瑞巴派特缓释片的处方优选及稳定性考察

黄月英，卞 俊，鲍蕾蕾（1.海军军医大学第三附属医院药剂科，上海 00438；.海军军医大学第一附属医院药剂科，上海 00433）

瑞巴派特是一种内源性黏膜保护剂，主要用于胃溃疡[1]、溃疡性结肠炎[2]、内镜黏膜下剥离术术后溃疡[3]的治疗。该药可正向诱导环氧合酶2活化并刺激前列腺素受体表达，进而提高胃黏膜内源性前列腺素水平、增加胃黏液分泌；同时，其还可激活生长因子（如表皮生长因子、血管内皮生长因子和肝细胞生长因子等）及其受体在溃疡胃黏膜上的表达，抑制炎症因子分泌，清除活性氧自由基，促进黏膜损伤愈合等[4]。目前，瑞巴派特有片剂、胶囊剂等在售，但均存在半衰期短（1.5～2.0 h）、患者依从性差等问题[5]。笔者前期通过大鼠胃肠吸收实验发现，瑞巴派特为全胃肠道吸收药物[6]，遂根据其药动学特点和现有剂型缺陷，将该药设计为缓释制剂。在此基础上，本研究拟进一步优选瑞巴派特缓释片处方，并考察所制片剂的稳定性，旨在为瑞巴派特缓释制剂的研发提供参考。

1 材料

1.1 主要仪器

本研究所用主要仪器有UV-2550 型分光光度计[岛津企业管理（中国）有限公司]、ZRS-8G型系列智能溶出试验仪（天津天河医疗仪器有限公司）、BC-50E 型低温光照仪（青岛海尔股份有限公司）、LHRS-400B型恒温恒湿培养箱（上海博泰实验设备有限公司）、202-2DA型数显电热恒温干燥箱（上海阳光实验仪器有限公司）等。

1.2 主要药品与试剂

瑞巴派特对照品（批号141019，纯度99.9%）、瑞巴派特原料药（批号150911，纯度99.7%）均购自浙江远力健药业有限公司。L-精氨酸（批号20160217）购自上海易蒙斯化工科技有限公司；泊洛沙姆188（批号WPD1608B）购自德国BASF 公司；羟丙甲纤维素K100M（hypromellose K100M，HPMC K100M，批 号SH234187）购自上海卡乐康包衣技术有限公司；微晶纤维素（批号1712130）、微粉硅胶（批号171202）均购自安徽山河药用辅料股份有限公司；上述辅料均为药用级。甲醇为色谱纯，其余试剂均为分析纯，水为纯化水。

2 方法与结果

2.1 瑞巴派特缓释片的制备

按处方量称取瑞巴派特原料药150.0 mg、L-精氨酸75.0 mg（用量于前期预实验确定）和泊洛沙姆188、HPMC K100M、微晶纤维素适量，采用熔融法制备瑞巴派特固体分散体，均匀分散后，迅速冷却，于干燥箱中干燥1 h，粉碎过30目筛，再加填充剂微晶纤维素和润滑剂微粉硅胶5 mg（1%），混匀压片，总处方量为500 mg。

2.2 瑞巴派特含量的测定

2.2.1 溶液的制备 （1）对照品贮备液：精密称取瑞巴派特对照品50.08 mg，置于50 mL 量瓶中，用0.1 mol/L NaOH 溶液溶解并稀释至刻度，摇匀。精密量取上述溶液1 mL，用水制成质量浓度为100.16 μg/mL 的对照品贮备液。（2）供试品贮备液：取瑞巴派特缓释片粉末（约含瑞巴派特50 mg），精密称定，置于50 mL量瓶中，用水溶解并稀释至刻度；精密量取上述溶液1 mL至10 mL量瓶中，用水定容，即得供试品贮备液。（3）辅料溶液：取与瑞巴派特缓释片同比例的辅料（不含瑞巴派特）适量，按“2.2.1（2）”项下方法制备，即得辅料溶液。

2.2.2 检测波长确定 将对照品贮备液和辅料溶液分别置于分光光度计中，在200～400 nm 波长范围内进行紫外扫描。结果表明，瑞巴派特在230 nm 和328 nm 波长处均有较大吸收，辅料无干扰，考虑到末端吸收问题，本文选择328 nm作为检测波长（图略）。

2.2.3 方法学考察 参照2020 年版《中国药典》（四部）相关通则要求进行方法学考察[7]。（1）线性关系考察：精密吸取“2.2.1（1）”项下对照品贮备液适量，用水稀释，制成瑞巴派特质量浓度分别为5.008、10.016、20.032、30.048、40.064、50.080 μg/mL 的系列溶液，在328 nm 波长处测定吸光度，以吸光度为纵坐标（Y）、瑞巴派特质量浓度为横坐标（X）进行线性回归，得回归方程为Y＝0.016 3X+0.004 8（R2＝0.999 9），瑞巴派特检测质量浓度的线性范围为5.008～50.080 μg/mL。（2）精密度考察：按上述方法配制低、中、高质量浓度（10.016、30.048、50.080 μg/mL）对照品溶液，于1 d内重复测定5次，计算日内精密度；连续测定5 d，计算日间精密度。结果显示，日内、日间精密度RSD 均小于2%（n＝5），表明仪器精密度良好。（3）稳定性考察：精密量取“2.2.1（2）”项下供试品贮备液3 mL，置于10 mL 量瓶中并用水定容，混匀，分别于室温下放置0、2、4、6、8、24 h时在328 nm波长处测定吸光度。结果显示，吸光度的RSD为0.39%（n＝6），提示供试品贮备液在24 h内稳定性良好。（4）重复性考察：取瑞巴派特缓释片粉末，按“2.2.1（2）”项下方法平行制备供试品贮备液6 份；取供试品贮备液3 mL，置于10 mL 量瓶中并用水定容，混匀，于328 nm 波长处测定吸光度并代入回归方程计算含量，得瑞巴派特含量的RSD 为0.38%（n＝6），说明方法重复性良好。（5）加样回收率考察：称取已知含量的瑞巴派特缓释片粉末（约含瑞巴派特50 mg），共9份，精密称定，分别置于50 mL量瓶中，用水溶解并定容，混匀，精密量取上述溶液1.5 mL于100 mL 量瓶中，分别加入相当于瑞巴派特已知量80%、100%、120% 的对照品溶液[1 001.6 μg/mL，按“2.2.1（1）”项下方法配制]1.2、1.5、1.8 mL，用水稀释至刻度，混匀，在328 nm波长处测定吸光度，计算得瑞巴派特平均加样回收率为99.47%（RSD＝0.73%，n＝9），表明方法准确度良好。

2.3 体外累积释放度实验

按2020年版《中国药典》（四部）“溶出度与释放度测定法”项下“第一法（篮法）”操作[7]：释放介质为900 mL水，温度为（37.0±0.5）℃，转速为100 r/min。取瑞巴派特缓释片6片，分别置于6个溶出杯中，于0.25、0.5、1、2、3、4、6、8、10、12 h 时分别取样5 mL，并及时补充释放介质5 mL。取样液用0.45 μm微孔滤膜过滤，取滤液作为供试溶液。取上述供试溶液，于328 nm波长处测定吸光度，代入回归方程计算其中瑞巴派特的质量浓度并计算体外累积释放度：体外累积释放度（%）＝100%[式中，C为供试溶液中瑞巴派特的质量浓度（μg/mL），V为释放介质体积（mL），D为稀释倍数，W为片剂质量（mg），F为瑞巴派特在制剂中的百分含量（%）]。

2.4 瑞巴派特缓释片处方的优化

参考文献[8-12]，本研究在单因素实验的基础上，选取对药物体外累积释放度影响较大的亲水凝胶骨架HPMC K100M用量（X1）和分散剂泊洛沙姆188用量（X2）为考察因素，以缓释片在0.5、2、6、10、12 h的体外累积释放度（Y0.5、Y2、Y6、Y10、Y12）的综合评分（Y）、体外累积释放曲线的相关系数（R）及黏冲程度（N）为评价指标。体外累积释放度标准分别为9%～12%（0.5 h）、20%～22%（2 h）、50%～55%（6 h）、81%～89%（10 h）、≥90%（12 h）[13-14]，Y＝|Y0.5-10%|+|Y2-21%|+|Y6-51%|+|Y10-81%|+|Y12-95%|，Y取最小值；R的标准为0.99～1.00[13]；N的标准为严重黏冲记0分，黏冲记3分，稍微黏冲记7分，不黏冲记10 分[15]。采用中心点复合设计-响应面法进行实验，具体因素与水平见表1，实验安排与结果见表2。

表1 中心点复合设计-响应面法的因素与水平

表2 中心点复合设计-响应面法的实验安排与结果

采用Design-Expert 8.0.5b软件对表2数据进行统计分析，得Y、R、N二项式拟合方程分别为：Y＝340.43-12.05X1-21.61X2+0.05X1X2+0.23X12+0.55X22（P＝0.000 5，r＝0.936 1）；R＝-0.24+0.05X1+0.10X2+0.000 6X1X2-0.001 0X12-0.004X22（P＝0.000 6，r＝0.931 9）；N＝13.55-0.05X1+0.10X2-0.006X12-0.005X22（P＜0.000 1，r＝0.970 0）。Y、R、N的二项式拟合方程的P均小于0.05，提示其能较好地反映因素对响应值的影响；r均大于0.900 0，说明各二项式拟合方程与真实数据的拟合度良好，可用于瑞巴派特缓释片处方参数的预测及分析。由二项式拟合方程的方差分析结果（表3）可知，Y、R、N的F检验的P均小于0.01，说明模型能准确预测具有显著性的影响因素。

表3 中心点复合设计-响应面法的Y、R、N二项式拟合方程的方差分析结果

采用Design-Expert 8.0.5b 软件绘制等高线图和三维响应面图（图1）。结果显示，因素X1（HPMC K100M用量）对药物的释放有显著影响，因素X2（泊洛沙姆188用量）的影响较弱。HPMC K100M 用量越大，释药速度越慢且越均匀；泊洛沙姆188用量增加，释药速度缓慢加快；HPMC K100M 用量越大，R越大；泊洛沙姆188 用量越大，R越小。黏冲现象主要受泊洛沙姆188 用量的影响，泊洛沙姆188 用量越大，黏冲现象越严重。采用Design-Expert 8.0.5b 软件对上述二项式拟合方程求解，确定最优处方为：泊洛沙姆188 用量13.12%，HPMC K100M用量22.90%。

根据最优处方，结合生产实际，确定最终处方为：瑞巴派特150.0 mg、泊洛沙姆188 65.6 mg、L-精氨酸75.0 mg、HPMC K100M 114.5 mg、微晶纤维素适量、微粉硅胶5 mg，总处方量为500 mg。根据该处方制备3批瑞巴派特缓释片进行验证实验，按“2.2”“2.3”项下方法测定其含量及体外累积释放度，并考察Y、R、N实测值与预测值的偏差[偏差＝（预测值-实测值）/预测值×100%]。结果显示，瑞巴派特的含量分别为100.61%、98.69%、99.01%，缓释片在0.5、2、6、10、12 h 的体外累积释放度分别为（9.59±0.69）%、（22.28±0.08）%、（54.00±0.71）%、（80.77±0.61）%、（94.32±0.45）%，RSD 均小于2.00%（n＝3），表明所制缓释片能持续12 h 释药，体外累积释放度≥90%，重现性良好，本品的处方和工艺设计合理。Y、R、N的实测值分别为10.70%、0.996 5、10.00，与预测值11.63%、1.000 0、9.76的偏差均小于10%，表明所建模型具有良好的预测效果[16]。

图1 X1、X2对Y、R、N影响的等高线图和三维响应面图

2.5 释药曲线方程拟合及释药机制研究

参考文献[14，17]对瑞巴派特缓释片进行释药曲线方程拟合及释药机制研究。取瑞巴派特缓释片进行体外累积释放度实验，将体外累积释放度（Q）与时间（t）进行曲线拟合，探讨释药机制。以Origin 9.0 软件进行释药曲线方程拟合，结果见表4。

表4 瑞巴派特缓释片释药曲线方程拟合结果

由表4 可知，Peppas 方程对该实验数据结果的拟合度最高（R2＝0.998 8），其扩散指数（n）为0.795 5，提示瑞巴派特缓释片的体外释药特征符合混合型机制；此外，因零级释放模型方程的R2为0.997 4，说明瑞巴派特缓释片具有较好的缓释效果。

2.6 瑞巴派特缓释片稳定性实验

参照2020年版《中国药典》（四部）相关通则方法[7]，对3批样品进行稳定性研究，主要考察瑞巴派特缓释片的性状、含量、体外累积释放度等参数的变化。

2.6.1 影响因素实验 （1）光照实验：取样品适量，裸置于恒定质量的玻璃皿中，在（4 500±500）lx 的光照下放置10 d。结果（表5）显示，光照10 d 后，样品性状与第0天相比无明显变化，体外累积释放度与第0天相比无明显差异，含量略有下降。（2）高温实验：取样品适量，裸置于恒定质量的玻璃皿中，置于干燥箱内，于（40±2）℃下放置10 d。结果（表5）显示，高温放置10 d后，样品性状与第0天相比无明显变化，含量、体外累积释放度与第0天相比亦无明显差异。（3）高湿实验：取样品适量，裸置于恒定质量的玻璃皿中，置于恒温恒湿培养箱内，在温度为25 ℃，相对湿度分别为（75±5）%、（90±5）%的条件下放置10 d。结果（表5）显示，在温度25 ℃、相对湿度（75±5）%条件下放置10 d 后，片剂稍有膨胀，含量、体外累积释放度与第0 天相比无明显差异；在温度25 ℃、相对湿度（90±5）%条件下放置10 d后，片剂从第5天起出现膨胀并开裂、释放速率减慢等现象，含量与第0天相比无明显差异。

表5 瑞巴派特的影响因素实验结果（n＝3）

2.6.2 加速稳定性实验 模拟本品市售包装，并在相对湿度（75±5）%、温度（40±2）℃条件下放置6 个月。结果（表6）显示，样品性状无明显变化，含量和体外累积释放度测定结果与第0个月相比均无明显差异，表明样品加速稳定性良好。

2.6.3 长期稳定性实验 模拟本品市售包装，并在相对湿度（65±5）%、温度（30±2）℃条件下放置12个月。结果（表7）显示，样品性状无明显变化，含量和体外累积释放度测定结果与第0个月相比均无明显差异，表明样品长期稳定性良好。

表6 瑞巴派特缓释片加速稳定性实验结果（n＝3）

表7 瑞巴派特缓释片长期稳定性实验结果（n＝3）

3 讨论

以HPMC K100M 为骨架材料制成凝胶型骨架片，药物释放具有先快后慢的特征。前期研究显示，泊洛沙姆188 可增加药物的溶出，调节药物的释放[18]。通过分析三维响应面图发现，随着HPMC K100M用量的增加，释药速度减慢且更均匀；随着泊洛沙姆188用量的增加，释药速率缓慢加快。这是因为HPMC K100M水合膨胀可形成凝胶屏障，黏度和用量越大，凝胶强度越大，药物的溶出扩散和HPMC K100M 的溶蚀速度越慢，导致释药速度减慢；泊洛沙姆188为表面活性剂，可在凝胶层中形成孔道，减少药物的扩散阻力，增加药物的溶出，二者相结合可以达到理想的释放效果。

通过Origin 9.0 软件拟合释药曲线方程发现，瑞巴派特缓释片释药机制更接近Peppas方程（n为0.795 5），符合混合型释药机制。这说明在此系统中，骨架材料的水合膨胀和溶蚀、药物的溶出和扩散等同时影响着缓释片中瑞巴派特的溶出[14，17]。

稳定性实验中，光照对瑞巴派特缓释片的含量略有影响；高湿对瑞巴派特缓释片有较大影响，可导致片剂膨胀、开裂，并减缓释放速率；高温对瑞巴派特缓释片无明显影响。因此，本品应采用遮光材料包装，于干燥处密封保存。模拟市售包装后进行的加速稳定性实验及长期稳定性实验结果显示，瑞巴派特缓释片性状均无明显变化，含量和体外累积释放度与第0个月相比均无明显差异，表明瑞巴派特缓释片加速和长期稳定性良好。

通过对瑞巴派特缓释片进行处方优选及稳定性考察发现，缓释片体外累积释放度重现性良好，药物含量稳定，稳定性良好。但本研究在进行处方优化时，只考察了12 h 的体外累积释放度，未进行24、36 h 的体外累积释放实验，后续将进一步完善并进行体内药动学研究，为瑞巴派特缓释片的临床应用提供实验依据。