动期与非活动期患者AKA、APF、GPI阳性率比较 [n(%)]

2.3 不同病情程度患者AKA、APF、GPI阳性率比较重度组AKA、APF、GPI阳性率高于轻度组(P<0.05)。见表3。

表3 不同病情程度患者AKA、APF、GPI阳性率比较 [n(%)]

2.4 单独及联合检测对RA的诊断价值AKA+APF+GPI检测诊断RA的灵敏度、特异度、阳性预测值、阴性预测值均高于三因子单独检测(P<0.05)。见表4。

表4 单独及联合检测对RA的诊断价值 (%)

3 讨论

AKA最先于1979年被发现及命名，AKA的把抗体是属于不溶性纤维蛋白，为细胞的骨架成分，在临床中发现AKA抗体的IgG型与RA相关，在RA的诊断效能较好，特异性高[9]。在以往研究中发现，在RA患者中发现AKA抗体阳性率可超过46%，其检测的特异性可高达98%，因此也认为AKA属于RA评估的最特异性生物学指标[10]。有研究发现，有AKA阳性的“健康人群”，后续发展成为RA的概率大，说明AKA对RA早期诊断具有一定的预测价值[11]。APF是在1995年被首次发现，靶抗原主要存在人颊黏膜的角质透明颗粒中，与AKA一样，在早期RA患者中血液中表达可明显升高。以往研究也认为，APF、AKA可作为RA发生的相关指标，对患者疾病进展也有一定的评估作用[12]。本研究发现，APF、AKA在RA患者中阳性率分别为50.94%、53.40%，且活动期患者与关节损伤更严重者APF、AKA阳性率更高，与上述研究相符，说明两者可为RA诊断提供参考。

GPI最于1968年在非球形红细胞溶血性贫血中被发现，GPI在细胞内的作用是促进糖酵解以及糖异生，是此过程中的重要酶类，一旦GPI升高可引发非球形红细胞溶血性贫血，同时对患者时神经细胞也可造成一定损害[13]。GPI通常存在细胞的胞质内，同时也可作为细胞因子或生长因子被分泌于细胞外，诱导机体内髓样肝细胞分化成为单核细胞，对B细胞分化也有诱导作用[14]。有研究发现，GPI可分泌运动因子，对细胞的增殖及迁移有促进作用，使用GPI抑制剂后可抑制运动因子以及酶活性所引起的细胞活动[15]。目前有关GPI与RA与之间的关系尚未明确，但已有研究显示，在RA患者中出现GPI以及GPI免疫复合物升高的现象。同时也有研究表明，使用激光共聚焦显微镜以及免疫组织化学检查发现，在患者的滑膜及关节滑膜的小动脉、毛细血管内均可见GPI高表达，出现此现象可能与血管内皮生长因子有关[16]。在本研究中GPI在RA、活动期RA以及未III～IV期患者中表达明显升高，提示GPI可能参与RA发展，其表达水平与患者病情活动程度有关。同时GPI对RA诊断灵敏度与特异度分别为80.19%、80.22%，对RA诊断灵敏度稍高于APF、AKA检查，但特异度较低。

既往有研究表明，自身抗体、抗原联合检测有助于提高对RA诊断特异性，降低误诊、漏诊率[17～18]。在张利军等[19]研究中也发现，多种抗体联合检测可明显提高对RA诊断特异度，对RA早期诊断及治疗有重要临床意义。本研究通过AKA+APF+GPI联合检测发现灵敏度、特异度、阳性预测值、阴性预测值均在90%以上，说明联合诊断可弥补单项诊断不足，当上述指标出现两种或两种以上阳性时需高度警惕RA。

综上，AKA、APF、GPI联合检测可提高对RA早期诊断效能，为临床提供更全面参考信息，对临床诊疗有一定的指导意义。