甘草乙醇提取液对獭兔离体小肠运动机能的影响
2022-10-08李月勤张利卫李雯青谢晓程
王 军,李月勤,张利卫,李雯青,谢晓程
(河南牧业经济学院,河南 郑州 450046)
甘草属于豆科植物,主要含有甘草甜素和甘草次酸[1],其主要功效是清热解毒、补脾益气、止咳、止痛、调和药性,有抗炎和提高机体免疫力的作用[2]。2020年,冯镜来等[3]给腹泻模型组小鼠灌注甘草水提物极显著降低小鼠的腹泻率;2018年,柳香香等[4]报道甘草体外试验对金黄色葡萄球菌有明显的抑菌作用;2007年,唐光华等[5]研究表明,甘草能使小鼠肺炎模型组肺组织中的IFN-γ、TNF-ɑ、IL-6和IL-10显著降低,表明甘草可以调节炎性因子的分泌从而起到抗炎和提高机体免疫力的作用。临床上,甘草常与瓜蒌配合可以治疗鸡的肺热咳嗽、痰液黏稠和白痢等疾病[6,7]。甘草对于胃肠道运动影响的研究较少。本实验对比甘草乙醇提取液对獭兔的小肠运动影响,旨在探明甘草乙醇提取液对小肠平滑肌运动的作用,为甘草在临床上的应用提供依据。
1 材料与方法
1.1 实验动物
健康獭兔10只,雌雄各半,体重(2±0.5) kg,由河南牧业经济学院实验动物中心提供。
1.2 实验材料
BL-420E生物机能实验系统,FT-100生物张力传感器,HW-400E型恒温平滑肌槽(均为成都泰盟软件有限公司生产),电热恒温水浴锅(天津市泰斯特仪器有限公司),10-1000 μL移液枪,台式液,乙醇,1∶100000氯化乙酰胆碱,硫酸阿托品,1∶1000肾上腺素。
1.3 甘草乙醇提取液
称取甘草20 g放入圆底烧瓶,加入70 %的乙醇150 mL,浸泡1小时,在温度为80 ℃的水浴锅中加热回流1小时,过滤;在滤渣中加入70%的乙醇150 mL,加热回流1小时,过滤。合并两次滤液,放置在旋转蒸发仪中80 ℃浓缩,定容至20 mL,最后进行高温高压灭菌,得到1 g/mL的甘草药液。
1.4 獭兔离体小肠标本的制备
将獭兔处死,迅速打开腹腔将肠道沿肠壁分离肠系膜,用台氏液将肠内容物冲洗干净,置于台氏液中备用,用时将肠管剪成1-2 cm的小段。打开BL-420E生物机能实验系统,调零,定标。将张力换能器与输入口连接,设置参数。分别将制作好的标本两端穿线系紧,一端系于通气钩上,另一端系于换能器上,轻轻放入盛有台氏液的恒温麦氏浴槽中,温度控制在37±0.5 ℃,缓慢通入氧气(95%氧气与5%二氧化碳混合气体),通入气泡的速度应保持不冲动标本。悬挂的标本要保证不与加药管的内壁接触,处于完全悬空状态,平衡十分钟,待曲线稳定后开始试验[8-10]。
1.5 数据处理
2 结果
2.1 甘草乙醇提取液对獭兔离体肠管运动的影响
实验结果如图1和表1所示。甘草乙醇提取液具有明显的抑制十二指肠张力的作用。加入100μL甘草乙醇提取液时,獭兔离体十二指肠的振幅有明显的减小,与正常肠管的运动相比较,差异极显著(P<0.01)。与用药前相比,加入甘草乙醇提取液,可使獭兔离体空肠和回肠的平滑肌自发性收缩运动减弱,表现为獭兔离体空肠和回肠的张力极显著降低(P<0.01)、收缩幅度极显著减小(P<0.01),十二指肠和空肠的收缩频率减慢,但无明显差异(P>0.05),回肠的收缩频率极显著降低(P<0.01)。实验后灌流离体肠管,肠管可逐渐恢复至加药前的运动波形。
图1 甘草乙醇提取液对獭兔离体十二指肠张力的影响
表1 甘草乙醇提取液对獭兔离体肠管运动的影响
2.2 乙酰胆碱作用下甘草乙醇提取液对獭兔离体肠管运动的影响
结果如图2和图3所示。加入100 μL乙酰胆碱后可以引起獭兔离体十二指肠、空肠和回肠的收缩张力增强;在此基础上,加入100 μL甘草乙醇提取液后,与加样前比较,獭兔离体十二指肠和空肠收缩张力极显著降低(P<0.01),收缩振幅极显著减小(P<0.01),再次加入同等剂量的乙酰胆碱后,与加入甘草乙醇提取液相比较,獭兔离体十二指肠和空肠收缩张力极显著提高(P<0.01),收缩振幅极显著增大(P<0.01),但是,回肠的收缩张力和收缩幅度变化均不明显(P>0.05)。
图2 乙酰胆碱作用下甘草乙醇提取液对獭兔离体肠管收缩张力的影响
图3 乙酰胆碱作用下甘草乙醇提取液对獭兔离体肠管收缩振幅的影响
3 讨论
小肠是动物体内消化和吸收的主要场所,消化和吸收与小肠的运动存在密切的联系,而小肠的运动是由平滑肌的收缩引起的。平滑肌在消化道壁内神经丛的作用下,静息电位达到阈电位进而触发动作电位,从而引起小肠平滑肌的收缩活动,这就是消化道平滑肌的自律性。这种运动受到机械、药物和温度等因素的影响。离体肠段在模拟体内的条件下可继续维持收缩的生理特性[11,12]。
甘草作为中医补气药,主要用于补脾益气、清热解毒、缓急止痛、调和药性,兽医临床上常用于治疗动物脾胃虚弱之便秘或腹泻等。本实验结果表明,甘草乙醇提取液对獭兔离体十二指肠、空肠和回肠平滑肌的收缩张力和振幅具有明显的抑制作用。
乙酰胆碱是典型的胆碱能神经介质,乙酰胆碱作用于毒蕈碱型(M)受体,可产生M样作用,表现为消化道平滑肌运动增强、消化腺分泌增强等。临床上消化道平滑肌运动过强往往会导致腹痛、恶心、腹泻等症状。乙酰胆碱的作用机制是小肠平滑肌上的M受体与乙酰胆碱结合,最终导致Ca2+通道开放,使Ca2+内流增多,产生动作电位增多,引起肠道运动加快[13]。乙酰胆碱会提高肠道慢波电位的频率和幅度,从而引起动作电位的频率增加,同时可以观察到小肠平滑肌的收缩活动增强。本实验发现,甘草乙醇提取液对乙酰胆碱引起的獭兔离体肠道收缩有显著的解痉作用,但未能对后续加入的乙酰胆碱产生持续作用,提示甘草乙醇提取液对獭兔离体肠道的作用机制可能不是通过M受体实现。甘草乙醇提取液对獭兔小肠的作用是否直接作用于平滑肌,以及其对獭兔消化功能的影响如何,有待进一步的研究。