牦牛电刺激采精技术及操作规程

李小伟 王燕文 何小强 谭雄 罗志昊

（四川省龙日种畜场 624401）

人工授精是现代生物技术的重要手段之一。由于它能最大限度地发挥优秀公畜种用价值[1]，防止近亲繁殖，加快繁育与生产应用进程，提高种业水平，常被用于动物育种生产实践中，愈来愈受到世界各国的普遍重视。目前动物采精常用方法主要有假阴道法和筒握法，并在牛、羊、猪等家畜上普遍应用。但对于一些野性强、驯化难、性情暴烈、胆小易惊的动物，采用这些方法采精比较困难，不易成功。电刺激采精法获得成功后，弥补了常规方法的局限，被广泛用于其他野生和经济动物的人工采精中，对野生动物遗传资源的保护和利用具有重要意义。

1 电刺激采精技术的原理

电刺激采精是利用低电压小电流交流电刺激动物荐椎部低级神经中枢，引起动物性兴奋并不自觉的射精来达到采精目的。

2 电刺激采精技术的优点

电刺激采精技术在假阴道采精技术基础上又具有更多方面的优越性[2]。一是牦牛为季节性发情动物，假阴道采精法仅能在牦牛发情季节 （一般为6～9月）采精，而电刺激采精法不受牦牛季节性发情的影响，不需要台牛 （发情母牛），可实现全年采精。二是假阴道采精必须对牦牛进行调教，由于牦牛野性强，调教牦牛耗时、费力，同时易对调教人员造成伤害，而电刺激采精不需要调教牦牛，省时、省力。三是假阴道采精时公牛未被保定，而电刺激采精时公牛被保定，不易对采精人员造成伤害。

3 采精前的准备

3.1 场地准备

牦牛电刺激采精一般在巷道圈或配种架进行，以便保定公牛，要求场地宽敞、平坦、清洁、遮阳、通电。

3.2 公牛准备

挑选优质、健康、无遗传疾病、无生殖缺陷的成年公牛，年龄一般4～9岁。将公牛保定在巷道圈或采精平台，用绳索将牦牛的头和两后腿脚踝拴牢保定在固定钢管柱栏上，用牛毛剪剪掉牦牛的腹毛，并用蒸馏水清洗干净公牛的阴囊及其周围，同时清洗干净阴囊内部，擦干水。

3.3 器材准备

主要有电刺激采精器1台 （包括电刺激器和刺激电极棒两个部分，仪器供电：交流220V，电刺激输出电流：≤2A），车载恒温冰箱1台，500ml optidyl稀释液1瓶，蒸馏水，接精杯20个，50ml螺口尖底离心管30个，洗瓶2个，100ml量筒1个，凡士林1瓶，牛毛剪1把，250ml螺口玻璃试剂瓶1个，酒精温度计2支等。

3.4 其他准备

清洗：用蒸馏水将量筒、试剂瓶、离心管清洗3遍，并甩干水分，有条件的可用烘箱将水分烘干。配置精液稀释液：用量筒量取100ml optidyl稀释液注入试剂瓶，再用量筒量取150mL蒸馏水注入试剂瓶内，摇匀后放入34℃的水浴锅中或恒温箱中加热恒温15min左右，用温度计测量稀释液温度，使之达到 34～36℃。

4 电刺激采精操作流程

（1）将电源线一端插入仪器面板插座上，另一端接220V交流电源，将刺激电极棒连线两插头插入 “输出”孔。

（2）在开启 “电源”开关前，应先将右下角控制开关处于中间 “关闭”状态，模式选择为 “手动”，电压档位选择“50V”。

（3）通过电压调节旋钮将起始电压调至10V。

（4）将涂抹有凡士林或肥皂水的刺激电极棒通过牦牛肛门插入直肠后，打开 “电源输入”开关，拨动 “点动”开关，以刺激牦牛荐椎神经。

（5）通过拨动 “点动”开关控制电刺激时间，旋转 “电压调节”按钮控制输出电压，同时密切观察牦牛身体反应。一般电压升高幅度为2V，在每档电压下持续输出6～8s，停留4s左右，重复此过程2次，再逐步升高电压。一般当刺激电极棒插入直肠40～45cm，电压在24～30V即可采出牦牛精液。

5 精液品质检查

5.1 外观检查

采精后先观察精液颜色、体积，正常精液为乳白色液体。公牦牛正常射精量为4～8ml。

5.2 密度与活力检查

精子密度也称为精子浓度，指单位容积 （1ml）所含有的精子数目。精子活力指直线前进运动精子占总精子数的百分率。在显微镜下观察，原精中精子活力≥65%，密度≥6×108个/ml，畸形率小于≤15%时，采集出的新鲜精液才能被制成细管冻精。

6 精液稀释与平衡

6.1 精液稀释

将配置好的稀释液沿杯壁缓慢注入接精杯内，根据原精密度，让稀释后的混合液与原精成一定比例，确保精液稀释后精子密度保持在适宜水平。一般牦牛精液稀释倍数为4～8倍。

6.2 精液平衡

将稀释后的精液沿螺口尖底离心管壁，缓慢注入离心管内。拧紧盖子，竖立放入塑料桶内，盖上毛巾和桶盖，避光室温静置平衡15～30min后，放入4℃车载冰箱内。

7 注意事项

（1）采精时必须密切观察牦牛的射精动作，有的牦牛在电压12V左右就能射精，但也有电压在40V左右才射精。电压不宜超过46V，刺激频率也不宜过快，否则会对牦牛造成身体伤害。

（2）采精频率一般每周不超过2次，最好每周1次。采精前可对牦牛适当补饲精料、微量元素等。

（3）接精时注意观察牦牛阴茎排出的液体，一般最开始会排出一些前列腺液，应弃之，当排出的液体为乳白色时即为精液。

（4）牦牛电刺激采精时会表现出性情暴躁、身体抖动，在接精时精液容易受污染，造成精液品质下降，因此，要防止这种情况发生。