非小细胞肺癌患者外周血与胸腔积液中淋巴细胞亚群比值的临床价值研究*

刘春霞，肖士滨，刘联斌，黄 刚，郭守俊，李远香，叶宇慧，王小丽

1.赣州市肿瘤医院，江西赣州 341000;2.赣州市立医院，江西赣州 341000

非小细胞肺癌(NSCLC)是肺癌常见的病理类型之一，发生率约占肺癌的80%，因早期无特异性表现，确诊时约有75%患者病情处于中晚期，5年生存率极低，严重威胁生命质量[1-2]。免疫功能紊乱在NSCLC发生、进展中起到重要作用，当机体免疫受抑制或功能低下时肿瘤发生风险更高，而肿瘤进行性生长也会对机体免疫功能造成抑制，形成恶性循环[3-4]。恶性胸腹腔积液是机体系统性或局部性疾病在胸腹膜腔局部免疫反应的表现，也是晚期癌症的严重并发症之一，随着胸腹腔积液的积累，免疫细胞大量被募集，直接影响疾病进程[5]。基于此，本研究对健康者的外周血和NSCLC患者的外周血和胸腔积液进行淋巴细胞亚群检测，分析NSCLC患者外周血与胸腔积液中淋巴细胞亚群比值的临床价值，旨在为临床诊治提供参考。现报道如下。

1 资料与方法

1.1一般资料 选择2020年2月至2022年1月就诊于赣州市肿瘤医院(简称本院)的60例NSCLC患者作为肺癌组，男41例，女19例；年龄42～87岁，平均(61.78±3.46)岁；TNM分期：Ⅲ期27例，Ⅳ期33例；分化程度：高分化15例，中分化26例，低分化19例。纳入标准：(1)凝血功能正常；(2)NSCLC均符合《中华医学会肺癌临床诊疗指南(2018版)》[6]中诊断标准，经组织病理学证实；(3)TNM分期为Ⅲ期、Ⅳ期者；(4)年龄>18岁。排除标准：(1)入组前3个月内接受调节免疫相关药物治疗；(2)患有血液系统疾病；(3)合并自身免疫性疾病；(4)患有精神疾病；(5)患有肝肾功能衰竭；(6)患有严重急慢性感染疾病；(7)其他疾病引起的胸腔积液。另选择同期在本院体检的体检健康者60例作为健康组，男38例，女22例；年龄43～86岁，平均(62.01±3.39)岁。两组各项资料比较差异无统计学意义(P>0.05)。本研究经医学伦理委员会审核批准。两组受检者均签署知情同意书。

1.2方法 采集两组受检者空腹肘正中静脉血2 mL，其中健康组于体检时抽取。肺癌组静脉血于入院第1天抽取，并抽取肺癌患者胸腔积液5 mL，乙二胺四乙酸抗凝。将获取的标本用安徽中科中佳科学有限公司的KDC-1044型低速离心机以1 200 r/min转速离心操作5 min，获取细胞层，置于澳柯玛股份有限公司的DW-86L348型医用低温冰箱中-80 ℃低温保存待检。使用深圳迈瑞公司BricyteE6流式细胞仪及其配套试剂测定淋巴细胞亚群比值：CD3+、CD4+、CD8+T细胞和自然杀伤细胞(NK细胞)占淋巴细胞的百分比，并计算CD4+/CD8+比值。

1.3观察指标 (1)比较两组淋巴细胞亚群检测结果，CD3+、CD4+、CD8+、NK细胞、CD4+/CD8+。(2)评估NSCLC患者外周血和胸腔积液免疫功能的变化。

2 结 果

2.1两组外周血淋巴细胞亚群检测结果比较 肺癌组CD3+、CD4+、CD4+/CD8+水平较健康组低，NK细胞较健康组高，差异有统计学意义(P<0.05)；两组CD8+水平比较，差异无统计学意义(P>0.05)。见表1。

2.2NSCLC患者外周血和胸腔积液免疫功能比较 NSCLC患者胸腔积液的CD3+、CD4+、CD8+、NK细胞水平低于外周血，CD4+/CD8+水平高于外周血，差异有统计学意义(P<0.05)。见表2。

表1 两组外周血淋巴细胞亚群检测结果比较

表2 NSCLC患者外周血和胸腔积液免疫功能比较

3 讨 论

NSCLC的发生与大气污染、吸烟史、既往肺部慢性感染、电离辐射、遗传等因素关系密切，早期可引起胸部胀痛、咳嗽、痰血、低烧等，晚期可致患者食欲下降、呼吸困难、体重减轻、疲乏、咯血等症状[7]。与小细胞癌相比，NSCLC肿瘤细胞生长分裂较慢，扩散转移较晚，恶性程度较高，预后较差[8]。相关研究显示[9]，机体免疫功能缺陷与NSCLC发生、转移、进展密切相关，特别与细胞免疫功能抑制有关。

淋巴细胞是机体主要免疫细胞，减少可致机体抗肿瘤免疫功能下降，可分为NK细胞、B细胞、T细胞及其亚群。T淋巴细胞约占外周血淋巴细胞的70%，主要执行细胞免疫功能，不仅直接杀伤肿瘤细胞，还能活化免疫系统的其他成分，在控制具有免疫原性肿瘤细胞的生长中起到关键作用[10]。CD4+T细胞可促进T细胞、B细胞和其他免疫活性细胞的分化、增生，对免疫细胞间相互作用进行协调，并可分泌干扰素(INF)-β、INF-γ、白细胞介素(IL)-2等细胞因子，在机体细胞免疫应答中起到关键作用[11]。CD8+T细胞是主要组织相容性复合体Ⅰ类分子限制性细胞，主要识别存在于被病毒感染的靶细胞、癌细胞等抗原肽片段结合的复合分子、靶细胞表面上的Ⅰ类分子，抑制NK细胞的杀伤活性，还能分泌IL-13、IL-10等细胞因子，主要介导体液免疫[12]。CD4+、CD8+相互影响，正常情况下处于动态平衡状态，当其比值下降时，细胞免疫的平衡被破坏，则可致机体免疫功能紊乱。NK细胞可在免疫调节中起到非特异性杀伤肿瘤细胞作用，其活化后可迅速分泌粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子、INF-γ等细胞因子，并可调节吞噬细胞功能，也可分泌细胞毒因子，对肿瘤细胞起到杀伤作用，其活性降低是肿瘤细胞出现远处转移、进展的重要影响因素[13]。本研究结果显示，肺癌组CD3+、CD4+、CD4+/CD8+水平较健康组低，NK细胞较健康组高；两组CD8+水平比较，差异无统计学意义(P>0.05)，提示肺癌患者机体存在明显的免疫功能紊乱。原因在于肿瘤组织可分泌IL-10、INF-β等多种免疫抑制因子，可使APC对肿瘤抗原的加工、摄取和提呈降低，阻碍其激活，对CD4+细胞成熟分化形成抑制，造成CD4+细胞数目明显减少，致使免疫诱导和反应效应不足，机体免疫监视作用减弱，影响患者细胞免疫功能[14]。胸腹膜腔是一个相对独立的空间，在肿瘤等因素刺激下，胸腹膜渗出液不断累积，淋巴细胞大量聚集，大量免疫活性分子和细胞存在于微环境内，同时胸腹膜渗出液中存在CD4+细胞聚集，其中Th1类免疫细胞可大量释放INF-γ而发挥抗肿瘤免疫功能[15]。本研究结果显示，NSCLC患者胸腔积液的CD3+、CD4+、CD8+、NK细胞水平低于外周血，CD4+/CD8+水平高于外周血，提示NSCLC患者腹腔局部免疫能力明显低于整体免疫能力。肿瘤细胞微环境内存在多种可抑制CD4+分化、成熟的免疫抑制因子，而CD4+/CD8+降低，CD8+水平升高，使机体进入免疫抑制状态，引起免疫功能紊乱，影响肿瘤细胞的正常清除，促使肿瘤细胞增殖，加速病情恶化。T淋巴细胞被抑制时，NK细胞水平明显升高，其免疫反应增强，表明NSCLC体内细胞免疫功能可能激活并促进NK细胞增殖。本研究尚存在观察指标偏少、未分析淋巴细胞亚群与NSCLC患者预后之间的关系、未纳入样本量偏小、未分析两组患者淋巴细胞亚群的质量、数量等、未与他人研究结果对比等不足，可能对研究结果可信度及准确性造成影响，后期仍需加大样本量深入研究，旨在为临床提供更为可靠的参考。

综上所述，NSCLC患者外周血中淋巴细胞亚群比值明显下降，腹腔局部免疫能力明显低于整体免疫能力，动态监测胸腔积液中淋巴细胞亚群比值有助于评估患者免疫功能。