QuEChERS-高效液相色谱—串联质谱法测定番茄中15种农药残留

付玉志 石怀超 郑婷婷 公强

（临沂市检验检测中心 山东临沂 276000）

1 前言

番茄，俗称西红柿，是茄科番茄属的一年生草本植物[1]，原产自南美洲，明朝时期传入我国。番茄果实富含维生素、矿物质和番茄红素，具有独特风味，可生食、煮食、加工制成番茄酱汁或整果罐藏。我国是世界第一大番茄生产国，年产量达450万吨，约占蔬菜年产量的7%[2]。我国的番茄种植区主要集中在山东、河北、河南、江苏、广东、云南等地，已经成为很多地区的支柱产业。例如笔者所在地山东省临沂市费县胡阳镇，2013年，“胡阳西红柿”正式通过农业部地理标志认证[3]，经过十余年的发展，当地番茄种植面积已达2.7万亩，以温室大棚种植为主，品种多达120余种，总产量达2.7万t，产值达19.6亿元[4]。

各级政府部门历来重视农产品质量安全问题，但是近年来，“毒草莓”、“毒生姜”等农产品质量安全事件仍有发生[5]，应当不断加强农药准入监管和用药指导，并规范化地进行产地农产品的质量安全检测。因此，建立蔬菜中多种农药残留的检测方法非常重要[6]。

目前，蔬菜中农药残留的检测方法主要有速测法、色谱法和色谱—质谱联用法[7]。本文以胡阳镇合作社种植的番茄为研究对象，建立15种农药残留的QuEChERS—高效液相色谱—串联质谱检测方法，该方法简单、快速、灵敏度高[8-10]，可满足政府部门对农产品质量安全例行监测和监督抽查的需求。

2 材料与方法

2.1 仪器与试剂

三重四级杆液质联用仪（LCMS-8060，日本岛津公司）；平行研磨仪（E0303S，微思行（北京）科技有限公司）；水浴恒温振荡器（SHZ-82，常州国宇仪器制造有限公司）；电动离心机（TDL-5A，江苏金怡仪器科技有限公司）；涡旋混合仪（MIXER S0200，Labnet公司）；电子天平（YP202，上海津平科学仪器有限公司）。

霜霉威、噻菌灵、抗蚜威、异丙威、甲霜灵、抑霉唑、腈菌唑、异丙甲草胺、腈苯唑、戊唑醇、丙环唑、烯唑醇、噻嗪酮、氟虫脲、氟啶脲15种农药标准物质（浓度100μg/mL，均为液体标准品，农业部环境保护科研检测所，北京坛墨质检科技有限公司）；乙腈、甲酸、乙酸铵（色谱纯，赛默飞世尔科技（中国）有限公司）；AOAC1202提取包（NaAc 1.5g，MgSO46 g）、5 mL AO AC2202净化管（C18 100 mg，PSA100 mg，MgSO4300 mg）（中国农科院农业质量标准与检测技术研究所）；纯净水（杭州娃哈哈集团有限公司）。番茄样品购自临沂市费县胡阳镇合作社。

2.2 样品前处理

称取已制备好的番茄样品15.00 g，置于50 mL离心管中；加入15 mL乙腈，置于振荡器上震荡30 min；加入AOAC1202提取包，剧烈振摇15min；以4 000r/min离心5min，取2mL上清液，置于5mL AOAC2202净化管中，涡旋混合2 min；以4 000 r/min离心5 min后取上清液，过0.22 μm滤膜，装瓶待测。

2.3 标准溶液配制

量取15种农药标准物质各200 μL，分别置于10 mL容量瓶中；用乙腈定容至10 mL，配制成质量浓度为2 μg/mL的混合标准储备液；依据实验需要，用乙腈逐级梯度稀释，得到质量浓度为0.005、0.01、0.05、0.1、0.2 μg/mL的系列混合标准溶液；置于-18℃冰箱中，避光保存。根据测得的结果绘制标准曲线。

2.4 色谱-质谱条件

2.4.1 色谱条件

色谱柱：Diol-HILIC-120色谱柱（2.1 mm×50 mm，1.9 μm）；进样量：3 μL，柱温：40℃；流动相：5 mmoL/L乙酸铵+0.02%甲酸的水溶液（A）和乙腈（B），梯度洗脱条件见表1。

表1 色谱梯度洗脱

2.4.2 质谱条件

离子源：电喷雾离子源（ESI），负离子模式；电喷雾电压：4.0 kV；离子源温度：300℃，碰撞气：氩气（99.999%）；监测模式：多反应监测（MRM）。

用乙腈将15种混合农药标准储备液配制成浓度为0.05 μg/mL的混合标准溶液，进行质谱全扫描，对每种化合物的母离子、子离子、碰撞能量等参数进行优化[11]。选择有代表性的碎片离子作为母离子，进行碰撞能优化，根据其子离子的扫描质谱图，确定最佳的定性离子对和定量离子对[12-13]。优化后的15种农药的质谱参数见表2，总离子色谱图见图1。由图1可见，15种农药的峰型较好，可准确进行定量和定性。

图1 15种农药总离子色谱图

表2 15种农药质谱分析参数

3 结果与分析

按照色谱条件和优化后的质谱条件，对15种农药的混合标准溶液进行测定，分别以质量浓度和峰面积作标准曲线，得到线性方程和相关系数[14]。结果表明，在0.005～0.200 μg/mL浓度范围内，15种农药的线性关系良好，相关系数R2在0.998 5～0.999 9范围内，依据定量离子，对色谱峰的3倍信噪比计算最低检出限[15]。15种农药的回归方程、R2和检出限见表3。

表3 15种农药线性回归方程、R2和检出限

在质谱检测过程中，样品的基质效应经常会干扰对被测物的分析[16]，导致测定结果的精密度和准确度存在误差。为消除基质对测定结果的影响，需采用空白样品基质配制标准混合溶液，添加浓度依次为0.01、0.05、0.10 mg/kg，每个添加水平进行6次平行试验，按照上述步骤进行提取、净化、测定，计算平均添加回收率和相对标准偏差（RSD），结果见表4。番茄中15种农药测定的平均添加回收率在72.2%～117.9%，相对标准偏差RSD在0.54%～8.20%。

表4 15种农药平均回收率和相对标准偏差

（续表4）

4 结论

本文采用QuEChERS法，结合高效液相色谱-串联质谱技术，对番茄样品进行提取、净化和检测。结果显示，15种农药在0.005～0.2 μg/mL浓度范围内的线性关系良好，R2为0.998 5～0.999 9，检出限为0.06～1.12 μg/kg，加标回收率在72.2%～117.9%，RSD＜9%。表明该方法操作简单快速、准确性好、重现性高，适用于上述15种农药残留的定性确征和定量检测。