盐酸小檗碱共振光散射光谱法测定酚磺乙胺的含量

2022-10-22姜莹莹吴佳懿贺高韵马卫兴

广州化工 2022年18期

王振，姜莹莹，吴佳懿，贺高韵，马卫兴

(江苏海洋大学药学院，江苏连云港 222005)

酚磺乙胺(Etamsylate)化学名称为2，5-二羟基苯磺酸二乙胺盐，是促凝血因子活性药物[1-2]，可用于预防手术前后出血[3-5]，对治疗脑出血、肝出血、消化道出血、泌尿道出血等十分有效。酚磺乙胺片剂是其常见的一种制剂形式。目前关于酚磺乙胺的测定方法主要有高效液相色谱法[6-7]、示波伏安法[8]、化学发光法[9]和可见分光光度法[10]等，以上各种方法各有优缺点，因此开发灵敏快速测定酚磺乙胺的新方法具有现实意义。共振光散射光谱法[11-13]是一种灵敏快速检测技术，至今未见用于酚磺乙胺的含量测定。

实验发现酚磺乙胺无共振光散射信号，而酚磺乙胺的磺酸根阴离子在与盐酸小檗碱发生离子缔合反应后，产生的离子缔合物使得共振光散射信号显著增强。依此建立共振光散射光谱法测定药物酚磺乙胺的含量。

1 实验部分

1.1 仪器与试剂

pHS-3D型酸度计,中国上海精密科学仪器有限公司；RF-6000型荧光分光光度计,日本岛津公司；JJ224BC型电子分析天平,常熟市双杰测试仪器厂。

酚磺乙胺(Etamsylate)，(分析纯，罗恩试剂)，配置成1 mg·L-1的水溶液；盐酸小檗碱(Berberine hydrochloride，分析纯，天圣制药集团股份有限公司)，配置成5×10-4mol·L-1的盐酸小檗碱溶液；在 0.04 mol/L的磷酸(分析纯，南京化学试剂有限公司)、硼酸(分析纯，南京化学试剂有限公司)和醋酸(分析纯，国药集团化学试剂有限公司)混合液中加入不同体积的 0.2 mol/L的氢氧化钠制成伯瑞坦-罗宾森(Britton-Robinson，BR)缓冲溶液，在酸度计上调制pH值；实验用水为去离子水。

2 实验方法

试剂制备：将酚磺乙胺溶液、盐酸小檗碱溶液和BR缓冲溶液分别加入10 mL比色管中并用去离子水稀释至刻度，进行充分的振荡后静置待测，该溶液为样品溶液。另以盐酸小檗碱混合BR溶液于10 mL比色管中，用去离子水稀释至刻度，做试剂空白溶液参比。

方法：在RF-6000荧光分光光度计上设置同步扫描并且令激发波长(λex)等于发射波长(λem)，绘制共振光散射图谱，测得样品溶液最大散射峰峰值为IRSL1，试剂空白溶液最大散射峰峰值为IRSL2，以试剂空白参比的样品溶液共振光散射强度为ΔIRSL， ΔIRSL=IRSL1-IRSL2。

3 结果与讨论

3.1 光谱分析

按照实验方法配制样品溶液和试剂空白溶液，扫描 200 ～400 nm范围内(λex=λem)的共振光散射光谱，结果如图1所示，曲线2为样品溶液的共振光散射图谱，曲线1为试剂空白溶液共振光散射图谱，由图可知两种溶液在297 nm处出现最大共振光散射峰峰值且差值也为最大值，说明离子缔合物在此处使共振光散射信号增强，故选择 297 nm作为检测波长。

图1 共振光散射光谱图Fig.1 Resonance light scattering spectra

3.2 pH值影响

在盐酸小檗碱测定酚磺乙胺含量的实验中，缓冲介质起着重要的作用，因此对缓冲液的pH值进行优化。通过实验考察了多种缓冲液如：Clark-Lubs、盐酸、BR等对共振光散射体系的影响后，由于BR缓冲液在反应体系中维持稳定的pH值，故选用BR缓冲液作为缓冲介质。

按照实验方法配制样品溶液和试剂空白溶液且固定两者用量并在pH1.81～6.09范围内对缓冲液pH值进行优化测试，计算ΔIRSL。结果如图2所示，随着pH值的不断升高，ΔIRSL呈现先增强到最大值后缓慢降低的趋势，pH值等于2.87时ΔIRSL为最大值，故选择pH 2.87的BR缓冲液作为缓冲介质进一步实验。

图2 pH值的影响Fig.2 Effect of pH-value

3.3 缓冲液用量影响

检测酚磺乙胺需要稳定的pH环境，BR缓冲液作为实验的重要介质，在确定缓冲液pH值后，对缓冲液的用量进行优化实验。按照实验方法配置样品溶液和试剂空白溶液，在测定过程中逐量提高pH 2.87 BR缓冲液的用量，测定后计算ΔIRSL。

结果如图3所示，当pH 2.87 BR缓冲液用量0.8 mL时，ΔIRSL出现最大值，而随着缓冲液用量增加时，散射信号差值逐渐降低，说明介质离子增多发生了竞争关系才使得信号差值降低。故选择0.8 mL作为缓冲液的最佳用量。

图3 缓冲液用量的影响Fig.3 Effect of buffer dosage

3.4 盐酸小檗碱用量影响

盐酸小檗碱是测定酚磺乙胺片剂中主要成分含量的重要试剂也是与酚磺乙胺反应的离子缔合剂，其用量影响测定结果的精确性，为此考察盐酸小檗碱溶液用量对ΔIRSL产生的影响。按照实验方法配制样品溶液和试剂空白溶液，在测定过程中逐量提高盐酸小檗碱溶液的用量，测定后计算ΔIRSL，结果如图4所示：共振光散射强度差值总体趋势呈先增后减，在0.8 mL产生最大差值，因此选用0.8 mL的盐酸小檗碱溶液作为反应最佳的离子缔合试剂。

图4 盐酸小檗碱用量的影响Fig.4 Effect of the volume of berberine hydrochloride

3.5 工作曲线和检测限

在系列10 mL比色管中，分别准确加入1 mg·L-1的酚磺乙胺标准溶液，按照实验方法进行检测，其扫描光谱以及绘制的工作曲线如图5与图6所示，酚磺乙胺在0.02 ～0.10 mg·L-1浓度范围内其离子缔合物的共振光散射强度与浓度的线性关系良好，线性回归方程为：IRLS=32060.36C+178.02，相关系数R=0.9994，检出限(LOD)公式为LOD=3d/k，其中，对试剂空白进行测定11次，求得标准偏差即为d，工作曲线的斜率即为k，依据实验测得的数据计算得出该方法的检出限：0.013 mg·L-1。

图5 酚磺乙胺体系共振光散射光谱图Fig.5 Resonance light scattering spectra of etamsylate system

图6 工作曲线Fig.6 Work curve

3.6 干扰物质的影响

表1 干扰试验结果Table 1 Interference test results

酚磺乙胺作为药物较多为片剂，在片剂的制作过程中需加入辅料，因此在最佳实验条件下本研究考察了常见的金属离子、氨基酸、淀粉、硬脂酸镁、滑石粉、葡萄糖等物质对反应体系共振光散射强度的影响。考察结果见表1，测定误差在±5%范围内，以下物质对实验体系几乎不造成影响，符合药物分析的要求。

3.7 回收实验

将酚磺乙胺片研磨成粉，称取适量模拟片粉于200 mL容量瓶中，加去离子水稀释定容制成1 μg·mL-1的待测液，按照实验方法进行光谱扫描测定，平行测定11次，测定结果如表2所示。回收率在98.75%～101.30%范围内，平均回收率为100.58%，相对标准偏差RSD为0.87%。

表2 回收实验结果Table 2 The result of the recovery experiment

3.8 样品分析

将酚磺乙胺片(标示量为0.25 g/片)研磨成粉，精密称取100 mg置于1 L的容量瓶中，加入去离子水定容，摇匀得酚磺乙胺片样品制备原液。将该原液用去离子水稀释100倍，得样品稀释液，准确吸取适量该样品稀释液，按照实验方法配制测定溶液并进行光谱扫描测定，实验结果如表3所示，本法测定结果与可见分光光度法[10]所得结果进行比较，精密度更佳。