非洲猪瘟实验室审核中存在的问题探讨

2022-11-22莫静华黎剑威黄玉淑何凤愿韦成威

中国畜禽种业 2022年1期

莫静华黎剑威黄玉淑何凤愿韦成威

（广西河池市动物疫病预防控制中心 547000）

非洲猪瘟在中国爆发以来，猪只减产到现在开始复养经历了几年的时间，国家出台了许多相关对策。许多相应机制得以建立与完善，其中许多县级兽医实验室和第三方屠宰企业实验室在经过权威实验室比对实验后也得到授权，允许开展非洲猪瘟实验室检测并出具有效非瘟检验报告；受上级部门委托，笔者有幸参加本市范围内兽医实验室非洲猪瘟自检考核工作；近几年来，笔者曾考核过多个县区级动物预防控制中心、养殖企业、屠宰企业等兽医实验室，笔者发现，这些兽医实验室普遍存在一些问题，在此，笔者分别从5个方面进行探讨，对出现的问题给出自己的意见与见解。在这里进行总结，供相关人员参考。

1 实验人员存在问题

这部分主要为屠宰企业与第三方机构的实验室人员资质问题，这些实验人员大多是企业老板临时从自己员工中抽调而来，是一些没有相关兽医知识基础，也未经专门培训就直接上岗的屠宰工人。所谓的培训，只是企业在购置PCR仪器时由厂家进行的一次仪器使用培训，此后就直接应急上岗进行实地作业，可谓一边学习，一边干活。鉴于此，本市动物疫病预防控制中心实验室人员多次开展非洲猪瘟理论与实验室检测技术培训。上级相关部门委托本市动物疫病预防控制中心对本范围辖区内的第三方兽医实验室与屠宰企业进行非洲猪瘟比对实验，对于比对结果正确率达不到100%的企业进行通报，不予其正常营业活动，直至考核100%正确。笔者在抽样过程中，检查PCR仪的实验记录时发现，对于实验中出现的明显阳性样品，实验人员竟然无法判断其阴阳性，记录表格仍以阴性结果出具报告。

建议：对于资质问题，笔者更倾向于企业中有相关专业学历为首推人选，但绝非一定，对于好思勤学的人也可胜任这个岗位，经过多次培训与实操，是完全可以熟练掌握这项检测技术，毕竟现在许多商家的试剂都为免抽提，大大降低了技术门槛，而熟练的工作人员可以大大降低人为带来的污染，培训显得尤为重要。尽管培训很多次，但仍存在一些人员不知如何判别阴阳性，这些人员中甚至包括官方兽医人员。

2 仪器问题

部分存在的问题主要是仪器设备消毒问题；在PCR仪器中，未定期进行清理与消毒PCR加热孔，尤其是屠宰企业几乎天天杀猪，有些抗凝血血迹甚至飞溅入PCR加热孔中，有些孔底布满灰尘。使用完的枪头随意丢弃，没有打入带有消毒药水的废弃缸中，很容易造成污染。第二个普遍问题是紫外灯，在检查时发现，一些实验室的紫外线灯无法正常工作，有的处于无电状态，紫外灯只是摆设与应付检查之用；再就是有些紫外灯悬挂较高，甚至钉在屋顶，这样紫外灯的灭菌消毒效果大打折扣，还有些实验室甚至没有紫外灯，无消毒意识。

建议：第一，所用枪头应购置带有滤芯的，这样可以大大降低样品间的污染，使用后的枪头要打入废弃缸中，缸中要泡有含氯消毒液。第二，定期使用75%酒精和含氯消毒液对PCR仪器、移液器等重要仪器设备进行擦洗消毒，并保持仪器周边的卫生，维护保养PCR仪。第三，紫外线灯管应保持与桌子、地面最多1.5m范围的高度，建议实验结束后立即打开照射30min，并开窗通风。

3 设备、样品等问题

在检查过程中一个比较常见的问题是试剂盒与样品共用一个冰箱或一个冰柜，留存的大批样品可能会污染检测试剂。还有一些企业甚至使用过期的试剂盒进行实验。每次实验的试剂用量并不大，每次只做几头份，试剂经常从冰箱中取出，做完实验又放回冰箱冷冻，如此反复冻融，在3～5次后试剂会开始失效。

建议：第一，购置两台冰柜或冰箱，一台专门存放试剂，一台专门存放待检样品与留存样品。第二，使用的试剂盒推荐再第一次使用时要分装出多管保存，这样可以避免多次反复冻融对试剂所造成的影响。

4 方法存在问题

当前推荐的方法都是使用荧光PCR的方法检测非洲猪瘟。笔者在检查过程中没有发现还有企业使用胶体金试纸条的情况。试剂盒抽提与免提取问题，笔者看过免抽提的步骤非常简单，甚至有些商家代理吹嘘使用抗凝血离心即可上PCR，无需抽提或裂解，在这里不推荐的，作为一个重要的检测，不应如此简化，这样得到的结果才令人信服。另一个是混样问题，非洲猪瘟刚开始爆发时，有文件规定混检比例为50：1，而现在已更正为20：1；笔者认为，在多个样品混检又不进行抽提的情况下，得出的最终结果不准确。假阴性偏多。另一个问题是由于选择的采血管抗凝剂不同也会影响后续PCR实验，一些抗凝管含有肝素，环境中的消毒剂也是PCR抑制剂，如果不进行抽提可能呈现假阴性情况。

建议：第一，有条件的兽医实验室建议使用抽提方法。第二，对于养殖企业的复养，要降低混检比例，同时进行抽提步骤，可以反映出真实的情况，对后期复养防疫是很重要的参考指标。

5 实验室存在问题

实验室卫生问题，实验室内杂物乱放，尤其是屠宰企业的化验室条件简陋，一台PCR仪器与许多物品放在一张桌子上的问题非常多。另一个问题是实验废弃物处理问题，做完实验后，扩增的PCR管随意处理，使用后的一次性枪头等废弃物随手乱扔，没有进行专门的消毒处理。

建议：第一，进行PCR实验环境非常重要，分子生物学实验室一般都会分为3～4个区域，这样做的目的就是避免各种污染，保证结果的正确，但屠宰场内环境恶劣，进行PCR实验的各种操作没有任何密闭。笔者在培训时告知大家如果可能，把一个房间分隔开来，即便没有这样的条件，至少在一张桌子上也应拿一块挡板把PCR仪与其他物品隔离开来，使PCR仪器至少有一个相对隔离的区域，这样被相互污染的情况也会降低。第二，搞好环境卫生，经常开窗通风换气，可有效降低气溶胶产生的污染。