桑叶中桑叶多糖检测方法的探究
2022-09-20刘涵袁焕青赵俊芳张伟伟康梦雅王悦
刘涵，袁焕青，赵俊芳，张伟伟，康梦雅，王悦
(河北象大合众生物科技有限公司，河北石家庄 050000)
近几年来，养殖业发展势头迅猛，是从传统畜牧业向现代畜牧业转变的重要时期，但我国饲料资源却面临着“三缺乏一不足”。 精饲料、蛋白质饲料、绿色饲料缺乏和饲料总量不足。 现代药理研究表明桑叶含有18 种氨基酸和丰富的微量元素。桑叶中的多糖类及黄酮类等功能性成分对畜禽具有免疫保健作用， 能够防止禽流感的发生，提高畜禽的抗病能力，有利于畜禽保持健康快速的生长。目前正定县种植桑叶的面积已经达到数万亩，有丰富的桑叶资源。 大量的桑叶作为桑树的附属物没有得到有效的利用，造成资源浪费及环境污染。目前对桑叶进行深加工领域研究比较匮乏， 我们利用自身中兽药深加工的优势，结合现代化加工提取工艺， 进行了研发的创新。同时，也与一些科研机构和院校加强合作，共同探索桑叶提取工艺、桑叶提取物制剂工艺、桑叶提取物喷粉工艺的推广应用和桑叶提取物-桑叶多糖检测标准的研究。共同探索解决现代规模化养殖中的抗生素乱用、 疾病难控等重大难题，减少抗生素在食品动物中的使用，提升行业食品安全，减少环境的污染。
河北象大合众生物科技有限公司根据国家政策及行业的发展趋势提出了“无抗养殖”和“大保健”理念；研发治疗疾病替代产品和新型植物提取物类饲料添加剂产品的发展规划。 近年来，一些国内学者曾研究过不同水平的桑叶粉饲喂畜禽对其生产性能及肉品质的影响，但因为研究所用桑叶品种、来源、营养成分和添加比例各不相同，造成所得的结果存在差异。 而桑叶经过提取浓缩喷粉干燥后的桑叶粗提物在国内的使用鲜有报道，并且桑叶粗提物国家没有生产、检测等方面的标准。
目前， 通过对桑叶多糖产品生产工艺的优化，由国家权威检测机构进行了检测验证，并且在河北象大合众生物科技有限公司的应用示范基地进行了应用推广。 检测验证试验结果表明，本方法针对桑叶多糖产品的分析结果可靠，检测灵敏度和准确度均达到测定标准。
1 范围
规定了桑叶提取物产品要求、 试验方法、检验原则、标签、包装、运输、贮存和保质期。
2 主要技术内容
2.1 技术指标
2.2 试剂和材料
项目 指标鉴别 符合规定水分 ≤4.0%灰分 ≤2.0%含量 ≥20%
2.2.1 试剂
本法所用试剂均为分析纯， 水为去离子水，符合GB/T6682-2008 二级水的规定。
2.2.1.1 甲醇
2.2.1.2 乙酸乙酯
2.2.1.3 甲酸
2.2.1.4 氯仿
2.2.1.5 10%硫酸乙醇溶液2.2.1.6 5%苯酚溶液
2.2.1.7 硫酸
2.2.2 仪器和设备
2.2.2.1 紫外可见—分光光度计2.2.2.2 电子分析天平
2.2.2.3 电热恒温水浴锅
2.3 检测方法
2.3.1 性状：本品为浅褐色至棕褐色粉末。
2.3.2 鉴别
取本品加甲醇制成37.0%溶液作供试液。取桑叶标准对照药材1.0 克加甲醇30 毫升， 超声提取30 分钟，滤液浓缩至1 毫升作对照液。取上述二液各10 微升， 分别点于同一硅胶G 板，一次点二板。
2.3.2.1 以甲苯-乙酸乙酯-甲酸 （5:2:1）展开，紫外灯365 纳米检视。
2.3.2.2 以氯仿-甲醇-水（75:35:4）展开，喷10%硫酸乙醇溶液，热风吹显。
以上二板，荧光斑点和可见光斑点对应率≥80%。
2.3.3 水分
按照GB/T6435-2014 中固体样品检测方法检测
2.3.4 灰分
按照GB/T6438-2007 检测方法检测
2.3.5 含量测定
2.3.5.1 标准溶液配制
葡萄糖标准溶液：精密称取105℃干燥至恒重的葡萄糖对照品适量，加水制成0.1 毫克/毫升的溶液，即得。
2.3.5.2 试样处理
精密称取试样20 毫克至250 毫升量瓶中，用水稀释至刻度，摇匀，即得供试品溶液。
2.3.5.3 标准曲线制备
精密量取对照品溶液0.2 毫升、0.4 毫升、0.6 毫升、0.8 毫升、1.0 毫升分别置于具塞试管中，分别加水至2.0 毫升，各精密加入5%苯酚溶液1 毫升，摇匀，迅速精密加入硫酸5 毫升，摇匀，放置10 分钟，置40℃水浴中保温30 分钟，取出后迅速冷却置室温，以相应的试剂为空白。按紫外-可见分光光度法，在490 纳米处测定吸光度，以吸光度为纵坐标，浓度为横坐标，绘制标准曲线，并求得回归方程。
2.3.5.4 样品测定
精密量取1 毫升， 置于具塞试管中， 加水1.0 毫升，精密加入5%苯酚溶液1 毫升，摇匀，迅速精密加入硫酸5 毫升，摇匀，放置10 分钟，置40℃水浴中保温30 分钟，取出后迅速冷却置室温，以相应的试剂为空白，在490 纳米处测定吸光度， 从标准曲线上读出供试品溶液中含葡萄糖的量（毫克），计算，即得。
分析结果表述
X——样品中桑叶多糖含量，克/100 克（毫升）
C——标准曲线上读取的浓度，毫克/毫升
V——样品定容体积，毫升
M——试样取样量，克（毫升）
3 标签、包装、运输、贮存和保质期
3.1 标签
应符合GB10648 规定。
3.2 包装
本品装入铝箔聚乙烯袋等适当材料的包装袋中。
3.3 运输
运输过程中，不得与有毒、有害、有污染和有放射性的物质混放混载，防止日晒雨淋。
3.4 贮存
本品应贮存在避光、通风、干燥处。
3.5 保质期
本品在规定的包装、贮存条件下，保质期为24 个月。
