种鸡场沙门氏菌监控方法*

2022-11-05赵玮郭龙宗李燕张孝兰王雪梅石海春侯珍珍徐东红

家禽科学 2022年8期

赵玮，郭龙宗，李燕，张孝兰，王雪梅，石海春，侯珍珍，徐东红

（山东益生畜牧兽医科学研究院，山东烟台 264680）

沙门氏菌在自然界中分布十分广泛，能够引起家畜、家禽以及其它动物发生急性、慢性或隐性感染。在公共卫生学中，沙门氏菌也占有重要地位，能够感染人并导致呕吐、腹泻等中毒症状，重症者甚至死亡。因此，沙门氏菌可严重威胁人类健康，给养禽业发展埋下重大隐患。近几年来沙门氏菌感染越来越严重，存在于养殖、产品销售等各个环节，造成很大经济损失，因此及早发现沙门氏菌并采取防治措施，有利于提高畜禽养殖的经济效益。

在养殖场中控制沙门氏菌感染，首先要保证它的上一代种鸡处于沙门氏菌阴性状态，因此维持种鸡场沙门氏菌阴性状态至关重要，这就需要我们对种鸡场进行程序化的监控，及时掌握种鸡群的健康状态。鸡群感染沙门氏菌的途径有两个，一个是经种蛋传播，即垂直传播；另一个是经呼吸道或者消化道进入鸡体内，即水平传播。在种鸡场，较为常见的致病性沙门氏菌群主要是B、C、D群沙门氏菌，例如：D群的鸡白痢沙门氏菌，垂直传播能力较强，也能够水平传播，垂直传播能力大于水平传播；D群的肠炎沙门氏菌，具备较强的水平与垂直传播能力，水平传播能力大于垂直传播；B群的鼠伤寒沙门氏，既能够垂直传播也能够水平传播；C群的肯塔基沙门氏菌，在种鸡场环境、种鸡泄殖腔拭子中较为常见，垂直传播能力相对较弱。在种鸡场监测时，我们主要关注对鸡群影响较大的鸡白痢沙门氏菌、肠炎沙门氏菌、鼠伤寒沙门氏菌及肯塔基沙门氏菌，通过合理的监测和防控来维持种鸡场沙门氏菌的阴性状态。

1 种鸡场沙门氏菌监测的主要方法

1.1 血清学检测

沙门氏菌抗体检测可以使用平板凝集或者ELISA方法进行。不同品种的鸡血清可能对沙门氏菌抗原有一定干扰，造成假阳性。我们把血清稀释后平板凝集与ELISA检测结果相对比，发现血清8倍稀释后与ELISA检测结果吻合度较高，也可排除一部分假阳性的干扰，因此可以采用血清8倍稀释后进行平板凝集的方法对鸡群沙门氏菌进行评估，检测频率一般为3周一次。对检测为阳性的鸡再进行病原分离、培养、鉴定，最后确定血清型。

1.2 与垂直性传播相关样品检测

主要通过检测种鸡泄殖腔、公鸡精液和种鸡产品来评估种鸡的健康状况。以上样品采用常规生化鉴定方法或PCR方法进行病原检测，一般以常规生化鉴定法为主，将常规生化鉴定法的结果作为金标准。对于污染性样本如泄殖腔、胎粪、死胚等，可再用PCR方法检测存在假阳性和假阴性结果。若有阳性将追溯种鸡。

1.2.1 种鸡泄殖腔检测一般用棉拭子采集泄殖腔，对泄殖腔拭子进行常规生化鉴定方法检测病原。该方法与鸡只是否排毒、样品采集是否合格息息相关，鸡只不排毒的时候一般检测不到，样品采集不合格的时候也会呈现一个阴性结果，所以通过泄殖腔拭子检测容易出现假阴性结果。为有效评估鸡群感染状况，必须要保证泄殖腔样品合格并要经过多次采样检测。

1.2.2 种公鸡精液检测产蛋鸡群中，精液检测较为重要。如果精液检测为阳性，则产蛋期母鸡在人工受精或自然交配时很容易感染，因此鸡群开产前对精液进行沙门氏菌检测是有必要的。

1.2.3 种蛋检测主要是检测蛋黄，蛋表面也可以检测，但是首先要排除是否为环境污染造成。

1.2.4 种鸡后代1日龄雏鸡和孵化18 d落盘死胚（也称为毛蛋）检测主要是检测卵黄囊，能够有效评估种鸡的沙门氏菌感染状况。

1.2.5 种鸡后代1日龄雏鸡胎粪检测，同时也可以检测雏鸡运输盒的垫纸检测胎粪、垫纸时要排除外界环境污染的可能性。

上述与垂直性传播相关样品检测中，从检出率高低来看：毛蛋检出率较高，依次是泄殖腔拭子、胎粪，雏鸡卵黄囊、种蛋、精液中检出沙门氏菌的比例最低。毛蛋、胎粪、泄殖腔拭子能够较早的检测到沙门氏菌，因此能够及时对种鸡发出预警。一般鸡群阳性比例较高时，才能在雏鸡卵黄囊中检测到沙门氏菌。从我们分离到的沙门氏菌菌株血清分型结果来看：毛蛋、雏鸡、种蛋中使用常规生化鉴定方法能够检测到鸡白痢、肠炎沙门氏菌、鼠伤寒沙门氏菌，主要是以肠炎沙门氏菌为主。胎粪、泄殖腔拭子中沙门氏菌的类别较多，B、C、D群都有，以B、D群中的肠炎沙门氏菌、鼠伤寒沙门氏菌为主，C群沙门氏菌少一些，主要以肯塔基沙门氏菌为主；白痢在污染物如泄殖腔拭子、胎粪中很难检测到，特别是白痢在泄殖腔拭子、胎粪中不是优势菌群时，容易被其它细菌掩盖，不易分离到，这与白痢的生长特性有关。在对垂直性传播样品中检测沙门氏菌的方法能够有效识别出正在排毒的鸡只。

1.3 日常病死鸡的病料检测

鸡场每天都会对死亡鸡只进行剖检，在剖检过程中将有疑似沙门氏菌病变（如肝脏有白色坏死点、卵巢液化或卵巢炎等）的病死鸡，无菌取肝、卵巢等组织进行沙门氏菌分离鉴定。该方法能够有效确定感染的阳性鸡舍，特别是笼养鸡舍，能够识别出感染沙门氏菌的阳性区域。

1.4 种鸡场环境检测

1.4.1 鸡舍内环境检测主要包括垫料（主要针对平养鸡群）、笼具、料槽、水线、风机、粪道/带等检测。垫料取样时要对鸡舍进行多点位采集，笼具、料槽、水线取样点要分布到鸡舍的前、中、后端，风机、粪带/道采集面积要尽可能大，鸡舍环境一般用约（30×30）cm大小的无菌略湿润的纱布进行采样，以保证大面积采样。种鸡场可1月检测1次。

1.4.2 鸡场内苍蝇、甲壳虫、老鼠等有害生物检测有害生物作为传播媒介，有携带和传播沙门氏菌的可能，可以每半年抽检1次，苍蝇、甲壳虫每次采集20只以上，老鼠视情况送检，也可以清场后送检老鼠3～5只。

1.4.3 鸡场中水的检测可每半年对鸡场的水源抽检沙门氏菌一次。

总之，从目前来看，环境中沙门氏菌的种类较多，分离到的沙门氏菌以C、D群为主，C群的比例稍高，D群比例稍低于C群，同时还分离到B、E、F群沙门氏菌以及未知型沙门氏菌；其中D、C、B群沙门氏菌在目前检测结果来看与鸡群健康密切相关。从整体来看，环境中沙门氏菌检测结果与泄殖腔拭子及毛蛋中沙门氏菌检测结果存在一定的相关性，但是由于环境中沙门氏菌类别较为复杂，当鸡群中感染沙门氏菌比例较低时，沙门氏菌不是优势菌群，加之采样抽检的局限性，可能检测不到沙门氏菌，造成环境与毛蛋或泄殖腔拭子沙门氏菌检测结果不一定同步，存在差异。因此，环境采样点要尽可能广泛。我们通过大量的环境检测工作发现风机、垫料检出沙门氏菌的比例较高，其次是笼具、粪带/道。种鸡场日常环境监测中，我们可以通过检测风机、垫料、笼具、粪带/道这些高风险点来评估鸡群健康状态。

1.5 孵化环境检测

孵化环境经常存在沙门氏菌污染的现象，特别是孵化阳性鸡群的种蛋时很容易对孵化环境造成污染，并污染其它阴性鸡群的种蛋，造成后代雏鸡感染沙门氏菌。我们可以每半月进行1次孵化器、出雏器、孵化厅、出雏厅的环境监测，来评估孵化环境；阳性鸡场出、入孵化场的物资也是重点抽检对象，特别是要对阳性鸡场转入孵化场的种蛋蛋筐、蛋盘进行抽检，采样频率最好是每月1～2次,使用面积大小为（30×30）cm略湿润的无菌纱布采样。采集蛋盘时注意应采集到蛋盘的内侧与种蛋接触的地方。

1.6 种鸡场周转物资环节检测

1.6.1 饲料检测对不同批次的饲料进行抽检，使用常规生化鉴定方法进行沙门氏菌分离鉴定。

1.6.2 车辆检测来往鸡场的运输次品蛋车、饲料车检测，可以每月2次，车内车外都采用（30×30）cm略湿润无菌纱布涂抹采样，使用常规生化鉴定方法进行沙门氏菌分离鉴定。

1.6.3 转鸡笼消毒后、使用前，对转鸡笼进行抽检，使用（30×30）cm无菌纱布采样，采集点要覆盖鸡笼内、外，使用常规生化鉴定方法进行沙门氏菌分离鉴定。

1.6.4 蛋盘检测蛋盘在进鸡场消毒前后进行抽检，同样使用上述纱布采样检测病原。

总之，以上6个方面的沙门氏菌检测是相互补充的，血清学检测、与垂直性传播相关样品检测、日常病死鸡的病料检测这是针对种鸡进行的诊断性检测，其它环境检测是对群体的一个监控，也是对现场管理的一个警示性检测，防止外源性沙门氏菌进入种鸡场造成污染，达到一个切断传播途径的目的。当我们怀疑种鸡场有沙门氏菌感染的时候，可以血清学检测和病原学检测同时进行。