不同杀菌剂对2种板栗内腐病菌的室内毒力测定

霍佳欢，郭思柔，栗佳宁，王建华，温晓蕾，冯丽娜，齐慧霞*

（1板栗产业技术教育部工程研究中心 秦皇岛 066004；2河北科技师范学院农学与生物科技学院/河北省作物逆境生物学重点实验室（筹））

板栗富含多种维生素及矿物质，具有补脾健胃，缓解高血压、冠心病等功效[1]。作为板栗原产国，近年来我国板栗栽培面积和产量稳定增长，均居世界首位，据统计，2018年我国板栗种植面积达34.1万hm2，总产量高达196.5万t[2]。伴随板栗产业高速发展，板栗病害也愈发严重，在贮存不当的情况下板栗内腐病造成种仁腐烂率高达50%左右，严重制约板栗经济效益的稳定和提升[3]。

加强板栗内腐病的防治是提高板栗品质的重要环节，目前化学防治仍是防治板栗内腐病的重要手段。本试验针对两种板栗内腐病菌进行了有效药剂筛选，旨在为田间开展防治板栗内腐病工作提供理论支撑。

1 材料与方法

1.1 材料 供试杀菌剂相关信息见表1。供试菌株为可可毛色二孢菌（L.theobromae）、茄病镰刀菌（F.solani）。

表1 供试杀菌剂名称及使用浓度

1.2 方法

1.2.1 室内杀菌剂初筛 采用生长速率法[4]测定不同杀菌剂对L.theobromae和F.solani的抑制效果，针对2种致病菌株选用了7种杀菌剂，分别采用7种杀菌剂推荐使用的浓度作为中间浓度，进行室内抑菌试验，筛选出对致病菌株抑制效果较好的杀菌剂。

1.2.2 杀菌剂室内毒力测定 室内杀菌剂初筛试验后，对L.theobromae和F.solani抑制效果较好的杀菌剂，设置5种不同浓度进行室内毒力测定，同样采用生长速率法测定。将供试菌株在PDA平板上纯化培养，选用直径7 mm的打孔器从菌落外缘打取菌饼备用。在无菌环境下，将杀菌剂用无菌水稀释到所需浓度后，添加到装有100 mL PDA培养基的锥形瓶中，迅速摇匀，分装于9 cm培养皿中，杀菌剂使用浓度见表2、表3，每个浓度重复3次，以不加药的培养基作对照。将其置于25℃恒温黑暗条件下培养，24 h后观察记录菌落直径。使用SPASS软件计算毒力回归方程，并通过回归方程计算EC50[5]。

表2 可可毛色二孢菌株室内毒力测定杀菌剂使用浓度 /（mg/L）

表3 茄病镰刀菌株毒力室内测定杀菌剂使用浓度 /（mg/L）

生长抑制率/%=[（CK菌落直径-处理菌落直径）/（CK菌落直径-7 mm）]×100

2 结果与分析

2.1 7种杀菌剂对2种板栗内腐病菌毒力测定 通过对7种杀菌剂进行初步的筛选，发现7种杀菌剂对可可毛色二孢菌均有一定的抑制效果，抑菌率如表4所示，其中咯菌腈抑菌效果最好，菌落生长2 d抑菌率为100%，其次为丙硫菌唑和苯醚甲环唑，抑菌效果分别在92.52%和79.49%，此外其它杀菌剂对该菌株也有一定的抑制效果，但抑菌率相对较低，抑菌效果均在50%以下；7种杀菌剂对茄病镰刀菌也有明显的抑制效果，其中抑菌率最高的为丙硫菌唑，培养6 d，抑菌率达82.25%，其次为苯醚甲环唑，抑菌率为62.95%，其余杀菌剂对该菌株抑制率均在50%以下。

表4 不同杀菌剂对2种致病菌株的室内抑菌效果

2.2 所筛杀菌剂对2种板栗内腐病菌毒力测定 对7种杀菌剂进行初筛，将抑菌率在50%以上的杀菌剂继续进行室内毒力测定，咯菌腈、丙硫菌唑和苯醚甲环唑对可可毛色二孢菌抑菌率较好；丙硫菌唑和苯醚甲环唑对茄病镰刀菌株抑菌效果较好。将这几种杀菌剂针对供试菌株进行室内毒力测定，由表5可知：3种杀菌剂对可可毛色二孢菌抑制作用从大到小为丙硫菌唑＞咯菌腈＞苯醚甲环唑，丙硫菌唑对该菌抑制效果较好，EC50为0.076 mg/L。由表6可知，2种杀菌剂丙硫菌唑和苯醚甲环唑对茄病镰刀菌均有很好的抑制效果，丙硫菌唑对该菌的抑制效果较好，EC50为1.327 mg/L；而苯醚甲环唑的EC50为53.835 mg/L，相对丙硫菌唑而言效果较差。

表5 供试杀菌剂对可可毛色二孢菌毒力测定结果

表6 供试杀菌剂对茄病镰刀菌毒力测定结果

3 结论与讨论

通过对7种杀菌剂进行室内初步筛选发现，对L.theobromae菌株抑菌率较好的为咯菌腈、丙硫菌唑和苯醚甲环唑，3种杀菌剂的抑菌率分别为100%、92.52%、79.49%，将3种杀菌剂继续进行室内毒力测定，得出丙硫菌唑的EC50为0.076 mg/L，其次为咯菌腈和苯醚甲环唑；初筛试验中对F.solani抑制效果较好的为丙硫菌唑和苯醚甲环唑，抑菌率分别为82.25%和62.59%，通过进一步对2种杀菌剂进行室内毒力测定发现丙硫菌唑的效果优于苯醚甲环唑，其EC50为1.327 mg/L，远低于苯醚甲环唑。

目前国内关于板栗上L.theobromae和F.solani的有效防治杀菌剂鲜有研究，但关于两种病原菌室内毒力试验也有相关报道，邹东霞[6]等人对引起桉树枝枯病的L.theobromae菌株进行室内杀菌剂筛选发现，25%苯醚甲环唑对桉树枝枯病菌（L.theobromae）具有一定的防治效果，其EC50为3.473 mg/L，经换算与本试验中苯醚甲环唑的EC50为8.445 mg/L较为接近；刘树森等[7]研究指出，96%苯醚甲环唑对L.theobromae具有良好的抑制效果，其EC50为1.327 mg/L；试验中97%咯菌腈对L.theobromae防治效果最佳，EC50为0.09 mg/L；与本试验中咯菌腈对L.theobromae的EC50有所不同；翟雅娟等[8]对引起红花根腐病的茄病镰刀菌进行了药敏试验，发现10%苯醚甲环唑对F.solani具有良好的防治效果，其EC50为0.4605 mg/L，与本试验中苯醚甲环唑有效防治F.solani的EC50相差较多。

综上可知同样有效杀菌剂针对同种病原菌，其在不同的寄主植物上或在不同的环境、气候等条件下，有效防治用药量具有一定差异，因此在病害防治过程中，应综合考虑影响因素，从而确定出有效的防治方案。本试验通过对板栗内腐病菌的杀菌剂筛选发现，丙硫菌唑和苯醚甲环唑2种杀菌剂对均有很好的抑制效果。本试验对2种板栗内腐病菌进行了有效药剂筛选，筛选出了咯菌腈、丙硫菌唑和苯醚甲环唑，为田间开展防治板栗内腐病工作提供理论支撑。