佛手散的药理作用研究进展

2022-10-19刘飔晗付新

中医药学报 2022年10期

刘飔晗，付新

(黑龙江中医药大学教育部北药基础与应用研究重点实验室，黑龙江哈尔滨 150040)

目前，关于佛手散的整体研究较少，笔者通过综述其指标成分以及对子宫内膜异位症、先兆流产、原发性痛经、脑中风、神经退行性疾病、血虚、血瘀和肝微粒酶活性的药理作用，以期为佛手散进一步的研究提供理论依据。

1 指标成分

根据2020版中国药典记载，阿魏酸是当归和川芎含量测定的指标成分[9]，但是以单一成分来评估方剂质量却有失妥当。有研究以同时测定阿魏酸、洋川芎内酯Ⅰ、洋川芎内酯A和藁本内酯确定其质量，发现具有良好的重现性[10]。贾智若等[11]以绿原酸、咖啡酸、阿魏酸、洋川芎内酯A、藁本内酯为指标物，采用HPLC法测定两种煎液的指标物含量，结果显示，合煎液的5种有效成分含量均高于分煎液。LI等[12]同时定量当归、川芎和佛手散中的3种芳香酸(绿原酸、咖啡酸、阿魏酸)和6种酞类化合物(洋川芎内酯I、洋川芎内酯H、洋川芎内酯A、丁基苯酞、藁本内酯和丁基苯酞)的含量，发现合煎中发生了药物的相互作用。由此可见，方剂的质量需从多个维度入手，不应是单味药指标成分的简单加和。

2 对妇科疾病的作用

2.1 对子宫内膜异位症的作用

子宫内膜异位症(EMS)多发于生育年龄的女性，病理表现为本应生长在子宫腔上的内膜细胞经由输卵管进入盆腔异位生长。王小翠等[13]发现加味佛手(延胡索)散具有抑制EMS模型大鼠血管生成的作用，其机制可能是降低大鼠异位内膜组织体积和微血管密度(MVD),并能够抑制大鼠异位内膜组织中血管内皮生长因子(VEGF)蛋白的表达, 降低大鼠血清和异位内膜组织中前列腺素E2(PGE2)的含量, 促进内皮抑素(endostatin)蛋白的表达，而内皮抑素可通过抑制异位病变血管生成和降低VEGF表达影响子宫内膜异位组织的维持和生长[14]，并且有研究表明，内皮抑素可以抑制EMS[15]。除此以外，内皮抑素还具有抑制VEGF诱导的血管通透性和抗血管生成功能[16]，其抗血管生成作用在抑制癌细胞增殖和肿瘤迁移方面特别重要。大多数癌症显示出VEGF的高表达[17]，因此，临床有利用靶向VEGF来治疗癌症的方法，如使用贝伐单抗来治疗结直肠癌[18]。但是，这种方法太过单一，许多患者对抗血管生成药物产生耐药性导致疗效下降，并且抗血管生成药物价格昂贵还具有副作用[19]。佛手散可以抑制VEGF并且可以促进内皮抑素的含量，表明佛手散可能具有治疗癌症的潜力。

张莹等[20]通过网络药理学分析此类加味佛手散的作用靶点，发现其可能调控MMP2、MMP9、TIMP1等66个关键靶点以及相关的115条信号通路，并且其中MMP/TIMP在通路中起关键作用，随后又用实验对MMP/TIMP靶点进行了验证。结果表明加味佛手散可以显著抑制大鼠子宫异位内膜组织的生长，其机制是通过下调MMP-2和MMP-9, 上调TIMP-1表达实现的。基质金属蛋白酶-2和-9(MMP-2/-9)是关键的组织重塑酶，对肿瘤的愈合和进展至关重要。MMP-2/-9会促进肿瘤的转移和扩散[21-22]，高表达的MMP-2/-9还会使神经胶质瘤复发预后差[23]。MMP-2/-9可能作为乳腺癌治疗的标志物[24]、膀胱癌早期检测的预后标志物[25]和基底细胞癌的预后因素[26]。除此以外，肿瘤细胞可能通过产生一些其他因素诱导邻近基质细胞产生基质金属蛋白酶[27]。金属蛋白酶组织抑制剂-1(TIMP-1)水平升高通常与肿瘤发生增加有关，如乳腺癌[28]、胃癌[29]、结肠直肠癌[30]和非小细胞肺癌(NSCLC)，并且TIMP-1/IL6轴可能是NSCLC中有价值的预后生物标志物[31]。

尚芳红等[32]采用HPLC法测定此类加味佛手散在EMS模型大鼠血浆中的有效成分含量变化，结果显示在EMS状态下，川芎嗪的吸收速度加快，延胡索乙素的吸收明显增加，而阿魏酸则没有显著的吸收差异。

2.2 对先兆流产的作用

先兆流产是指在妊娠28周之前，在尿液或血液妊娠试验阳性，宫颈封闭的情况下，没有受孕产物通过且没有胎儿或胚胎死亡的证据的情况下，阴道出血。一些研究[33-34]发现佛手散可以降低正常妊娠大鼠的血液黏度，并且当佛手散剂量达到一定浓度时，会使正常妊娠大鼠的血清及子宫、胎盘的肿瘤坏死因子α(TNF-α)浓度升高，从而导致妊娠大鼠自然流产。然而，在先兆流产模型大鼠中，佛手散的表现则相反[35]：佛手散会降低先兆流产模型大鼠血清及子宫胎盘组织中已经升高的TNF-α浓度，从而改善流产的不良结局，且不同剂量间无显著差异。黄俐华等[36]发现佛手散可以降低先兆流产模型大鼠的血液黏度，清除瘀血，从而降低模型大鼠的流产率。上述研究和《普济本事方》[37]中的记载：“治妇人妊孕五七月……用此药探之，若不损则痛止，子母俱安。若胎损立便逐下，此药催生神妙。”十分相似。

3 抗氧化应激

3.1 对原发性痛经的作用

痛经分原发性和继发性两种，经过详细妇科临床检查未能发现盆腔器官有明显异常者，称原发性痛经，也称功能性痛经。佟昕等[38]使用由当归、川芎、血见愁、赤芍、黄芪组成的加味佛手散，发现其能够抑制由缩宫素引起的原发性痛经模型大鼠的离体子宫活力，其机制为降低血清中前列腺素F2α(PGF2α)的含量及MDA含量和提高谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-PX)及超氧化物歧化酶(SOD)活性，表明其可以加速超氧自由基的消除, 减轻超氧自由基对子宫平滑肌的进一步损伤。

3.2 对脑中风的作用

脑中风在临床上表现为脑部缺血及出血性损伤症状，是全球死亡和残疾的主要原因之一。贾智若等[39]采用线栓法建立大鼠脑内动脉阻塞局灶性脑缺血再灌注(MCAO)模型，发现佛手散水煎液对MCAO大鼠的神经行为学障碍、脑水肿水平以及脑梗死体积有着显著改善作用。此外，他们还采用连二亚硫酸钠合并缺糖建立体外PC12细胞氧糖剥夺(OGD)损伤模型，发现佛手散水煎液可以提高SOD活性，减少细胞中的MDA和NO含量。无论是体内还是体外实验，佛手散均呈剂量依赖性。

氧化应激增加是心血管疾病中潜在的病因之一。活性氧(ROS)和抗氧化剂之间的良好平衡对细胞的正常功能至关重要，过量的ROS会对细胞大分子如DNA、脂质和蛋白质造成损伤，最终导致细胞坏死和凋亡。氧化剂还能够通过从多不饱和脂肪酸中提取烯丙基质子来引发脂质氧化，这一过程通过多个阶段导致脂质氢过氧化物的形成，是动脉粥样硬化发展的一个已知因素[40]，并且MDA是脂质过氧化的生物标志物之一。然而，人体可以通过SOD、GSH-Px、过氧化氢酶(CAT)等多种酶的作用来防止活性氧的损伤。佛手散可以升高SOD和GSH-Px的水平并且降低MDA的含量，但是对于更深层次的机制还需进一步的研究。

4 对神经退行性疾病的作用

阿尔茨海默病(AD)和帕金森病(PD)是两种最常见的神经退行性疾病，且患病率随着年龄的增长而明显增加。对于PD，目前公认的病理主要是黑质纹状体多巴胺能神经元缺失，导致纹状体多巴胺耗竭，而β淀粉样蛋白(Aβ)沉积和tau蛋白过度磷酸化是AD的主要病理特征。

曹方引等[41]发现当归挥发油联用川芎挥发油可以显著改善利血平引起的小鼠肛温下降和运动不能模型。在体外酶活性实验中，还发现这两种挥发油对人单胺氧化酶-A(hMAO-A)和人单胺氧化酶-B(hMAO-B)均有竞争性抑制作用且配伍使用时对其活性的抑制作用明显加强，表明佛手散在治疗PD的机制可能与抑制hMAO活性有关。

鲁佳[42]发现佛手散减少了APP/PS1双转基因小鼠大脑中的Aβ沉积、脂多糖(LPS)和丙二醛(MDA)的水平、碱性磷酸酶(AP)的活性；降低了血清和肝脏中LPS和MDA的水平、AP活性；降低肠道中AP活性、MDA水平和大肠杆菌数量；降低了粪便中的LPS水平以及增加肠道中的乳酸杆菌数量，简言之，佛手散可能通过调节脑-肝-肠轴的小分子从而缓解APP/PS1模型小鼠的认知功能障碍。

5 对血虚血瘀证的作用

血虚证，指血液亏少，不能濡养脏腑、经络、组织。李伟霞等[43]联合使用乙酰苯肼和环磷酰胺复制小鼠血虚模型，对小鼠进行佛手散给药7 d后，通过代谢组学方法分析各组小鼠的血浆样品，发现并鉴定了22个潜在生物标志物及相关的硫胺代谢、花生四烯酸代谢、鞘脂类代谢等11条代谢通路。黄美艳等[44]发现佛手散的醇提物对此类血虚模型的小鼠的造血功能和免疫功能具有着改善作用，主要表现在增加体质量、脾脏及胸腺的重量，降低肝脏肿胀水平，提高SOD活性和肝脏总抗氧化能力(T-AOC)能力，并且具有最佳效果的是40%浓度的乙醇。

血瘀证是中医常见的证候，指的是阻塞的病理生理状态血液循环和异常血流，是由全身或局部组织器官的缺血和缺氧、血液循环障碍和血液黏度异常引起的。研究发现采用冰水浴结合皮下注射盐酸肾上腺素法复制急性血瘀大鼠模型，通过代谢组学方法对大鼠尿液进行分析，发现11个潜在生物标志物和3条主要的代谢通路：鞘脂类代谢、苯丙氨酸代谢和色氨酸代谢[45]。鲁建武等[46]发现佛手散能够降低此类急性血瘀模型大鼠的红细胞聚集指数、红细胞电泳指数和全血黏度等指标。在正常大鼠中，佛手散还能降低血小板聚集率和血小板黏附率, 升高红血小板数、细胞数和血红蛋白浓度，提示佛手散有显著的活血化瘀及补血养血的作用。佛手散虽对血虚血瘀有着一定作用，但其详细的作用机制却不得知，其具体的机制有待进一步的研究。

6 对肝微粒体酶活性的影响

佛手散除了以上研究外，对肝微粒体的影响亦有涉及。研究发现，增加了延胡索的加味佛手散胶囊对体外大鼠肝微粒体CYP2D6、CYP2D2、CYP2E1、CYP3A1/2、CYP3A4的酶活性有抑制作用，但单独使用阿魏酸、川芎嗪、延胡索乙素则无抑制作用[47-50]；此复方在体外人肝微粒的实验中，对CYP2D6、CYP2E1和CYP3A4酶活性可能有抑制作用；在大鼠体内实验还能显著增加CYP2C6、CYP2C9、CYP3A1/2、CYP1A2,、CYP3A4的酶活性。研究者还发现延胡索乙素与阿魏酸、川芎嗪联合使用后，能显著降低延胡索乙素对大鼠的肝毒性。然而，CYP3A4和CYP3A1/2在体外抑制，在大鼠体内则是增强作用，尚芳红等[50]认为体外实验是单次给药, 体内实验则是多次给药, 大鼠具有反馈调节机制，而CYP3A4在大鼠体内的诱导和人肝微粒体外的抑制则有可能是由于人和大鼠有着物种差异。佛手散及其配伍的药理作用和机制整理见表1。