甘毕舒中盐酸小檗碱薄层鉴别方法的改进研究

王欢，李彩虹，赵新茹，柳亚茹，赵军彦，刘朝阳

（石家庄市九洲兽药有限公司 石家庄 050699）

小檗碱能迅速灭杀机体中革兰氏阳性菌、革兰氏阴性菌、真菌、霉菌、病毒等，达到清热解毒，抗炎止泻的效果，所以小檗碱不仅是甘毕舒的鉴别项，还是成方制剂的主要药效成分之一。有文献报道采用高纯度的盐酸小檗碱，未测出口服小檗碱的LD，故甘毕舒中盐酸小檗碱安全无毒副作用，具有清热解毒，抗炎止泻的功效。

关于中药成方制剂中盐酸小檗碱的薄层鉴别，已有《兽药质量标准》（2017 年版中药卷）《中华人民共和国兽药典》（2020 年版第二部）收录及很多文献报道，各种方法中供试品的制备、展开剂系统的选择具有一定的变化，参照文献经多次试验，发现用甲醇处理供试样品并以环乙烷-乙酸乙酯-异丙醇-甲醇-水-三乙胺（3:3.5:1:1.5:0.5:1）为展开剂效果更好，各组分分离理想，相同位置显相同颜色荧光斑点，专属性好，重复性好。

1 仪器、试剂和药品

1.1 仪器设备

DK-98-1 型电热恒温水浴锅（天津市泰斯特仪器有限公司生产）；ZF-I 型三用紫外分析仪（上海顾村电光仪器厂生产）；硅胶G板（青岛海洋化工厂分厂）。

1.2 试验试剂

无水乙醇（分析纯，天津市康科德科技有限公司生产，批号220401）；无水甲醇（分析纯，天津市科密欧化学试剂有限公司生产，批号20210802）；苯（分析纯，天津市科密欧化学试剂有限公司生产，批号20210308）；乙酸乙酯（分析纯，天津欧博凯化工有限公司生产，批号2021 年12 月1 日）；异丙醇（HPLC，天津市科密欧化学试剂有限公司生产，批号20180824）；氨水（分析纯，天津欧博凯化工有限公司生产，批号2021 年6 月1 日）；环己烷（分析纯，天津欧博凯化工有限公司生产，批号2021 年7 月16 日）；三乙胺（分析纯，天津欧博凯化工有限公司生产，批号2021 年05 月27 日）

1.3 实验药品

盐酸小檗碱对照品：批号为wkq21022004，含量97.8%，四川省维克奇；甘毕舒：批号202201190，石家庄市九洲兽药有限公司。

2 实验与结果

2.1 甘毕舒中小檗碱鉴别方法

取本品5mL，加无水乙醇5mL，充分摇匀，作为供试品溶液。另取盐酸小檗碱对照品，加甲醇制成每1mL 含0.5mg 的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法（2017 年《兽药质量标准》中药卷，附录0502）试验，吸取供试品溶液5μL，对照品溶液2μL，分别点于同一硅胶G 薄层板上，以苯-乙酸乙酯-甲醇-异丙醇-浓氨试液（6:3:1.5:1.5:0.5）为展开剂，置氨蒸汽预饱和的展开缸内，展开，取出，晾干，置紫外光灯（365nm）下检视。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。

2.2 甘毕舒中小檗碱鉴别改进方法

取本品5mL，加甲醇5mL，充分摇匀，作为供试品溶液。另取盐酸小檗碱对照品，加甲醇制成每1mL 含0.5mg 的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法（2020 年《中华人民共和国兽药典》第二卷，附录0502）试验，吸取供试品溶液2μL，对照品溶液2μL，分别点于同一硅胶G 薄层板上，以环乙烷-乙酸乙酯-异丙醇-甲醇-水-三乙胺（3:3.5:1:1.5:0.5:1）为展开剂，置氨蒸汽预饱和的展开缸内，展开，取出，晾干，置紫外光灯（365nm）下检视。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。

2.3 甘毕舒中小檗碱鉴别改进方法专属性考察

取缺黄柏的9 味药材按照三黄翁口服液质量标准制备缺黄柏阴性对照溶液。分别取甘毕舒和缺黄柏的阴性对照口服液，分别按照“2.1、2.2”项下的方法制备供试品溶液和阴性对照供试品溶液，再进行点样，展开、显色。

2.4 甘毕舒中小檗碱鉴别改进方法重复性考察

按照“2.2”的方法制备6 份供试品溶液，分别点样，展开、显色。

2.5 甘毕舒中小檗碱的薄层鉴别

由图1 可知，盐酸小檗碱对照品斑点与甘毕舒中盐酸小檗碱的斑点显色模糊，其他位置分离不理想，阴性对照品在盐酸小檗碱的相应位置较高处有类似颜色的模糊斑点，对甘毕舒盐酸小檗碱鉴别项结果的判定影响较大。

图1 甘毕舒盐酸小檗碱薄层鉴别图谱

2.6 甘毕舒中小檗碱的薄层鉴别样品处理方法的改进

样品处理从无水乙醇改进到甲醇，由图2 可见，盐酸小檗碱和供试品显点清晰且在一条直线上，而阴性对照在盐酸小檗碱对应位置较高位置显类似颜色斑点，较未改进处理方法的斑点变淡，但是对甘毕舒盐酸小檗碱鉴别项结果的判定仍有一定影响。

图2 甘毕舒盐酸小檗碱薄层鉴别图谱

2.7 甘毕舒中小檗碱的薄层鉴别展开剂改进

通过参考2020 版《中华人民共和国兽药典》第二部中其他成分药剂的盐酸小檗碱薄层鉴别方法，将盐酸小檗碱鉴别项展开剂苯-乙酸乙酯-甲醇-异丙醇-浓氨试液（6:3:1.5:1.5:0.5）改为环乙烷-乙酸乙酯-异丙醇-甲醇-水-三乙胺（3:3.5:1:1.5:0.5:1），其他条件不变，进行盐酸小檗碱薄层色谱的鉴别。由图3 可见，供试品盐酸小檗碱斑点未完全分开，可视性较差，阴性对照在盐酸小檗碱位置未见相同颜色的斑点，对甘毕舒盐酸小檗碱鉴别项结果的判定有较小影响。

图3 甘毕舒盐酸小檗碱薄层鉴别图谱

2.8 甘毕舒中小檗碱的薄层鉴别样品处理方法和展开剂的改进

用改进后样品处理方法和展开剂薄层鉴别如图4，供试品各组方分离理想，盐酸小檗碱对应位置显清晰可见的相同颜色的荧光斑点，阴性对照在对应位置未见相同颜色的荧光斑点，盐酸小檗碱对照品斑点与甘毕舒中盐酸小檗碱的斑点在一条直线上，显相同的荧光斑点，供试品各组分分离清晰容易判断，阴性对照薄层鉴别无干扰，专属性良好。

图4 甘毕舒盐酸小檗碱薄层鉴别图谱

2.9 甘毕舒中小檗碱的薄层鉴别重复性考察

通过制备6 份甘毕舒供试品，按改进后方法进行重复性考察，结果显示（图5），6 份供试品相应条带一一对应，且与对照品有相同荧光斑点，表明该方法的重复性好。

图5 甘毕舒盐酸小檗碱薄层鉴别图谱

3 讨论

《中华人民共和国兽药典》（2020 年版第二部）和相关文献中盐酸小檗碱薄层鉴别供试品样品多用甲醇处理，通过本试验发现在相同展开剂下甲醇处理供试品优于无水乙醇，组分分离较理想，斑点清晰可见，阴性对照存在影响薄层鉴别判断的斑点淡化，所以还需要对展开剂进行改进。本试验除采用苯-乙酸乙酯-甲醇-异丙醇-浓氨试液（6:3:1.5:1.5:0.5）为展开剂，还进行了展开剂正丁醇-冰醋酸-水（7:1:2）、乙酸乙酯-丁酮-甲酸-水（10:6:1:1）、环乙烷-乙酸乙酯-异丙醇-甲醇-水-三乙胺（3:3.5:1:1.5:0.5:1）的鉴别试验，发现以环乙烷-乙酸乙酯-异丙醇-甲醇-水-三乙胺作为展开剂比使用苯-乙酸乙酯-甲醇-异丙醇-浓氨试液目标斑点展开清晰可见，斑点分离效果好，专属性良好，重现性好，安全环保，可视性好，效果满意。该方法可作为甘毕舒的盐酸小檗碱的薄层鉴别方法及为甘毕舒做特征图谱提供方法。