采血管中添加剂与血样中乙醇含量的相关性研究

邓 启

广东恒安司法鉴定所，广东 云浮 527300

乙醇检测在司法实践中有着重要意义，不仅仅是测定患者体内酒精浓度的标准，还是确认受检者酒后驾车的证据。然而在司法实践中，乙醇检测结果容易受到多种因素影响，采集、包装、检测技术都会导致乙醇含量检测结果的偏差，从而导致结果失准的问题［1］。这不仅不利于受检者行为性质的认定，在实际的司法活动中也会影响到其行为后果的认定。因此为了提高乙醇测定结果的可靠性，有效推进社会法治的进行，我们务必要做好检测过程中的质量控制，明确影响测定结果的因素，找到其中的变化规律［2］。本文主要就采血管中添加剂差异对血样乙醇含量测定结果影响进行研究与评价，从而找到合适的采血管添加剂，或者明确添加剂对乙醇测定结果的影响，形成一套相对完备、客观的乙醇含量测定标准。现做以下报道：

一、资料与方法

（一）仪器和试剂

上海灵华气相色谱仪GC9890B（单进样口双色谱柱双检测器），上海思达自动顶空进样器HS-9A，氢火焰离子化检测器（FID），上海灵华气相色谱工作站。

无水乙醇和叔丁醇均为色谱纯［3］。

乙醇标准液制备：乙醇母液——在100ml容量瓶中加入1/3超纯水后将容量瓶置入分析天平中去皮，再用移液枪往容量瓶中加入1.0010g的无水乙醇，加超纯水至容量瓶100ml刻度线，摇匀。得1000mg/100ml乙醇母液。用5ml分刻度吸管准确吸取5ml乙醇母液置于已经加入1/2超纯水的50ml容量瓶中，容量瓶加水至50ml刻度线后摇匀。得100mg/100ml乙醇标准液。

叔丁醇内标工作液的制备：在100ml容量瓶中加入1/3超纯水后将容量瓶置入分析天平中去皮然后用移液枪往容量瓶中加入0.5000g的叔丁醇后加超纯水至100ml刻度线，得5mg/ml叔丁醇母液。用5ml分刻度吸管吸取4ml叔丁醇母液定容500ml摇匀后浓度为40μg/ml叔丁醇内标工作液［4］。

（二）方法

1.样本处理及测定规则

取0.1ml乙醇标准液，置于顶空瓶内，加0.5ml叔丁醇内标工作液，铝盖密封垫密封后混匀，放入顶空进样器自动进样色谱检测分析，内标标准曲线法进行定量［5］。乙醇标准液的检测结果为103.50mg/100ml。

分别用移液枪吸取2ml乙醇标准液于山东省成武县华博医疗器械有限公司5ml规格（批次：20220105）EDTA-K2采血管、深圳美讯医学检验科技有限公司2ml规格（批次：202112305）柠檬酸钠（1∶9）采血管、1.6ml规格（批次：20200528）柠檬酸钠（1∶4）采血管、4ml规格（批次：2022 0113）肝素锂采血管内。混匀，每种采血管平行测定9次。

2.色谱条件

自动顶空进样器工作条件：顶空瓶平衡温度80℃，环温度90℃，传输管温度105℃；样品平衡时间 10min；加压时间 0.2min；充样时间 0.2min；充样平衡 0.05min；进针时间 1.00min；清扫时间1.00min；载气 N2纯度 99.999%，载气阀刻度4.0；加压阀刻度 6.0。

气相色谱仪工作条件：进样口温度150℃柱箱温度：60℃（恒温），色谱柱（DB-ALC1 30m×0.530 mm×3.00μm），清扫阀刻度：8.0；尾吹阀刻度：5.0；检测器：250℃（FID）；燃气：H2 阀刻度：4.5；空气阀刻度：7.5；样品分析时间 6min。

3.标准曲线

购买浓度为 0.1、0.2、0.5、0.8、1.0、2.0、3.0mg/ml有证乙醇标准液，用移液枪分别吸取系列浓度标准液0.1ml于顶空瓶内，各加0.5ml（40.0μg/ml）叔丁醇内标工作液，铝盖密封垫密封后混匀，放入顶空进样器自动进样色谱检测分析，每个浓度平行测定2份。以乙醇与叔丁醇色谱峰面积比（y）对乙醇质量浓度（x）为横坐标进行线性回归。

（三）观察指标

1.对不同添加剂采血管下样本中乙醇含量测定结果进行评价和对比，分析不同添加剂对血样中乙醇测定结果的影响特点。

2.在对比中总结不同添加剂对血样中乙醇测定结果的影响，以此为基础提高乙醇测定准确度的策略。

（四）统计学方法

研究相关数据均经SPSS19.0软件进行统计学处理，计量资料采用均数±标准差表示，计数资料率表示，若涉及组间对比则分别经t检验或卡方检验，检验值P〈0.05为差异具有统计学意义。同时不同添加剂采血管连续9次乙醇测定结果使用Excel软件进行汇总处理。

二、结果

（一）基本结果

从表1汇总结果可以发现，不同添加剂采血管血氧乙醇测定结果存在较大差异，差异具有统计学意义（P〈0.05），提示不同类型添加剂对血样中乙醇测定结果的影响是不同的。

表1 不同添加剂采血管连续9次乙醇测定结果

单纯就结果来看，采血管中添加剂为EDTA-K2和肝素锂时乙醇含量测定结果最接近准确值，而柠檬酸钠添加剂采血管样本的乙醇测定结果均低于准确值且柠檬酸钠添加比率越低测定结果偏差越大，差异具有统计学意义（P〈0.05）。

（二）精密度变化分析

表2为精密度变化汇总，以表1中数据为基准，其中当日数据为应试溶液配置完成后24h检测结果，次日数据为应试溶液配置完成后48h检测结果，第三日数据为应试溶液配置完成后72h检测结果，连续平行检测9次得到结果偏差和基准值之间的差异为精密度变化范围，取最大差异和最小差异为界限。就精密度检测结果来看，随着溶液配置时间的增加，乙醇检测结果偏差值越大，推测与乙醇缓慢挥发的特征有关。而不同添加剂采血管中样本其精密度变化范围和特点不同，其中柠檬酸钠添加剂采血管中样本乙醇检测精准度变化幅度最小，且柠檬酸钠添加量比率越低偏差值变化越小，差异具有统计学意义（P〈0.05），肝素锂和EDTA-K2添加剂采血管中样本乙醇检测结果精密度变化幅度较大，精密度变化特点和柠檬酸钠添加剂采血管相比存在显著差异（P〈0.05）。推测导致上述结果的原因主要有两点：1.随着时间的推移，溶液中乙醇会缓慢挥发，不同的添加剂会影响到乙醇的挥发速度，从而对不同时间节点乙醇含量测定结果的影响幅度产生差异。2.不同添加剂对血液凝聚状态的影响不同，而血液的凝聚程度会影响到色谱相分析结果导致乙醇检测结果上的偏差。

表2 不同添加剂下乙醇测定精密度变化

三、讨论

根据GB19522-2010《车辆驾驶人员血液、呼气酒精含量阈值与检验》，车辆驾驶员血液中的乙醇含量是酒后驾驶认定的重要诉讼证据，然而血样采集、送检不规范都可能影响检测结果，由于GA/T1556-2019《道路交通执法人体血液采集技术规范》未对交通执法活动中车辆驾驶人员的血液采集用何种抗凝剂采血管进行明文规定，这就导致乙醇检测结果可靠性存在偏差，因此有必要就不同添加剂采血管对血样中乙醇检测的影响进行研究，总结不同添加剂对乙醇检测的影响［6］。

采血管大体上可分为三类：1.无添加剂：此管通常无特殊的添加剂，只在内壁上涂有挂壁的药剂，常用于肿瘤标志物检测、血清学检测等；2.促凝剂：此管除了内壁涂有防止挂壁的硅油外，管内还会添加促凝试剂，常应用于急诊；3.抗凝剂：在采血管中的抗凝剂能对抗血液凝集，常用于血液成分检测。

乙醇检测中所用的采血管则是抗凝剂采血管，是为了获取最接近采血时血液中的乙醇含量［7］。但添加剂的类型会影响到乙醇检测结果，导致的原因主要有两点：1.不同采血管中添加剂的液体体积不同，添加剂和血样混合后对血样的稀释程度不同，因此在检测时容易得到差异化的结果；2.受到检测技术的限制，添加剂可对检测结果产生干扰，从而导致检测结果的偏差。因此在使用采血管时，我们要根据检验成分、检验技术和检验目标来选择合适添加剂的采血管，以保证检测结果的准确性。

乙醇检验是司法实践中常见的检验项目，该检验结果或成为司法活动中的证据，因此务必保证乙醇检验结果的准确性和可靠性［8］。在本组研究中，就四种不同添加剂采血管的乙醇含量检测结果进行了对比和评价，结果发现不同添加剂采血管乙醇检测结果存在差异，差异具有统计学意义（P〈0.05）；而根据检测结果我们发现，EDTA-K2和肝素锂时乙醇含量测定结果最接近准确值，其中EDTA-K2添加剂采血管检测结果略低于准确值，肝素锂添加剂采血管检测结果则略高于准确值，而出于司法的公正性考虑，EDTA-K2添加剂采血管应当是血样乙醇检测的首选。当然在使用其他类型添加剂采血管进行检测时，我们可以通过建立相应算法的方式来规避检测结果偏差导致的误判。此外，在本研究中还对检测精确度衰减进行了评价，单纯就结果来看采样后检测时间越长偏差越大，因此在司法实践中要尽可能优化血样送检流程，做到采血后第一时间送检。