汉族人群原发性开角型青光眼CDKN2B 基因rs1063192 位点基因型分布及其与rs1063192多态性的关系

陆宇清 王 玲 徐 静 李乐超 蔡 鑫▲

1.江苏省海安市人民医院眼科，江苏海安 226600；2.江苏省无锡市人民医院眼科，江苏无锡 214023；3.江苏省苏州市第九人医院眼科，江苏苏州 215000；4.江苏省徐州市中心医院神经内科，江苏徐州 221000

原发性开角型青光眼（primary open-angle glaucoma，POAG）是一种常见的眼科疾病，临床主要表现为眼压高、特征性视神经萎缩及视野缺损，可导致患者视力丧失[1-3]。由于POAG 缺乏典型的临床症状，患者初期容易被误诊，常失去最佳治疗时期[4-5]。研究发现，POAG 可能与遗传、高血压等多种复杂因素有关，患者视盘面积/垂直杯盘比值的改变早于视野的改变，并且具有一定的遗传度[6-7]。数据调查显示，POAG 在家族人群中的发病率是一般人群的6 倍[8]。有研究报道，CAV1、CAV2、TMCO1、CDKN2B 等多种基因或位点可能与POAG 发病有关[9]，其中，CDKN2B 是细胞周期蛋白依赖性激酶抑制剂2B，可通过转化生长因子β 信号通路调节细胞增殖、分化及凋亡[10]。rs1063192位于CDKN2B 基因3’非翻译区域，而3’非翻译区域具有微RNA 或干扰小RNA 的结合靶点，对蛋白表达具有调控作用[11]。然而，CDKN2B 基因rs1063192 多态性与汉族人群POAG 的关联性尚不清楚，故本研究比较汉族人群中不同病理特征POAG 患者CDKN2B 基因rs1063192 分布情况其多态性与本病的关联性。

1 资料与方法

1.1 一般资料

选取2019 年5 月至2021 年5 年江苏省海安市人民医院（以下简称“我院”）收治的98 例汉族人群POAG 患者，记为研究组，另选取同期我院体检健康者92 名作为对照组。本研究获得我院伦理委员会批准（HKL201928）。纳入标准：①符合《眼科临床指南》[12]中POAG 诊断标准；②汉族人群；③年龄18～75 岁；④资料完整。排除标准：①继发性青光眼；②患者间有血缘关系；③合并角膜炎、结膜炎等其他眼部疾病；④精神疾病；⑤恶性肿瘤；⑥心肝肾严重功能障碍。

1.2 研究方法

采集所有研究对象外周静脉血3 ml，采用全血DNA 提取试剂盒提取DNA（按照DNA 试剂盒说明书进行，试剂盒购自苏州旷远生物分子技术有限公司，货号：00719052311）。采用PCR-RFLP 技术检测CDKN2B基因rs1063192 位点多态性，引物由上海生物工程有限公司合成（正向引物：5’-GCCACTATGGACAATGCGAA-3’；反向引物：5’-TGGACCGCTAAGCACAGCCT-3’），将试剂加入PCR 管中，反应体系采用KODplus，按照如下PCR 反应条件进行扩增：95℃10 min，95℃10 s，60℃30 s，74℃30 s，连续进行40 次循环。采用373A DNA 测序仪（美国PE 公司）对PCR 产物进行测序，采用SDS 软件进行基因分型。

1.3 观察指标

①对研究组和对照组进行Hardy-Weinberg 遗传平衡检验。②比较不同临床病理特征POAG 患者CDKN2B 基因rs1063192 位点基因型分布情况。③比较研究组和对照组CDKN2B 基因rs1063192 位点的基因型及等位基因的分布情况。④分析CDKN2B 基因rs1063192 位点基因型及等位基因与汉族人群POAG 的关系。

1.4 统计学方法

采用SPSS 22.0 对所得数据进行统计学分析。计数资料采用例数/次数和百分率表示，比较采用χ2检验。采用logistic 回归分析影响因素。以P ＜0.05 为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 研究组和对照组CDKN2B 基因rs1063192 位点基因型分布的Hardy-Weinberg 遗传平衡检验

研究组和对照组基因型分布均符合Hardy-Weinberg 遗传平衡检验，CDKN2B 基因rs1063192 位点基因型实际频数与理论频数比较，差异均无统计学意义（P ＞0.05），可用于后续研究。见表1。

表1 研究组和对照组CDKN2B 基因rs1063192 位点分布基因型的Hardy-Weinberg 遗传平衡检验（例）

2.2 不同临床病理特征POAG 患者CDKN2B 基因rs1063192 位点基因型分布比较

不同年龄、青光眼家族史情况、合并高血压情况的POAG 患者CDKN2B 基因rs1063192 位点基因型分布比较，差异均有统计学意义（P ＜0.05）。见表2。

表2 不同临床病理特征POAG 患者CDKN2B基因rs1063192 位点基因型分布[例（%）]

2.3 研究组和对照组CDKN2B 基因rs1063192 位点基因型及等位基因分布比较

研究组CDKN2B 基因rs1063192 位点GG、AG 基因型频率高于对照组，G 等位基因型频率高于对照组（P ＜0.05）。见表3。

表3 研究组和对照组CDKN2B 基因rs1063192 位点基因型及等位基因分布比较

2.4 CDKN2B 基因rs1063192 位点基因型及等位基因分布与汉族人群POAG 的关系

以CDKN2B 基因rs1063192 位点基因型（AA=0，AG=1，GG=2）、等位基因（A=0，G=1）为自变量，以汉族人群POAG 发病情况（是=0，否=1）为因变量，进行多因素分析，结果显示，携带GG 基因型汉族人群POAG 发病风险是携带AA 汉族人群的3.177 倍；G等位基因携带汉族人群POAG 发病风险是携带A 等位基因汉族人群的2.751 倍（P ＜0.05）。见表4。

表4 CDKN2B 基因rs1063192 位点基因型及等位基因分布与汉族人群POAG 的关系

3 讨论

POAG 是一种典型的双侧慢性进行性视神经病变，是导致不可逆失明的第二大原因[13-16]。POAG 患者视网膜神经节细胞进行性丧失，视神经乳头凹陷，并伴有典型的视野缺损，严重影响患者正常生活[17-18]。POAG发病具有家族性聚集性，尤其是一级亲属发病率较高，可能与部分基因表达有关[19]。近年来，全基因组关联研究确定了100 种以上与POAG 相关的变异基因及与内表型相关多个位点[20-21]。分析影响POAG 发病的基因型特点对于探究其发病机制及寻求临床治疗新靶点具有重要意义。

本研究中，研究组CDKN2B 基因rs1063192 位点GG 基因型频率高于对照组，G 等位基因频率高于对照组，提示GG 基因型及G 等位基因在汉族人群POAG 发病中具有重要影响。有研究报道，视盘结构相关基因和多态位点与欧罗巴人种和亚洲人群POAG易感性有关[22]。视盘结构结构参数包括视盘面积/垂直杯盘比值，而CDKN2B 基因rs1063192 位点是与视盘面积相关的一个基因位点[23]。此外，有研究发现，位于CDKN2B（rs1063192）反义链RNA1 上的rs497759（CDKN2B-AS1）与rs1063192 接近，且与视盘结构相关，能够调节CDKN2B 和CDKN2A 基因表达[24]。本研究中，不同年龄、青光眼家族史情况、合并高血压情况的POAG 患者CDKN2B 基因rs1063192 位点基因型分布不同，提示此类人群与GG 基因型有关。临床研究表明，＞60 岁、青光眼家族史、合并高血压均是POAG 患者发病的独立危险因素，此类人群携带GG 基因型比例较高，进一步提示GG 基因型与POAG 发病有关[25-26]。本研究结果显示，CDKN2B 基因rs1063192 位点GG基因型和G 等位基因均为汉族人群POAG 发病的影响因素。CDKN2B 基因rs1063192 位点G 等位基因可能通过调节相关信号通路，调节眼中部分组织表达，进而诱发病理生理学改变，使POAG 发病风险增加[27-28]。

综上，CDKN2B 基因rs1063192 位点GG 基因型和G 等位基因可能与汉族人群POAG 发病有关，其多态性可增加汉族人群POAG 发病风险。