血浆微小RNA-126与微小RNA-130对急性心肌梗死急诊经皮冠状动脉介入治疗术后的预后评估价值

梁丽艳, 若扎·包拉特江, 刘顺民, 王盛芳

(新疆医科大学第二附属医院 心血管内科, 新疆 乌鲁木齐, 830028)

急性心肌梗死是临床常见的危急重症，经皮冠状动脉介入治疗(PCI)是治疗该病的有效方法，能够有效降低病死率及致残率，但仍有部分患者近期内手术治疗效果不佳，出现主要不良心血管事件(MACE)或死亡病例[1]。因此，需要为PCI术后急性心肌梗死患者探寻一种影响预后的有效因子，以改善患者预后。心电图改变、心肌标志物、N端脑钠肽前体(NT-ProBNP)等能够评估急性心肌梗死患者的预后，但其受饮食、检测时间、运动等因素的影响[2-3]。血浆微小核糖核酸(miRNA)是一种新发现的非编码RNA，对蛋白质无编码作用，但结合目的信使调节相关基因表达在细胞增殖、分化、凋亡等过程中占据着重要作用，并能调控机体多种生物学功能[4], 其中miR-126与miR-130是miRNA的重要类型。研究[5-6]表明, miR-126与miR-130参与了肿瘤、炎症反应等疾病的发生发展过程。因此，本研究初步分析血浆miR-126与miR-130对急性心肌梗死急诊PCI术后的预后诊断价值，旨为以后临床预后评估提供参考，现报告如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料

选取2018年1月—2021年1月收治的170例急性心肌梗死患者作为研究对象，其中男102例，女68例; 年龄45～76岁，平均(62.38±3.98)岁; 抬高型急性心肌梗死100例，非抬高型70例; 高血压88例，糖尿病50例，高脂血症32例; PCI术后心功能Killip分级为Ⅰ级74例, Ⅱ级58例, Ⅲ级38例。本研究经医院伦理委员会审批，患者自愿参与本研究，并签署知情同意书。纳入标准: ① 经心电图、心脏超声等综合检查，符合急性心肌梗死诊断标准[7]者; ② 无其他心脏病史者; ③ 急性胸痛时间<12 h, 且自愿行PCI者; ④临床资料及随访资料完整，无脱落、失访者; ⑤ 患者对本研究知情，并签署知情同意书。排除标准: ① 合并心力衰竭、心律失常、冠心病等其他心脏病史者; ② 伴脑、肝、肾等重要脏器疾病者; ③ 恶性肿瘤者; ④ 伴免疫系统疾病、结缔组织疾病、血液疾病、急慢性感染者; ⑤ 曾有心脏外科手术史者。将170例急性心肌梗死患者设为病例组，将60例无心肌梗死、高血压、糖尿病等基础疾病的身体健康体检者纳入对照组。将术后30 d发生MACE的患者纳入近期预后不良组，将未发生MACE的患者纳入近期预后良好组。出院后患者均通过电话随访或到门诊复查，统计术后12个月MACE的发生情况，将术后12个月发生MACE的患者作为远期预后不良组，未发生MACE的患者作为远期预后良好组。

1.2 方法

2组受检者均在入院即刻采集静脉血5 mL, 置入抗凝分离胶管内，离心5 min, 3 000转/min, 采用湘仪TDZ5-W5离心机，离心半径为8 cm, 分离后采集血浆，置入无RNA酶离心管，置入-80 ℃冰箱内保存待检。取冻存的血浆，采用聚合酶链式反应(PCR)检测血浆miR-126与miR-130水平。采用实时荧光定量PCR扩增仪器(Series 4′A2型，赛默飞)，总RNA提取试剂盒(美国Invitrogen公司)、miRNeasy Mini KiU试剂盒(德国Qiagen公司)，提取样本中miRNA，采用紫外分光光度计测定miRNA纯度，合格样品A260/A280≥1.80样品，采用PCR法测定血浆miR-126与miR-130水平。引物及内参引物为U6, miR-126上游引物序列: 5′-GGCTTCGTACCGTGAGTAAT-3′, 下游引物序列: 5′-GTGCAGGGTCCGAGGT-3′; miR-130上游引物序列: 5′-GCTTCGGGAGGACATATACTAAAAT-3′, 下游引物序列: 5′-CGCTTCACGAATTTGCGTGTCAT-3′。反应体系为95 ℃, 15 s; 退火为60 ℃, 20 s; 延伸70 ℃, 60 s, 连续40个循环。每个实验样本均设置复孔。采用ABI7000 System Software分析研究数据, Ct值作为样本表达量，以2-△△Ct计算血浆miR-126与miR-130的相对表达水平。

1.3 观察指标

① 比较病例组与对照组患者血浆miR-126与miR-130的相对表达水平。② 比较近期预后不良组与近期预后良好组患者血浆miR-126与miR-130的相对表达水平; 比较远期预后不良组与远期预后良好组患者血浆miR-126与miR-130的相对表达水平。③ 记录急性心肌梗死患者PCI术后30 d MACE的发生率，MACE定义为住院或随访期间再发心肌梗死、支架内再血栓、靶血管血运重建、支架内再狭窄、死亡等。④ 急性心肌梗死患者术后均经心脏超声检查，记录左室射血分数(LVEF)。在室内质控下检测血清NT-ProBNP、肌钙蛋白T(CTnT)水平，分析血浆miR-126与miR-130的相对表达水平与LVEF、NT-ProBNP、CTnT的相关性。

1.4 统计学方法

2 结 果

2.1 2组血浆miR-126与miR-130的相对表达水平比较

病例组血浆miR-126相对表达水平低于对照组, miR-130相对表达水平高于对照组，差异有统计学意义(P<0.05), 见表1。

表1 病例组与对照组相关实验室指标水平比较

2.2 近期不同预后组和对照组实验室指标水平比较

170例急性心肌梗死患者术后30 d, 无死亡病例，术后心肌梗死复发6例，支架内再血栓10例，靶血管血运重建4例，支架内再狭窄6例，总发生率为15.29%; 近期预后不良组患者LVEF低于近期预后良好组, NT-ProBNP、cTnT表达水平高于近期预后良好组，差异有统计学意义(P<0.05)。近期预后不良组和近期预后良好组LVEF、NT-ProBNP、cTnT表达水平与对照组比较，差异有统计学意义(P<0.05), 见表2。

表2 不同组别LVEF、NT-ProBNP、cTnT表达水平比较

2.3 近期不同预后组和对照组血浆miR-126与miR-130的相对表达水平比较

近期预后不良组患者血浆miR-126相对表达水平低于近期预后良好组, miR-130的相对表达水平高于近期预后良好组，差异有统计学意义(P<0.05)。近期预后不良组和近期预后良好组血浆miR-126和miR-130相对表达水平与对照组比较，差异有统计学意义(P<0.05), 见表3。

表3 不同组别血浆miR-126与miR-130的相对表达水平比较

2.4 远期不同预后组和对照组血浆miR-126与miR-130的相对表达水平比较

170例急性心肌梗死患者术后随访1年, 2例术后因心力衰竭死亡，心肌梗死复发10例，支架内再血栓12例，靶血管血运重建6例，支架内再狭窄10例，总发生率23.53%; 远期预后不良组和远期预后良好组血浆miR-126、miR-130的相对表达水平比较，差异无统计学意义(P>0.05), 但2组血浆miR-126、miR-130的相对表达水平与对照组比较，差异有统计学意义(P<0.05), 见表4。

表4 远期不同预后患者和对照组血浆miR-126和miR-130的相对表达水平比较

2.5 血浆miR-126和miR-130相对表达水平与实验室指标相关性

Pearson相关分析法结果显示, miR-126相对表达水平与LVEF呈正相关(r=0.635,P=0.010), 与NT-ProBNP、cTnT呈负相关(r=-0.710, -0.495,P=0.004, 0.012); miR-130的相对表达水平与LVEF呈负相关(r=-0.682,P=0.010), 与NT-ProBNP、cTnT呈正相关(r=0.672, 0.512,P=0.010, 0.016)。

2.6 血浆miR-126与miR-130的相对表达水平对患者近期、远期预后的诊断效能

血浆miR-126与miR-130的相对表达水平对患者近期预后有一定诊断效能，血浆miR-126 的曲线下面积(AUC)为0.966, 敏感度为95.8%, 特异度为92.3%, 最佳截断值为1.47; miR-130的AUC为0.764, 敏感度为88.9%, 特异度为61.5%, 最佳截断值为1.86, 差异有统计学意义(Z=3.128，P=0.018)。血浆miR-126预测术后12个月MACE预后的AUC为0.528, 敏感度为85.0%, 特异度为29.2%, 最佳截断值为1.57; miR-130预测术后12个月MACE预后的AUC为0.543, 敏感度为70.8%, 特异度为45.0%, 最佳截断值为1.64。术后12个月，血浆miR-126和miR-130预测MACE预后的敏感度、特异度低，差异无统计学意义(Z=0.167,P=0.867), 见图1、图2。

3 讨 论

PCI是治疗急性心肌梗死的主要手段，但患者术后仍会出现MACE事件，影响术后生存质量。研究[8]表明，急性心肌梗死与感染密切相关，降钙素原(PCT)、NT-ProBNP、cTnT的表达可有效预测患者预后。患者炎症水平上升，心肌细胞损伤严重，心室舒缩功能越差，发生MACE的概率越高。但PCT、cTnT等相关表达受诸多因素影响，因此急性心肌梗死的诊断受到一定限制。因此，需探寻一种合理、有效的诊断指标以预测患者PCI术后预后价值，为以后临床治疗提供参考。

miRNA参与各种基因的表达、蛋白质翻译及靶RNA调控过程，并与细胞增殖、分化及转移等过程有关，因此miRNA相对表达水平对诊断疾病类型及预后价值有一定意义[9-10]。本研究结果显示，病例组血浆miR-126相对表达水平低于对照组, miR-130相对表达水平高于对照组，差异有统计学意义(P<0.05); Spearman相关法分析显示, miR-126相对表达水平与LVEF呈正相关，与NT-ProBNP、cTnT呈负相关; miR-130的相对表达水平与LVEF呈负相关，与NT-ProBNP、cTnT呈正相关(P<0.05)。研究结果发现，急性心肌梗死患者血浆miR-126相对水平降低，miR-130相对表达水平增加，且与患者心肌损伤有一定关系，原因为miR-126是一种内皮细胞特异度miRNA，参与内皮细胞增殖、血管因子生成等过程，并对血管发育、血管炎症反应等血管病理、生理等过程起调节作用[11]。miR-130通过抑制特异度靶基因的表达有效调控血管生成过程，上调miR-130基因表达，促进平滑肌细胞的增殖与迁移[12]。心肌梗死患者通常存在的血管内皮受损、内皮细胞增殖等情况会导致血浆miR-126、miR-130相对表达异常。浩日瓦等[13]研究指出, miR-126诊断心衰的灵敏度为55%, 特异度为85%, 准确度为87%, 但对患者1年预后的预测无重要意义。张海涛等[14]研究指出，冠心病、急性心肌梗死患者miR130a-3p上调表达差异显著，且与心血管疾病的发生发展关系密切，证实了血浆miR-126与miR-130可作为诊断心肌梗死新的生物学标志物。

血浆miR-126与miR-130的相对表达水平对患者近期预后有一定诊断效能，两者的敏感度、特异度差异有统计学意义(P<0.05), 但对患者术后12个月MACE预后评估的敏感度、特异度低(P>0.05)。因此，血浆miR-126与miR-130相对表达水平预测患者近期预后有一定效果，但无法预测患者远期预后，原因为miR-126可调节机体血管炎症反应及内皮细胞增殖、分化，若其含量下降，白细胞、血管内皮细胞在血管壁的黏附性加强，导致术后血栓形成、支架内狭窄等现象; 体内血管炎症反应加重、平滑肌细胞显著增殖会使miR-130表达水平升高，促进动脉粥样硬化的形成[15-19]。但miR-130、miR-126表达水平有一定波动性，此时术后时间延长可能使其表达水平不同，无法作为远期预后的预测因子。

综上所述，血浆miR-126与miR-130对急性心肌梗死急诊PCI术后近期预后有一定的评估价值，并可作为早期诊断急性心肌梗死的有效指标，但血浆miR-126与miR-130不能作为患者远期预后评估的生物学标志物，具体机制有待进一步探讨。此外，本研究病例数较少，且患者术后随访时间仅为1年，因此存在一定局限性。另外，患者术后康复活动、饮食及基础病症等是否会影响血浆miR-126与miR-130的表达也未进行评价。因此，需要增加样本量，探讨血浆miR-126与miR-130参与急性心肌梗死发病及术后预后的具体机制。